Name: Flash fotolyse van Gekooide verbindingen in de Cilia van olfactorische sensorische neuronen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Leer flash-fotolyse van gekooide verbindingen in de cilia van muis-olfactorische sensorische neuronen met patch-clamp opnamen. Deze methode activeert cyclisch nucleotide-gereguleerde kanalen en onthult mechanismen van reuktransductie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caged+compounds%3A+photorelease+technology+for+control+of+cellular+chemistry+and+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology.</a> Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).</li>
<li>Pifferi, S., Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+nucleotide-gated+ion+channels+in+sensory+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.</a> FEBS Lett. 580, 2853-2859 (2006).</li>
<li>Bozza, T. C., Kauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+response+properties+of+convergent+olfactory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Odorant response properties of convergent olfactory receptor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 4560-4569 (1998).</li>
<li>Hagen, V., Bendig, J., Frings, S., Eckardt, T., Helm, S., Reuter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+and+Ultrafast+Phototriggers+for+cAMP+and+cGMP+by+Using+Long-Wavelength+UV%2FVis-Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient and Ultrafast Phototriggers for cAMP and cGMP by Using Long-Wavelength UV/Vis-Activation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40, 1045-1048 (2001).</li>
<li>Kaplan, J. H., Ellis-Davies, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photolabile+chelators+for+the+rapid+photorelease+of+divalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Photolabile chelators for the rapid photorelease of divalent cations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 6571-6575 (1988).</li>
<li>Rapp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+lamp-based+irradiation+of+caged+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Flash lamp-based irradiation of caged compounds.</a> Methods. Enzymol. 291, 202-222 (1998).</li>
<li>Gurney, A. M. Flash photolysis of caged compounds. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGurney%2C+AM+%22Microelectrodes%3A+Theory+and+Applications%22">Microelectrodes: Theory and Applications</a>. Montenegro, I., Queiros, M. A., Daschbach, J. L. , Proc. NATO Adv. Study Inst. Portugal. (1991).</li>
<li>Lagostena, L., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+recordings+and+photolysis+of+caged+compounds+in+olfactory+sensory+neurons+isolated+from+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Whole-cell recordings and photolysis of caged compounds in olfactory sensory neurons isolated from the mouse.</a> Chem. Senses. 28, 705-716 (2003).</li>
<li>Boccaccio, A., Lagostena, L., Hagen, V., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+adaptation+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+does+not+require+the+activity+of+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.</a> J. Gen. Physiol. 128, 171-184 (2006).</li>
<li>Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+development+of+cyclic+nucleotide-gated+and+Ca2%2B+-activated+Cl-+currents+in+isolated+mouse+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 98, 153-160 (2007).</li>
<li>Sagheddu, C., Boccaccio, A., Dibattista, M., Montani, G., Tirindelli, R., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+concentration+jumps+reveal+dynamic+ion+selectivity+of+calcium-activated+chloride+currents+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+and+TMEM16B-transfected+HEK+293T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16B-transfected HEK 293T cells.</a> J. Physiol. 588, 4189-4204 (2010).</li>
<li>Balana, B., Taylor, N., Slesinger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenesis+and+Functional+Analysis+of+Ion+Channels+Heterologously+Expressed+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells.</a> J. Vis. Exp. (44), e2189-e2189 (2010).</li>
<li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+Responses+of+Mouse+Olfactory+Sensory+Neurons+Using+the+Air-phase+Electroolfactogram+Recording%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850-e1850 (2010).</li>
<li>Bernardinelli, Y., Haeberli, C., Chatton, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+photolysis+using+a+light+emitting+diode%3A+an+efficient%2C+compact%2C+and+affordable+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Calcium%22%5BJournal%5D)">Flash photolysis using a light emitting diode: an efficient, compact, and affordable solution.</a> Cell. Calcium. 37, 565-572 (2005).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Flash fotolyse van gekooide verbindingen in combinatie met patch-clamp opnames is een handige techniek om een ​​snelle en lokale sprongen te krijgen in de concentratie van fysiologisch actieve moleculen binnen en buiten cellen. Verschillende soorten gekooide compounds1 zijn gesynthetiseerd, en deze techniek kan worden toegepast op verschillende soorten cellen, met inbegrip van gekweekte cellen die ion kanalen die kunnen worden geactiveerd of gemoduleerd door fotolyse van enkele van de beschikbare gekooide verbindingen <...

