Name: Een visuele beschrijving van de dissectie van de Cerebral Surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het Choroid Plexus van Rat Brain (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Leer een betrouwbare dissectiemethode voor het oogsten van de cerebrale oppervlaktevaatstelsel en het choroid plexus bij ratten. Deze techniek minimaliseert weefselschade en ondersteunt onderzoek naar hersenbloedstroom en cerebrospinale vloeistofdynamica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gefinancierd door NCTR / FDA.

Hoewel niet getoond in de video, werden ratten eerst gegeven een overdosis van 300 mg / kg pentobarbital, waardoor anesthesie in minder dan 3 minuten en vervolgens gedood door onthoofding. Hun hersenen waren daarna snel, maar zorgvuldig verwijderd uit de schedel en gekoeld in ijs-koude zoutoplossing gedurende 5 minuten. Het is belangrijk de hersenen afkoelen voor deze tijd voor het ontleden van de MAV zodat de MAV kan worden gescheiden van het oppervlak van de cortex (boven laag I). De hersenen werden dan geplaatst in de bodem van een glazen petrischaal rusten op ijs dat vol (1 cm diep) ijskoude zoutoplossing of 0,1 M natriumfosfaat-gebufferde zoutoplossing pH = 7,4. Alle dissectie gebeurt met de hersenen voor het grootste deel ondergedompeld in zoutoplossing. 1. Verwijdering van de Pijnappelklier <ol><li> Plaats de hersenen rugzijde (ten opzichte van de bodem van de petrischaal). De pijnappelklier is gelegen aan de meest caudale ventrale gebied tussen de twee hersenhelften gewoon rostraal thij cerebellum (pijnappelklier uitsparing), en net onder of aan het oppervlak van de hersenvliezen de colliculi. Verwijder de pijnappelklier eerste gebruik van twee kleine gebogen tip pincet. Het is roze van kleur, zoals de cortex, maar wordt vaak omgeven met resten van bloed en bloedvaten restpost uit de hersenen te verwijderen. </li></ol> 2. Verwijdering van de MAV <ol><li> Flip de hersenen dan &quot;ondersteboven&quot; en scheiden de vertebrale slagader, kleinere slagaders en hersenvliezen die de pons van de hersenvliezen en bloedvaten van de voorhersenen. Verwijdering van de voorhersenen MAV wordt dan gestart. Het is belangrijk om ventraal starten in de dissectie proces. De grote grote assen van de cirkel van Willis, midden cerebrale slagaders (MCA) en anterior slagaders zijn de sterkste en dienen als &quot;scaffolding&quot; waardoor de kleinere oppervlakkige arteriën en arteriolen van de pial membraan kan dan worden verwijderd uit de cortex en de rest van het hersenvlies. Zie toetsing door Scremin 7 voor merts visuele representaties en de details van de cerebrale oppervlak vaatstelsel. </li><li> Te beginnen met een van beide halfrond, gebruik maken van de kleine gebogen uiteinde een tang om de posterior communiceren slagader juist achter het interne carotis moment verbreken. Zo scheidt de meer anterior en posterior arteriële bomen van de voorhersenen. Doe hetzelfde voor de contralaterale hemisfeer. </li><li> Vastgrijpen van de MCA en de voorste slagader met de forceps, trek in een anterior-dorsaal zodat de MAV voor de ventrale voorste cortex (piriformis, olfactorische knobbel) omhoog over en rond de reukkanaal. Dit verwijdert een groot deel van de MAV die de anterieure cortex (cingulated en orbitale). </li><li> Draai de hersenen op 45 tot 90 ° hoek met de petrischaal. De laterale, meer anterieure regio&#39;s van de MAV rond de laterale corticale gebieden (granulaire insulaire, secundaire somatosensorische en auditieve cortex) kunnen worden bevrijd van de cortex door het vastgrijpen van de MCA en de bijbehorende Arters en zachtjes te trekken dorsaal langs de cortex. Indien nodig kunnen de uiteinden van de forceps worden gebruikt voor het optillen en de grote slagaders bevrijden van de cortex bij dissectie. </li><li> Verwijder nu de meer posterieure laterale regio&#39;s van de MAV. (Let op, het beste van een halfrond naar de andere tijdens dit oogstproces dat de MAV koud blijft en gehydrateerd. Ook wanneer weerstand in het bevrijden van de MAV van de cortex wordt aangetroffen op een halfrond schakelaar in de contralaterale hemisfeer tijdelijk en dan later terug te gaan naar de oorspronkelijke halfrond.) </li><li> Om de dorsale de MAV rondom de primaire somatosensorische cortex motor verwijderen en zet de hersenen rugzijde (ten opzichte van de bodem van de petrischaal). Eindelijk bevrijden van de MAV hersenen, met de uiteinden van de forceps langs de sagittale sinus. Dit gedeelte van de geoogste MAV tijdelijk worden bewaard in ijskoude zoutoplossing tot testen en analyse of ingevroren voor latere verwerking. Vaakde MAV dat de meest posterieure / caudale gebieden van de cortex (entorhinale, visuele en auditieve cortex meest caudale) blijft aan de cortex. De verwijdering wordt later weergegeven in de video wanneer de MAV tussen de retrosplenial cortex en bovenop de colliculi worden ontleed. </li></ol> 3. Verwijdering van de Choroid Plexus <ol><li> Plaats de hersenen rugzijde en houd deze met de grotere forceps Druk de kleinere forceps beneden door de middellijn tussen de hemisferen en de uiteinden gebruik te prikken door de cortex en corpus callosum (≈ -3,3 mm van bregma) in de bovenkant van de middellijn van de hippocampus. </li><li> Gebruik de tang om de cortex weg te trekken met callosum van de dorsale hippocampus en septum, het blootstellen van het grootste deel van de laterale ventrikel. De choroidea plexus kunnen worden gelokaliseerd en geïdentificeerd door de golvende rode lijn afbakenen van de belangrijkste slagader die de lengte loopt. Gebruik de twee uiteinden van de forceps op de zijwanden van de derde ven wrikkentricle en vergroten op de meest caudale einde (≈ -4,3 mm van bregma 8). </li><li> Met behulp van de kleine tang, trek dit einde van het vaatvlies plexus gratis. Ga dan naar de zeer anterieure gebied tussen het septum en caudate / putamen (meest rostrale mate ≈ +1.6 mm van bregma) en met de tang te vergroten dit deel van het ventrikel en trek de choroidea plexus gratis. Voer dezelfde procedure uit op de contralaterale hemisfeer naar de tweede resterende choroidea plexus te verkrijgen. Ook dit weefsel kan tijdelijk worden bewaard in ijskoude zoutoplossing tot testen en analyse of ingevroren voor latere verwerking. </li></ol> 4. Het verwijderen van de resterende MAV in de 3 e ventrikel bovenop de Thalamus en de Colliculi evenals die op de meer Caudal Regio&#39;s van de Cortex waaronder Retrosplenial, auditieve en visuele cortex <ol><li> Verwijder het gehele hippocampus van beide hersenhelften het blootstellen van de MAV in de thalamus en colliculi. De verwijdering vandit deel van de MAV veel minder moeilijk dan het verwijderen van MAV de cortex. </li><li> Trek dit deel van de MAV vrij door het grijpen van de grotere bloedvaten bovenop het voorste deel van de thalamus en zachtjes te trekken caudaal. Deze vasculatuur is verbonden met het netwerk supra collicular en afleveren van bloed aan de dorsale hippocampus en thalamus dorsale netwerk. Trek het weg caudaal en geleidelijk gratis de supracollicular netwerk tot het bereiken van de laatste delen van de caudale arteriële cirkel vaatstelsel. Op dit punt, moet meer zorg worden genomen om eventuele resterende achterste ventrale MAV te verwijderen op het oppervlak van de granulaire retrosplenial, primaire auditieve en visuele cortex. Zoals met de andere sectie van MAV voor de voorste meer delen van de cortex, kan dit weefsel tijdelijk worden bewaard in ijskoude zoutoplossing tot testen en analyse of ingevroren voor latere verwerking. Elke resterende achterste ventrale MAV geoogst met deze tweede MAV deel moet worden verwijderd eend aan de eerste ontleed MAV sectie betreffende de cortex als ze afzonderlijk worden geanalyseerd. </li></ol> 5. Representatieve resultaten Wanneer de dissectie correct wordt uitgevoerd, dient de resulterende MAV weefsels in twee intacte entiteiten gewicht ongeveer 35 tot 45 mg totaal. De aanvankelijk ontleed MAV rond het grootste deel van de cortex moet wegen ongeveer 25 mg en de MAV die de thalamus, moet colliculi en occipitale cortex wegen ongeveer 15 mg. Het moet rozig in kleur van de resterende bloed in het vaatstelsel. De bilaterale choroid plexus vergaard in twee intacte weefsel monsters met elk een gewicht van 1 