<table border="1"><tbody><tr><th> Uitrusting </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Adapter module flitslamp aan microscoop </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> FlashCube 70 </td><td></td></tr><tr><td> Lucht tafel </td><td> TMC </td><td> MICRO-g 63-534 </td><td></td></tr><tr><td> Digitizer </td><td> Axon Instruments </td><td> Digidata 1322A </td><td></td></tr><tr><td> Data Acquisition Software </td><td> Axon Instruments </td><td> pClamp 8 </td><td></td></tr><tr><td> Data Analysis Software </td><td> WaveMetrics </td><td> Igor </td><td></td></tr><tr><td> Spiegel voor adapter module </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> M70/100 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrode houder </td><td> Axon Instruments </td><td> 1-HL-U </td><td></td></tr><tr><td> Faraday-kooi </td><td> Op maat gemaakt </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Filter kubus </td><td> Olympus </td><td> U-MWU </td><td> Excitatiefilter verwijderd </td></tr><tr><td> Flitslamp </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> JML-C2 </td><td></td></tr><tr><td> Pincet Dumont # 55 </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> 14099 </td><td></td></tr><tr><td> Glazen capillairen </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> PG10165-4 </td><td></td></tr><tr><td> Glazen bodem schaal </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> FD35-100 </td><td></td></tr><tr><td> Illuminator </td><td> Olympus </td><td> Highlight 3100 </td><td></td></tr><tr><td> Omkeermicroscoop </td><td> Olympus </td><td> IX70 </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulators </td><td> Luigs &amp; Neumann </td><td> SM I </td><td></td></tr><tr><td> Micropipet Puller </td><td> Narishige </td><td> PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> Monitor </td><td> HesaVision </td><td> MTB-01 </td><td></td></tr><tr><td> Grijsfilters </td><td> Omega Optical </td><td> varieert </td><td></td></tr><tr><td> Doelstelling 100X </td><td> Zeiss </td><td> Fluar 440285 </td><td> Ofwel Zeiss of Olympus </td></tr><tr><td> Doelstelling 100X </td><td> Olympus </td><td> UPLFLN 100XOI2 </td><td> Ofwel Zeiss of Olympus </td></tr><tr><td> Optisch UV-filter shortpass </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> SP400 </td><td></td></tr><tr><td> Patch-clamp versterker </td><td> Axon Instruments </td><td> Axopatch 200B </td><td></td></tr><tr><td> Foto Diode Assembly </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> PDA </td><td></td></tr><tr><td> Kwarts lichtgeleider </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> varieert </td><td> We maken gebruik van 600 micrometer diameter </td></tr><tr><td> Zilverdraad </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> AGT1025 </td><td></td></tr><tr><td> Zilver grond pellet </td><td> Warner instrumenten </td><td> 64-1309 </td><td></td></tr><tr><td> Xenon booglamp </td><td> Rapp Opto-elektronische </td><td> XBL-JML </td><td></td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><th> Reagens </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> BCMCM-kooi cAMP </td><td> Biolog </td><td> B016 </td></tr><tr><td> Bovine serum albumine (BSA) </td><td> Sigma </td><td> A8806 </td></tr><tr><td> CaCl2 standaard oplossing 0,1 M </td><td> Fluka </td><td> 21059 </td></tr><tr><td> Gekooide Ca: DMNP-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> D6814 </td></tr><tr><td> Cysteine </td><td> Sigma </td><td> C9768 </td></tr><tr><td> Concanavaline Een type V (ConA) </td><td> Sigma </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> Sigma </td><td> C4036 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Sigma </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> DNAse I </td><td> Sigma </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> E9884 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Sigma </td><td> E4378 </td></tr><tr><td> Glucose </td><td> Sigma </td><td> G5767 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Sigma </td><td> P3911 </td></tr><tr><td> KOH </td><td> Sigma </td><td> P1767 </td></tr><tr><td> Leupeptin </td><td> Sigma </td><td> L0649 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> Fluka </td><td> 63020 </td></tr><tr><td> Papaïne </td><td> Sigma </td><td> P3125 </td></tr><tr><td> Poly-L-lysine </td><td> Sigma </td><td> P1274 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma </td><td> S9888 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Sigma </td><td> S5881 </td></tr><tr><td> NaPyruvate </td><td> Sigma </td><td> P2256 </td></tr></tbody></table>

flash fotolyse van gekooide verbindingen in de cilia van olfactorische sensorische neuronen

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Fotolyse van gekooide verbindingen maakt de productie van snelle en gelokaliseerde toename van de concentratie van diverse fysiologisch actieve verbindingen 1. Gekooide verbindingen zijn moleculen gemaakt fysiologisch inactief door een chemische kooi die kan worden doorbroken door een flits van ultraviolet licht. Hier laten we zien hoe de patch-clamp opnames gecombineerd met fotolyse van gekooide verbindingen voor de studie van olfactorische transductie in gedissocieerde muis olfactorische sensorische neuronen te verkrijgen. Het proces van olfactorische transductie (figuur 1) vindt plaats in de cilia van olfactorische sensorische neuronen, waar odorant binding aan receptoren leidt tot de toename van cAMP dat cyclische nucleotide-gated (CNG) kanaal 2 wordt geopend. Ca ingang door CNG kanalen activeert Ca-geactiveerde Cl kanalen. We laten zien hoe de neuronen distantiëren van de muis olfactorische epitheel 3 en hoe CNG kanalen of Ca-geactiveerde Cl-kanalen activeren door fotolyse van gekooide cAMP 4 of gekooid Ca 5 &lt;/ Sup&gt;. We maken gebruik van een flitslamp 6,7 aan ultraviolette flitsen van toepassing op de ciliaire regio vrij maken cAMP of Ca, terwijl patch-clamp opnames worden genomen om de stroom te meten in de whole-cell voltage-clamp configuratie 8-11.

Fotolyse van gekooide verbindingen maakt de productie van snelle en gelokaliseerde toename van de concentratie van diverse fysiologisch actieve verbindingen. Hier laten we zien hoe de patch-clamp opnames gecombineerd met fotolyse van gekooide cAMP of gekooid Ca voor de studie van olfactorische transductie in gedissocieerde muis olfactorische sensorische neuronen te verkrijgen.

Flash fotolyse van Gekooide verbindingen in de Cilia van olfactorische sensorische neuronen

Fotolyse van 'caged' verbindingen maakt de productie mogelijk van snelle en lokale stijgingen in de concentratie van diverse fysiologisch actieve verbindingen1. ...