tot 2 mg. Hoewel overtollige water wordt verwijderd uit de MAV vóór opslag of verwerking met tissuepapier zoals in lens reinigen van weefsel te voorkomen is het niet verstandig om overtollig water uit de gedissecteerde choroid plexus. Figuur 1 werd gegenereerd voor het vergelijken van expressie profil<html> es in drie regio&#39;s (striatum, pariëtale cortex en MAV) onder controle omstandigheden met behulp van Agilent-014879 Hele Rat Genome 4x44K 60mer oligonucleotide arrays (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA; NCBI GEO Toetreding # GPL7294, GSE23093 en GSE29733 die aanwezig zijn op de NCBI GEO repository). De twee plots in de figuur picturaal tonen de uitdrukking in 1) het striatum opzichte van de pariëtale cortex en 2) de MAV opzichte van de pariëtale cortex. Het is duidelijk dat het striatum en pariëtale cortex veel meer verwant aan elkaar dan de MAV. De gegevens vergelijken van de choroidea plexus met de MAV zal worden gepresenteerd in een toekomstige publicatie. Het is echter waarschijnlijk dat de expressieprofielen in de MAV en choroidea plexus meer verwant aan elkaar dan zij de striatum en pariëtale cortex. Figuur 2 toont de differentiële genexpressie reactie hyperthermie (EIH) versus Amph in vergelijking MAV te controleren en elkaar. content &quot;&gt; De genexpressie van meer dan 11.000 genen officiële NCBI gen symbolen MAV controledieren werd vergeleken met dat van het striatum en pariëtale cortex. dan 2000 van deze genen hebben een 2,5-voudige of meer verschillende expressie in de MAV Vergeleken met de twee neuronale-rijke weefsels en 550 genen hadden een 10 maal groter verschil in expressie. Iets meer dan 40% (253) van deze genen waren met een verminderde expressie van 10-voudig of meer MAV en had betrekking op neuronale functie. Er waren 343 genen met meer dan 10-voudig of meer expressie in vergelijking met MAV pariëtale cortex en striatum. Deze lijst van genen werd gebruikt als uitgangspunt waarmee genen bepalen met een zeer hoog verrijkt in de MAV. Table 1 worden de genen met meer dan 15-voudig expressie in vergelijking met MAV pariëtale cortex en striatum en categoriseert ze met betrekking tot de functie. Veel van deze genen gerelateerd aan het vasculaire systeem en / of het immuunsysteem. Deze tOORTEN genen worden verrijkt ongeveer 5 - tot 10 - voudig tot vanwege de toegenomen vasculatuur zelf en bloed daarin. Maar zelfs voor genen met bekende algemene vasculaire functies, een toename van meer dan 15-voudige verrijking in MAV geeft. Er waren ook aantal genen met grote veelvoudveranderingen die waren: 1) extracellulaire matrixeiwitten (niet specifiek betrekking op vasculatuur), 2) solute transporters en 3) lipide en retinoïnezuur metabolisme. Als goed, weinig groei en differentiatie gen of transcriptiefactoren gevonden. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figuur 1. Vergelijking van de genexpressie in MAV met pariëtale cortex en striatum. Volcano perceel het vergelijken van de genexpressie niveaus van de pariëtale cortex en striatum (boven plot) en de pariëtale cortex en MAV (onderste grafiek). De rode symbolen geven de genen die significant verschillend between regio&#39;s p &lt;0,05 en een 1,5-voudig of meer differentiële expressie regio. De zwarte symbolen vertegenwoordigen genen die niet wezenlijk verschillen tussen regio&#39;s (p&gt; 0,05) en minder dan 1,5-voudig verschil in expressie. De roze symbolen genen met minder dan 1,5-voudig verschil in expressie maar statistisch significant verschillend bij p &lt;0,05. De gele symbolen genen te identificeren die een 1,5-voudige of meer expressie hebben, maar deze verandering is niet statistisch significant bij p &lt;0,05. Afkortingen Amph amfetamine EIH milieu-geïnduceerde hyperthermie MAV meninges en bijbehorende cerebrale bloedvaten Norm normotherme controleert <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figuur 2. Effecten van hyperthermie en amfetamine op genexpressie in MAV. Volcano percelen te vergelijkengenexpressieniveaus in de MAV na zoutoplossing, EIH of Amph op 3 uur tijdstip. De rode symbolen geven de genen die geacht worden significant verschillend terwijl de zwarte stippen / cirkels genen die niet wezenlijk verschillen tussen regio&#39;s. Bijkomende statistische analyse werd gebruikt om te controleren welke uitdrukking verschillen tussen controle en behandeling in feite statistisch significant. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV Expression Brain Expression </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symbolen </td><td fo:width="1.5in"> Weefselspecificiteit of gemeld Functie (s) </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Anxa2 een, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl a, Lect1, LepR, Lum, Myh11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Vasculatuur &amp; Heart </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Ccl19, CD74 een, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Immuunsysteem </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinoïnezuur &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> CDH1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, eMP3, Gpc3, Nupr1, OMD, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Extracellulaire matrix en cel-cel verbindingen </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion &amp; opgeloste Homeostase </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Alx3, Cdkn1c, FOXC2, IGFBP2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, sFRP1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Ontwikkeling &amp; Transcriptie Verordening </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Onbekend &amp; Diversen </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td&gt; <td> Anxa1 een, Angpt2, C6 een, GJB2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Vasculatuur &amp; Heart </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Casp12, CCL2, CCR1, CD14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Immuunsysteem </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, FMOD, MGP, Nid2 </td><td> Extracellulaire matrix en cel-cel verbindingen </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion &amp; opgeloste homeostase </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Cfd, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinoïnezuur &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> BMP6, Casp12, DAB2 Folr1, Igf2, MSX1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> Ontwikkeling &amp; Transcriptie Verordening </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Onbekend &amp; Diversen </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf een, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip a, Vamp5, Vtn </td><td> Vasculatuur &amp; Heart </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Ada een, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-DB1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Immuunsysteem </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Adamtsl4, COL1A1, Crb3, Dpt, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Extracellulaire matrix en cel-cel verbindingen </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion &amp; opgeloste homeostase </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, PON3, Rbp1, RBP4 </td><td> Retinoïnezuur &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Ontwikkeling &amp; Transcriptie Verordening </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1R, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, Gnmt, Gprc5c, HSPB1, Klc3, Krt18, Krt19, MdK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, NET1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Onbekend &amp; Diversen </td></tr></tbody></table> * Genen in de tabel moeten beide meer dan 15-voudig bovenstaande formule in het striatum en in Parietal cortex en 5-voudig boven de achtergrond niveaus. De laagste van de twee ratio&#39;s (MAV / striatum of MAV / pariëtale cortex) voor elk gen werd gebruikt voor het groeperen. een Genen worden gevonden in endotheelcellen maar waarschijnlijk ook een belangrijke rol spelen bij het ​​bewerkstelligen immuunresponsen. Tabel 1. Genen met een 15-voudige of meer * verhoogde expressie in vergelijking met MAV striatum en pariëtale cortex.