Onze reukzin stelt ons in staat om vluchtige chemicaliën in de externe omgeving te detecteren en te herkennen. Deze binden aan receptoren in de cilia van olfactorische sensorische neuronen en activeren een transductiecascade die leidt tot de opening van cyclisch nucleotide-gestuurde kanalen, gevolgd door calcium-geactiveerde chloridekanalen. Het algemene doel van deze procedure is om te laten zien hoe deze kanalen direct kunnen worden geactiveerd door middel van photocage-verbindingen; cage-verbindingen zijn moleculen die door een chemische 'cage' fysiologisch inactief zijn gemaakt.Een flits ultraviolet licht breekt een kooi en laat fysiologisch actieve verbindingen vrij. Caged cAMP, caged IP3 of caged calcium zijn opgenomen in de intracellulaire oplossing, vullen een patchpipet en diffunderen naar het cytoplasma van olfactorische sensorische neuronen. Een ultraflash wordt toegepast op de doelregio om cAMP, IP3 of calcium vrij te maken, terwijl patchclamp-metingen worden uitgevoerd om de stroom te meten in de whole-cell voltage-clamp configuratie.Hallo. Vandaag laten we u een procedure zien voor patchclamp-registraties in combinatie met FE-beleid van kooisamenstellingen. In ons laboratorium gebruiken we deze procedure om cAMP-gestuurde kanalen en calcium-geactiveerde cholinekanalen in olfactorische sensorneuronen te bestuderen. Laten we beginnen.Het hier gebruikte patchclamp-registratiesysteem bestaat uit een omgekeerde microscoop, een perfusiesysteem, een micromanipulator, een registratie-elektrode en de referentie-elektrode die is aangesloten op de headstage van de patchclamp-versterker, allen gemonteerd op een trillingsvrije tafel in een kooi van Faraday. De patchclamp-versterker is via een digitizer verbonden met de computer waarin software voor data-acquisitie is geïnstalleerd. Om een hoogintensieve flits ultraviolet licht op te wekken, gebruiken we een Excelon-flitslamp.De lichtflits kan handmatig worden geactiveerd of via de computer met behulp van dezelfde software die de elektrofysiologische acquisitie aanstuurt. De optimale golflengten voor foto-experimenten worden geselecteerd door een UV-filter in een uitgangssleuf of de flitslamp te plaatsen. De intensiteit van de lichtflits kan worden aangepast door het voltage of de capaciteit van de flitslamp te wijzigen.Een nauwkeurigere controle van de lichtintensiteit wordt verkregen door neutrale dichtheidsfilters in een tweede uitgangssleuf van de flitslamp te plaatsen. De lichtflits wordt via een kwartsvezel optische lichtgeleider gericht op het neuron dat op glazen bodemschalen is geplaatst. De lichtgeleider is verbonden met de epifluorescentie-opstelling van de omgekeerde microscoop.Met behulp van een adapter stuurt een aangepaste filterkubus zonder excitatiefilter, via een dichroïsche spiegel, een UV-bundel naar het neuron. Het licht wordt gefocust via een 100 x olie-immersieobjectief. Het gebied dat door het weefsel wordt bedekt, wordt gevisualiseerd door de lichtgeleider in een illuminator te plaatsen.Het beeld wordt op een monitor bekeken via een CCD-camera die op de microscoop is aangesloten. De controle van het gebied wordt op de monitor getekend om het UV-vleesgebied voor de experimenten vóór de dissectie te lokaliseren; bereid drie glazen bodemschaaltjes voor die zijn gecoat met conna a en poly. Vul ter voorbereiding op de dissectie twee suiker-gecoate Petrischaaltjes van 50 millimeter met Ringer-oplossing.Plaats ze op ijs. Koel ook af. Voeg 0,5 milliliter van de stopmix-oplossing toe aan de spuit die ongeveer 10 milliliters ringer-oplossing bevat.Begin met de geofferde muis. Verwijder de huid van de schedel, snijd langs de kaaklijnen en plaats de kop in een verzilverde petrischaal. Plaats de schaal onder een stereomicroscoop en maak met een scalpel een sagittale doorsnede.Disseceer de kop langs de middellijn. Draai de helft van de kop zodat de mediale zijde naar boven is gericht. Verwijder voorzichtig het septum om de terminates bloot te leggen.Hier tonen we een vergrote afbeelding terwijl het septum wordt verwijderd met een