<ol><li>Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphetamine+and+environmentally+induced+hyperthermia+differentially+alter+the+expression+of+genes+regulating+vascular+tone+and+angiogenesis+in+the+meninges+and+associated+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature.</a> Synapse. 63, 881-894 (2009).</li>
<li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+responses+differ+in+meninges+and+associated+vasculature%2C+striatum%2C+and+parietal+cortex+after+a+neurotoxic+amphetamine+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure.</a> Synapse. 64, 579-593 (2010).</li>
<li>Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barriers+in+the+developing+brain+and+Neurotoxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Barriers in the developing brain and Neurotoxicology.</a> Neurotoxicology. , (2012).</li>
<li>Oldfield, B. J. M., Michael, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOldfield%2C+BJM+%22The+Rat+Nervous+System%22">The Rat Nervous System</a>. Paxinos, G. 2, Academic Press. San Diego. 391(1995).</li>
<li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier%3A+structure+and+functional+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).</li>
<li>Johanson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplicity+of+cerebrospinal+fluid+functions%3A+%3F+challenges+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrospinal+Fluid+Res%22%5BJournal%5D)">Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).</li>
<li>Scremin, O. U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aScremin%2C+OU+%22The+Rat+Nervous+System%22">The Rat Nervous System</a>. Paxinos, G. 2, Academic Press. San Diego. 3(1995).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. San Diego. (1995).</li>
<li>Johnston, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoperiodic+regulation+of+prolactin+secretion%3A+changes+in+intra-pituitary+signalling+and+lactotroph+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity.</a> J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).</li>
<li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).</li>
<li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+control+of+cerebral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Neurogenic control of cerebral circulation.</a> Cephalalgia. 5, Suppl 2. 25-33 (1985).</li>
<li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).</li>
<li>Johanson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+function+and+nigrostriatal+markers+in+abstinent+methamphetamine+abusers%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers.</a> Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).</li>
<li>Johnston, M., Papaiconomou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+Fluid+Transport%3A+a+Lymphatic+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22News+Physiol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective.</a> News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).</li>
<li>Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+injection+of+Microfil+reveals+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatics+in+the+non-human+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathol.+Appl.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).</li>
<li>Johnston, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatic+vessels+in+humans%2C+non-human+primates+and+other+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrospinal+Fluid+Res%22%5BJournal%5D)">Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2(2004).</li>
<li>Kulik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cerebral+vasculature+in+normal+and+ischemic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain.</a> Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).</li>
<li>Bowyer, J. F., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+doses+of+methamphetamine+that+cause+disruption+of+the+blood-brain+barrier+in+limbic+regions+produce+extensive+neuronal+degeneration+in+mouse+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus.</a> Synapse. 60, 521-532 (2006).</li>
<li>Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+brain+edema+and+cell+changes+following+hyperthermic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury.</a> Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).</li>
<li>Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia%2C+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity%3A+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290%2F51%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li>
<li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Neurocrit.+Care%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li>
<li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Emerg.+Med%22%5BJournal%5D)">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li>
<li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Dialogues+Clin.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li>
<li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li>
<li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury%3A+results+from+the+IMPACT+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li>
</ol>