pincet nummer drie en het scalpel. Verwijder voorzichtig de uiteinden bekleed met het vetepitheel. Breng deze over naar een andere verzilverde Petri-schaal met behulp van een superfijne pincet nummer 55 en het scalpel.Scheid stukken van het reukepitheel van de onderliggende lamina propria. Breng de stukken reukepitheel over naar een buisje met één milliliter divalent-vrije Ringer-oplossing. Voeg vervolgens papaine toe.Gebruik microscharen om het epitheel drie minuten bij kamertemperatuur te laten incuberen en snijd vervolgens voorzichtig opnieuw met de microscharen. Wacht nog vijf minuten en breng het monster met een vlamgepolijste Pasteurpipet met een grote opening over naar een buis met de stopoplossing; centrifugeer gedurende vijf minuten en verwijder het supernatant. Voeg ongeveer 1 mL filter-Ringer-oplossing toe en pipetteer dit voorzichtig met een vlamgepolijste Pasteurpipet met een opening van ongeveer 1 mm diameter.Plaats de oplossing met de cellen in het midden van drie glazen petrischalen en laat de cellen ongeveer één uur bezinken bij 4 °C. Voeg vervolgens Ringer-oplossing toe.Werk bij gedimd licht om degradatie van de kooiverbindingen door omgevingslicht te voorkomen. Breng een druppel immersie-olie aan op het 100 x objectief. Plaats één glazen bodemschaaltje met de gedissocieerde oratoire sensorische neuronen op de tafel van de geïnverteerde microscoopperfusie.Met ringeroplossing. Bescherm de spuit met de intracellulaire oplossing met cage-verbindingen tegen licht met aluminiumfolie en bewaar deze gekoeld. Zoek naar een geïsoleerd olfactorisch sensorisch neuron met intacte cilia.Verplaats de tafel van de microscoop om de Cary-regio binnen het op de monitor getekende gebied te positioneren. Om het UV-flitsgebied te lokaliseren, vult u een patchpipet met intracellulaire oplossing die de cage-verbinding bevat. Plaats de pipet in de houder van de headstage van de Apache clamp-versterker.Maak gebruik van standaard patchclamp-technieken. Benader het soma van het neuron met een patchpipet en verkrijg een giga-seal. Schakel vervolgens via de computer over naar de whole-cell modus.Start een stimuleringsprotocol en registreer de respons. Een typisch stimuleringsprotocol klemt de spanning op een constante waarde en triggert het vrijkomen van een UV-flits voor lysis van de cage-verbinding. We laten u nu enkele representatieve registraties zien; hier wordt de respons van een geïsoleerd sensorisch neuron uit het vetweefsel van een muis getoond op lysis van cage-cyclic AMP.De pijl bovenaan geeft het tijdstip van de UV-flits aan. De door Cycl MP geactiveerde stroom werd geregistreerd bij -60 millivolt in een extracellulaire Ringer-oplossing met een laag calciumgehalte. De stijgende fase van de stroom was snel en werd gefit met een enkele exponentiële functie.Hier zien we een opname van hetzelfde neuron in een normale ringer-oplossing, die één millimolar calcium bevat. De stijgende fase van de stroom en minus 60 millivolt werden veel lager en meer fasisch. Dit is te wijten aan de werking van calcium dat de C-recycling P-gepoorte kanalen binnendringt en een secundaire chloride-stroom activeert.In dit voorbeeld hebben we de spanning vastgezet op plus 60 millivolt. Dit is een andere manier om de instroom van calcium te verminderen. De stijgende fase van de respons door cyclone PN-ontkaging bij plus 60 millivolt werd goed beschreven door een enkele exponentiële functie, wat duidt op de aanwezigheid van slechts één stroomcomponent.Een voorbeeld van responsen verkregen door fotovrijgave van calcium in de Celia wordt getoond; deze stroom wordt gedragen door chloride-ionen. De spanning was -50 mV. Responsen met toenemende amplitudes werden geïnduceerd door fotovrijgave van gecaged calcium met UV-flitsen van toenemende intensiteiten.We hebben zojuist aangetoond hoe u registraties uitvoert van gedisassocieerde sensorische neuronen uit de fabrycos bij het uitvoeren van deze procedure. Het is belangrijk om te onthouden dat u zeer geduldig moet zijn. Bedankt voor het kijken en veel succes met het experiment.