We hebben niets te onthullen. Het werk dat hier gepresenteerde mag vertegenwoordigen niet noodzakelijk de standpunten van de Food and Drug Administration.

Technische aspecten van MAV en choroidea plexus dissectie Het is cruciaal tijdens de dissectie van de MAV om de hersenen &quot;ondergedompeld&quot; meestal in de normale zoutoplossing of natriumfosfaat-gebufferde zoutoplossing. Waardoor de MAV en cortex te ontwateren tijdens dissectie zal resulteren in de MAV hechten stevig aan corticale laag I. Dit zal de hoeveelheid corticale weefsel geoogst met de MAV en / of resulteren in het onvermogen om deze aanhangend MAV secties uit de cortex verhogen. Ook geduld is nodig tijdens dissectie. Nogmaals, als men kennis met weerstand in het verwijderen van de MAV van de cortex in een halfrond tijdens dissectie, overschakelen naar het andere halfrond en later terug te gaan naar de kant waar weerstand werd ondervonden. Deze methode vergt wel enige oefening om een ​​perfecte en vereist ongeveer 5 tot 15 &quot;praktijk&quot; dissecties voor een consistent uniform oogst van MAV weefsel wordt bereikt. De werkwijze begint de dissectie en removal van de MAV de arteriële cirkel aan de basis van de hersenen vergemakkelijkt het verwijderen van de hersenvliezen door de grotere vasculatuur support &quot;scaffolding.&quot; Veel van de oorspronkelijk in het bloed MAV vasculatuur Na opoffering worden uitgeworpen tijdens de dissectie en minder dan 5% van het RNA geoogst MAV moet bloed oorsprong. Het is mogelijk om bijna alle bloed te verwijderen te doorstromen het dier met 50 tot 70 ml zoutoplossing met histologische technieken, vóór onthoofding en de hersenen verwijderd. Het is echter veel moeilijker dan de MAV weefsels tijdens dissectie visualiseren. De drie meest waarschijnlijke &quot;vervuiling&quot; van het weefsel MAV de pijnappelklier, corticale laag I en resterende weefsel reukkwab weefsel maar het is ook mogelijk om hypofyse weefsel krijgen in het preparaat. Pineal verontreiniging in de MAV wordt gedetecteerd door de MAV met een ronde 1 tot 2 mm diameter bol dat gekleurd donkerrood. De primaire functievan de pijnappelklier wordt normaal beschouwd als volledig verschillend van de MAV. De primaire functie is het produceren van melatonine, dat aspecten van het circadiane ritme 9 regelt, en in lipoxygenation 10 van lipide precursoren. Hoewel het gen Lox, die lipoxygenase activiteit reguleert, werd gedacht dat in volwassenen voornamelijk in de pijnappelklier 10, onze resultaten aan dat het ook consistent aanwezig in grote hoeveelheden in MAV. Overblijvende corticale of reukkwab verontreiniging leidt tot roze baanvormig MAV weefsel met van 1 tot 2 mm dichtere weefsels die veel lichter van kleur ingesloten in. Dit kan worden gezien door &quot;zwevend&quot; de MAV op het oppervlak van de buffer, en vervolgens het zwaardere corticale weefsels of bol met de twee ontleden forceps. Bij verontreiniging van de MAV van corticale laag Ik weefsel, hypothalamus weefsel of de pijnappelklier aanwezig is, dan is een aantal genen zal een aanzienlijkcant hogere expressie dan wat gewoonlijk in een &quot;schone&quot; dissectie. Verontreiniging van de MAV met pijnappelklier leidt tot hogere expressie van arylalkylamine N-acetyltransferase (AANAT) die nodig is voor melatonine synthese. Helaas, als pijnappelklier vervuiling optreedt tijdens MAV dissectie worden de niveaus van Lox in MAV niet nauwkeurig kunnen worden bepaald. Verontreiniging van de MAV met corticale weefsel leidt tot hogere expressie van neuron-specifieke genen zoals hippocalcin (HPCA), parvalbumine (Pvalb) en / of neuronale pentraxin receptor (Nptxr). Verontreiniging van MAV met hypothalamus weefsel resulteert in de hogere expressie van groeihormoon 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC). In het geval dat enige verontreiniging bestaat in de geoogste weefsels, de meeste van deze genen geïdentificeerd en niet in genexpressieanalyse. Dit is bijzonder belangrijk voor genen in de circulerende blood die nog aanwezig kunnen zijn in MAV of de choroidea plexus. Interpretting genexpressie gegevens van geoogst MAV en choroidea plexus De cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vasculatuur met de bijbehorende meninges (MAV) en de choroid plexus nodig zijn voor cerebrale bloedstroom en cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Het weefsel oogst is geschikt voor biochemische en fysiologische analyse en de MAV is en gevoelig voor schade door amfetamine en hyperthermie 1,2 door genexpressieanalyse. Deze resultaten zijn in overeenstemming is met wat ook bekend is over ernstige hyperthermie en blootstelling aan amfetaminen naar de hersenen vasculatuur in het algemeen 18,19,20. Menselijke klinische gegevens ondersteunen de overtuiging dat de subdurale vasculatuur is gevoelig voor schade door amfetamine en metamfetamine 21,22. Als goed, de grote en kleine cerebrale vasculatures includIng die in de pial laag van de hersenvliezen die worden geoogst in MAV zijn van potentieel hoog belang bij het ​​onderzoek concussive soorten hoofdletsel 23,24 25. De huidige genen expressie profiel verkregen van de MAV geeft aan dat de pial en eventueel de arachnoidea meningeale membranen kunnen een grotere rol spelen dan verwacht in het reguleren van CSF samenstelling. In de toekomst door middel van dissectiemicroscoop technieken is het mogelijk om verder scheiden de weefsels die de MAV zodat de pial en arachnoidea membranen kunnen worden gescheiden van de grotere arteriële vasculatuur huidige en mogelijk van elkaar. Dit resulteert in een betere interpretatie van de functie van elk van deze 3 componenten van de geoogste MAV.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens / apparatuur </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> Normaal zoutoplossing (9 gram zout / 1 Liter H 2 O) </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissection buffer </td></tr><tr><td> 0,1 M natriumfosfaat pH 7,4 </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissection buffer </td></tr><tr><td> Bone rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Schedel botverwijdering </td></tr><tr><td> Pincetten-gebogen tip (4 &quot;lang en 0,8 mm breed tip) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 of RS-5137 </td><td> Ontleden tang </td></tr><tr><td> Pincetten-rechte tip (5,5 &quot;lang) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 of RS-8104 </td><td> Thumb Dressing tang </td></tr></tbody></table>

een visuele beschrijving van de dissectie van de cerebral surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het choroid plexus van rat brain

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Deze video presentatie is gemaakt om een ​​methode van het oogsten van de twee belangrijkste hoogst vasculaire structuren laten zien, niet woonachtig zijn in de hersenen zelf, die ondersteuning voorhersenen functie. Zij zijn de cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vaatstelsel, samen met de bijbehorende hersenvliezen (MAV) en het vaatvlies plexus die nodig zijn voor cerebrale doorbloeding en de cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase. Geoogste weefsel is geschikt voor biochemische en fysiologische analyse en de MAV is en gevoelig voor schade door amfetamine en hyperthermie 1,2. Als goed, de grote en kleine cerebrale vasculatures geoogst in MAV zijn van potentieel hoog belang bij het onderzoek concussive soorten hoofdletsel. De MAV ontleed in deze presentatie uit de pial en enkele arachnoidea membraan (minder dura) van de meninges en de grote en kleine bloedvaten cerebrale oppervlak. De choroid plexus ontleed is de structuur dat zich in het lateral ventrikels zoals beschreven door Oldfield en McKinley 3,4,5,6. De methoden voor het verzamelen van deze twee weefsels vergemakkelijken ook het verzamelen van regionale corticale weefsel zonder meninges en grotere cerebrale vasculatuur oppervlak, en is compatibel met andere oogsten hersenweefsel zoals striatum, hypothalamus, hippocampus, etc. De ontleding van de twee weefsels wordt 5 tot 10 min totaal. De genexpressie niveaus voor de MAV ontleed en choroidea plexus, zoals getoond en beschreven in deze presentatie is te vinden op GSE23093 (MAV) en GSE29733 (choroidea plexus) op de NCBI GEO repository. Deze gegevens zijn, en wordt, gebruikt om beter inzicht in de werking van de MAV en choroidea plexus en hoe neurotoxische gebeurtenissen zoals ernstige hyperthermie en Amph negatieve invloed hebben op hun functie.

Deze video presentatie toont een werkwijze voor het oogsten van de twee belangrijkste zeer vasculaire structuren die voorhersenen functie ondersteunen. Zij zijn de cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vaatstelsel, samen met de bijbehorende hersenvliezen (MAV) en het vaatvlies plexus die nodig zijn voor cerebrale doorbloeding en de cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase.

Een visuele beschrijving van de dissectie van de Cerebral Surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het Choroid Plexus van Rat Brain

Deze videopresentatie is gemaakt om een methode te tonen voor het winnen van de twee belangrijkste sterk gevasculariseerde structuren die zich niet in de hersenen bevinden ...