flash-photolysis-caged-compounds-cilia-olfactory-sensory

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Multifoton microscopie maakt de controle van een lage energetische fotonen met diepe penetratie optische en minder fototoxiciteit. We beschrijven het gebruik van deze technologie voor live cell etikettering in zebravis embryo's. Dit protocol kan gemakkelijk worden aangepast voor foto-inductie van diverse licht-responsieve moleculen.

Twee-foton-Based Fotoactivatie in de Live zebravis embryo&#39;s

Een methode wordt beschreven voor de bereiding van de enkel levend fotoreceptorcellen van verschillende gewervelde soorten voor fluorescentie beeldvorming. De methode kan worden gebruikt om het imago van de fluorescentie van endogene fluoroforen, zoals NADH of vitamine A, of die van exogeen toegevoegde fluorescerende kleurstoffen gevoelig voor...

De voorbereiding van de levens-geïsoleerde gewervelde fotoreceptorcellen voor fluorescentie beeldvorming

We beschrijven een gevestigde techniek om te meten en geur-opgeroepen calcium antwoorden te analyseren in de antennaal kwab van het...

Calcium Imaging van Geur-reacties van de consument in de Drosophila Antennaal Lobe

Dit artikel geeft de protocollen van de intrinsieke optische signalen en flavoproteins autofluorescentie signalen beeldvorming in kaart geur-opgeroepen activiteiten op het oppervlak van het reukorgaan in muizen.

Imaging Geur-Opgeroepen activiteiten in de muis bulbus olfactorius met behulp van optische reflectie en autofluorescentie Signalen

Volwassen geboren neuronen die ChR2 kunnen worden gemanipuleerd in slice elektrofysiologische voorbereidingen om hun bijdrage aan de functie van olfactorische neurale circuits te onderzoeken.

Met behulp van betaalbare LED-arrays voor Photo-stimulatie van neuronen

This video demonstrates a method for in vivo calcium imaging using synaptically localized calcium sensors in flies. It outlines the steps for preparing the flies for microscopy, conducting olfactory conditioning, and visualizing odor-induced calcium influx.

In Vivo Calcium Imaging Using Synaptically Localized Calcium Sensors in Drosophila melanogaster

Met zijn kleine transparante lichaam, goed gedocumenteerde neuroanatomie en een groot aantal vatbaar genetische technieken en...

In vivo neuronale calcium Imaging in C. elegans

We beschrijven de combinatie van focale UV-geïnduceerde foto-activatie van neuro-actieve verbindingen met whole-cell patch-clamp en multi-foton beeldvorming van intracellulaire natrium transiënten in dendrieten en de stekels van de hippocampus neuronen in acute weefsel plakjes van de hersenen van muizen.

Multi-foton intracellulaire Natrium Imaging In combinatie met UV-gemedieerde Focal uncaging van glutamaat in CA1 pyramidale neuronen

We ontwikkelden een nieuwe techniek in elektronenmicroscopie, "flash-and-vries," dat de visualisatie van membraan dynamiek met ms temporele resolutie mogelijk maakt. Deze techniek combineert de optogenetic stimulatie van neuronen met hogedruk vriezen. Hier tonen we de procedures en een beschrijving van de protocollen in detail.

Flash-en-Freeze: een nieuwe techniek op Capture Membrane Dynamics met Electron Microscopy

Synaptic Vesikel (SV) fietsen is het mechanisme van de kern van de intercellulaire communicatie in neuronale synapsen. FM kleurstof opname- en release zijn het belangrijkste middel van kwantitatief onderzoek SV endo- en exocytose. Hier, vergelijken wij alle stimulatie methoden om te rijden FM1-43 fietsen in de Drosophila motorische eindplaat (NMJ) model synaps.

FM kleurstof fietsen in de synaps: vergelijken van hoge kalium depolarisatie, elektrische en Channelrhodopsin stimulatie

Hier presenteren we een protocol waarmee pre-en/of postsynaptisch calcium kan worden gevisualiseerd in de context van Drosophila leren en geheugen. In vivo calcium beeldvorming met behulp van Synaptisch gelokaliseerde calcium sensoren wordt gecombineerd met een klassieke olfactorische conditionerings paradigma zodanig dat de Synaptische plasticiteit onderliggende dit type associatief leren kan worden bepaald.

In vivo optische calcium beeldvorming van leren-geïnduceerde synaptische plasticiteit in Drosophila melanogaster

Leer flash-fotolyse van gekooide verbindingen in de cilia van muis-olfactorische sensorische neuronen met patch-clamp opnamen. Deze methode activeert cyclisch nucleotide-gereguleerde kanalen en onthult mechanismen van reuktransductie.

Flash fotolyse van Gekooide verbindingen in de Cilia van olfactorische sensorische neuronen

Meer video's verkennen