Het algemene doel van deze procedure is om efficiënt en spoedig de peel- en arachnoïde delen van de meninges en de bijbehorende arteriële vaten, die over het oppervlak van de cortex van de voorhersenen en de middenhersenen, de thalamus en de calli liggen, te dissekeren, alsmede om de plexus choroidea uit de zijventrikels te oogsten. Dit wordt bereikt door eerst de pijnappelklier te verwijderen en de meninges en de arteriële bomen die aan de voorhersenen vastzitten te scheiden. Ten tweede worden de arteriën en arteriolen op het corticale oppervlak zorgvuldig verwijderd, beginnend bij de ventrale cirkel van Willis en vervolgens voortgaand naar de dorsale corticale oppervlakken, zodat de peel en de resterende arachnoïde membranen aan de vaten bevestigd blijven, waarbij erop wordt gelet dat het oogsten van aangrenzend cortical weefsel tot een minimum wordt beperkt.Vervolgens worden de cortex en de commissurale vezels weggeprepareerd van het septum en de hippocampus, waardoor de laterale ventrikels worden blootgelegd om de plexus choroideus te kunnen oogsten. Ten slotte wordt de hippocampus verwijderd, waarbij de thalamus en de calli van de middenhersenen zichtbaar worden. De hersenvliezen en de bijbehorende vasculatuur boven dit gebied worden vervolgens gedissekeerd.Uiteindelijk kan de integriteit en specificiteit van de gedisseceerde hersenvliezen en het bijbehorende arteriële vasculatuur, evenals de plexus choroideus, worden bepaald door de genexpressieprofielen van elk van deze regio's te vergelijken. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in onderzoek naar het vasculair systeem dat de hersenfunctie ondersteunt. Dit omvat overeenkomsten, vergelijkingen en verschillen in de functie van de plexus choroideus ten opzichte van de hersenvliezen en de bijbehorende arteriële vasculatuur met betrekking tot de bloedstroom, de CSF-functie, neurotoxische insulten en hersentrauma.Om dit protocol te starten, plaatst u hersenen die direct na euthanasie van ratten zijn verwijderd gedurende vijf minuten in ijskoud, normaal zoutoplossing. Het is belangrijk om de hersenen deze tijd te laten afkoelen vóór de dissectie, zodat de hersenvliezen en de bijbehorende arteriële vasculatuur (MAV) van het cortexoppervlak kunnen worden gescheiden. Plaats de hersenen vervolgens in de bodem van een glazen Petrischaal op ijs, met één centimeter ijskoud, normaal zoutoplossing of 0,1 M natriumfosfaatgebufferde zoutoplossing bij een pH van 7,4.Alle dissectie dient te worden uitgevoerd terwijl de hersenen grotendeels in fysiologische zoutoplossing zijn ondergedompeld. Om te beginnen met de dissectie, wordt het brein met de dorsale zijde naar boven in de Petrischaal geplaatst; zoek vervolgens de pijnappelklier, die zich in het meest caudale ventrale gebied tussen de twee hemisferen bevindt. Deze bevindt zich net rostraal van het cerebellum en net onder, of aan het oppervlak van de meninges.Over de colli. Verwijder de pijnappelklier met twee kleine gebogen pincetten. Let op dat de pijnappelklier roze van kleur is, net als de cortex, maar vaak omringd is door resten van residu bloed en vaten die zijn achtergebleven na het verwijderen van de hersenen.Draai de hersenen vervolgens ondersteboven in de Petrischaal. Scheid daarna de arteria vertebralis, de kleinere arteriën en de hersenvliezen die de pons bedekken van de hersenvliezen en het vasculatuur van de voorhersenen. Begin vervolgens met het verwijderen van de MAV.Het is belangrijk om bij het dissectieproces ventraal te beginnen met de belangrijkste slagaders van de cirkel van Willis: de middelste cerebrale arteriën en de voorste arteriën. Begin vervolgens bij een van de hemisferen en gebruik kleine pincetten met een gebogen punt om de arteria communicans posterior net posterieur aan de aansluiting met de arteria carotis interna door te snijden, waardoor de meer anterieure en posterieure arteriële bomen van de voorhersenen van elkaar worden gescheiden. Herhaal vervolgens hetzelfde proces voor de contralaterale hemisfeer.Pak nu de MCA en de anterieure arterie met de pincet en trek voorzichtig in een anterieure dorsale richting, zodat de MAV die de ventrale anterieure cortex bedekt, over en rond de olfactory tract wordt getild. Hierdoor wordt een groot deel van de MAV die de anterieure cortex bedekt, verwijderd. Draai de hersenen in een hoek van 45 tot 90 graden ten opzichte van de Petrischaal, zodat de meer anterieure laterale regio's van de MAV rond de laterale corticale regio's van de cortex kunnen worden bevrijd; pak de MCA en de bijbehorende arteriën vast en trek voorzichtig dorsaal langs de cortex.Indien nodig kunnen de uiteinden van de pincet worden gebruikt om de grote slagaders tijdens de dissectie op te tillen en los te maken van de cortex. Verwijder nu de meer posterieure laterale regio's van de MAV. Let op dat het raadzaam is om tijdens dit oogstproces tussen de twee hemisferen te wisselen om ervoor te zorgen dat de MAV koud en gehydrateerd blijft; wissel ook van hemisfeer als er weerstand wordt ondervonden bij het losmaken van de MAV van de cortex.Ten slotte, om de meest dorsale regio's van de MAV rondom de primaire somatosensorische en motorische cortex te verwijderen, draait u de hersenen met de dorsale zijde naar boven om dit gedeelte los te maken van de hersenen; gebruik hiervoor de uiteinden van de pincet langs de sinus sagittalis. Dit deel van de geoogste MAV kan tijdelijk worden bewaard in ijskoud zout water tot het nodig is voor testen en analyse, of worden ingevroren voor latere verwerking. Vaak blijft de MAV die de meest posterieure caudale regio's van de cortex bedekt, vastzitten.De verwijdering hiervan wordt getoond in een volgend gedeelte van deze video. Om de plexus choroidea te verwijderen, plaatst u de hersenen eerst met de dorsale zijde naar boven en houdt u deze op hun plaats met de grootste pincet. Duw vervolgens de kleinere pincet via de middellijn tussen de hemisferen naar beneden en gebruik de uiteinden om door de cortex en het corpus callosum in de bovenkant van de middellijn van de hippocampus te prikken.Gebruik vervolgens de pincet om de cortex met het corpus callosum weg te trekken van de dorsale hippocampus en het septum, waardoor het grootste deel van het laterale ventrikel zichtbaar wordt. De plexus choroidea kan worden gelokaliseerd en geïdentificeerd aan de golvende rode lijn die de hoofdartiere markeert die over de gehele lengte loopt. Gebruik de twee uiteinden van de pincet om de laterale wanden van het derde ventrikel open te wrikken en dit aan het meest caudale uiteinde te vergroten.Trek vervolgens met de kleine pincet dit uiteinde van de plexus choroidea vrij. Gebruik daarna de pincet om het uiterste anterieure gebied tussen het septum en de regio van het caudatus putamen te verbreden en trek ook aan dit uiteinde de plexus choroidea vrij. Voer dezelfde procedure uit op de contralaterale hemisfeer om de tweede overgebleven plexus choroidea te verkrijgen.Vervolgens kan dit weefsel tijdelijk op ijs, gekoeld, in zoutoplossing of bevroren worden bewaard voor latere verwerking. Om de resterende MAV te verwijderen die de meest posterieure gebieden van de cortex bedekt, verwijdert u eerst de gehele hippocampus uit beide hemisferen, waardoor de MAV over de thalamus en colliculi bloot komt te liggen. Let op dat de verwijdering van dit deel van de MAV veel minder moeilijk zal zijn dan de verwijdering van de resterende MAV uit de cortex.Door de grotere vaten boven het anterieure gedeelte van de thalamus vast te pakken en voorzichtig in de richting van de coddles te trekken, wordt duidelijk dat deze vaten verbonden zijn met het supra-cocurriculaire netwerk en bloed leveren aan de dorsale hippocampus en het dorsale thalamusnetwerk. Trek voorzichtig weg, waardoor het supra-netwerk uiteindelijk vrijkomt en de laatste delen van de arteriële coddle-cirkel bereikt kunnen worden. Op dit punt moet er extra zorgvuldig worden gewerkt om elke resterende AVM op het oppervlak van de granulaire retros lineale primaire, auditieve en visuele cortices te verwijderen.Eventueel resterend posterieur ventraal corticaal MAV dat is geoogst met deze tweede thalamische en calli MAV-sectie, dient te worden verwijderd en toegevoegd aan de eerste gedissecteerde corticale MAV-sectie indien ze afzonderlijk moeten worden geanalyseerd. Vervolgens kan, om genexpressieprofielen tussen het striatum, de pariëtale cortex en MAV-regio's onder controlecondities te vergelijken, genexpressieanalyse worden uitgevoerd met behulp van Agilent 0 1 4 8 7 9 whole rat genome, four by 44, 060 mer oligonucleotide arrays. Verdere details over verwerking, scannen en initiële gegevensopslag zijn te vinden in Thomas et al.Wanneer de dissectie correct is uitgevoerd, zouden de resulterende MAV-weefsels uit twee intacte entiteiten moeten bestaan met een totaal gewicht van ongeveer 35 tot 45 milligram. Het aanvankelijk gedissecteerde MAV dat het grootste deel van de cortex omringt, zou ongeveer 25 milligram moeten wegen, en het deel dat de thalamus, calli en occipitale cortex bedekt, zou ongeveer 15 milligram moeten wegen.Het weefsel moet een lichtroze kleur hebben door het residuele bloed in de vasculatuur. De geoogste bilaterale plexus choroidea moet bestaan uit twee intacte weefselmonsters, die elk één tot twee milligram wegen, zoals hier te zien is. Hier zien we een vergelijking van genexpressieprofielen in het striatum, de pariëtale cortex en de MAV onder controlecondities.De bovenste grafiek toont de expressie in het striatum vergeleken met de pariëtale cortex. Terwijl de onderste grafiek de expressie in de MAV toont vergeleken met de pariëtale cortex, is te zien dat het striatum en de pariëtale cortex veel nauwer aan elkaar verwanten zijn dan de MAV. Hier zien we de differentiële genexpressie in de MAV als reactie op hyperthermie vergeleken met de controle, als reactie op amphetamine vergeleken met de controle en bij hyperthermie versus amphetamine.Ten slotte zien we hier genen met een expressie die meer dan 15 keer zo hoog is in MAV vergeleken met de pariëtale cortex en het striatum, gekenmerkt naar functie. Veel van deze genen zijn gerelateerd aan het vasculaire systeem en/of het immuunsysteem. Andere genen met zeer grote fold changes zijn extracellulaire matrixeiwitten, solute transporters, en het lipide- en retinoïnezuurmetabolisme.Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om geduldig te zijn bij het dissekeren van de MAV. Het is daarnaast essentieel dat de hersenen gedurende de gehele dissectie ondergedompeld blijven in isotone zoutoplossing of fosfaatgebufferde zoutoplossing. Verder wordt geadviseerd om de sectie van de MAV bij vier of vijf ratten te oefenen voordat er weefsels worden verzameld voor het genereren van experimentele gegevens.

a-visual-description-dissection-cerebral-surface-vasculature

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Cerebrale perfusie controle is aangetoond dat de nauwkeurigheid van ischemische beroerte modellen te verbeteren. Technische moeilijkheden beperken vaak het gebruik van dit essentieel instrument voor cerebrovasculaire onderzoek. In deze video wordt een geoptimaliseerd systeem getoond op een of meerdere locaties hemodynamische bewaking verkrijgen tijdens intraluminale middelste cerebrale slagader occlusie in ratten.

Geoptimaliseerde Systeem voor cerebrale perfusie Monitoring in het Rat Stroke Model van intraluminale midden cerebrale slagader occlusie

Een chirurgische methode wordt beschreven om de ventrale schedel aan pasgeboren ratten bloot. Met deze benadering is het mogelijk om een ​​craniotomie acute elektrofysiologie en twee-foton microscopie experimenten in de hersenstam van verdoofde pups openen.

Een methode om een ​​Craniotomie aan de ventrale Schedel van pasgeboren knaagdieren maken

De gelijktijdige evaluatie van cerebrale hemodynamica en de lichtverstrooiende eigenschappen van in vivo rattenhersenweefsel wordt aangetoond met conventionele multispectrale diffuse reflectie-afbeeldingssysteem.

Gelijktijdige Evaluatie van Cerebrale hemodynamiek en Light Scattering Eigenschappen van de<em&gt; In Vivo</em&gt; Rat Brain behulp Multispectral Diffuse reflectie Imaging

Het doel van dit document en instructie video te beschrijven hoe bloot en verwijder de pig postmortem hersenen en hypofyse in intacte toestand, geschikt voor daaropvolgende macroscopische en histologische analyse.

Blootstelling van het varken voor CNS Histologische analyse: A Manual voor onthoofding, Schedel openen en Brain verwijdering

Deze paper toont het effectieve gebruik van een fiber dissectie methode te onthullen van de oppervlakkige witte stof traktaten en periventricular structuren van de menselijke hersenen, in de driedimensionale ruimte, om te helpen student begrip van ventriculaire morfologie.

Verkennen van Deep Space - blootleggen van de anatomie van de Periventricular structuren te onthullen van de laterale ventrikels van het menselijk brein

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methodologie voor het verkrijgen van afgevlakte tangentiële secties van zoogdieren afkomstig cortices en visualiseren van corticale modules met behulp van histochemische en immunohistochemische methoden.

Visualisatie van corticale Modules in afgeplatte zoogdieren Cortices

Dit protocol beschrijft een nieuwe techniek om de drie belangrijkste parameters van ischemisch hersenletsel te meten op dezelfde set knaagdierhersenmonsters. Het gebruik van slechts één hersenmonster is zeer voordelig in termen van ethische en economische kosten.

Het meten van post-beroerte cerebraal oedeem, infarctzone en bloed-hersenbarrière-afbraak in een enkele set knaagdierhersenmonsters

Dit protocol beschrijft het uitvoeren van een craniectomie met behulp van een pneumatische boor met hoge snelheid op een 3 maanden oud Deens Landras-varken. De toegang wordt gemaakt door het voorhoofdsbeen en onthult de ventrale dura mater en de onderliggende hersenhelften. Deze procedure geeft toegang tot een groot deel van de varkenshersenen.

Toegang tot het varkensbrein via high-speed pneumatische boorcraniectomie

We demonstreren chemisch inducerende grote bloedvatverwijding bij muizen als een model voor het onderzoeken van cerebrovasculaire disfunctie, dat kan worden gebruikt voor modellering van vasculaire dementie en de ziekte van Alzheimer. We demonstreren ook het visualiseren van het vaatstelsel door het injecteren van een siliconenrubbersamenstelling en het bieden van duidelijke visuele richtlijnen voor het meten van veranderingen in de grootte van bloedvaten.

Een visuele benadering voor het induceren van dolichoectasia bij muizen om door grote bloedvaten gemedieerde cerebrovasculaire disfunctie te modelleren

Hier beschrijven we een protocol voor ultrasone lokalisatiemicroscopie (ULM), dat een ruimtelijke resolutie van 12,5 μm bereikt om de microvasculatuur van de hersenen bij ratten in beeld te brengen. Het maakt een gedetailleerde visualisatie van de richting en snelheid van de bloedstroom mogelijk en biedt een krachtig hulpmiddel voor het bevorderen van onderzoek naar cerebrale circulatie en vaataandoeningen.

Tweedimensionale visualisatie met superresolutie van microvasculatuur van de hersenen van ratten met behulp van ultrasone lokalisatiemicroscopie

Het doel van deze studie was het vaststellen van een reproduceerbare methode voor het uitvoeren van een craniectomie, gevolgd door permanente, selectieve midden-cerebrale arterie-occlusie bij ratten voor toepassing in experimentele studies naar motorische en ruimtelijke geheugentekorten.

Selectieve en permanente occlusie van de middenarterie cerebrale arterie bij ratten: een experimentele benadering voor het bestuderen van motorische en ruimtelijke geheugentekorten

Leer een betrouwbare dissectiemethode voor het oogsten van de cerebrale oppervlaktevaatstelsel en het choroid plexus bij ratten. Deze techniek minimaliseert weefselschade en ondersteunt onderzoek naar hersenbloedstroom en cerebrospinale vloeistofdynamica.

Een visuele beschrijving van de dissectie van de Cerebral Surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het Choroid Plexus van Rat Brain (Video) | JoVE Journal

Een visuele beschrijving van de dissectie van de Cerebral Surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het Choroid Plexus van Rat Brain

Meer video's verkennen