Name: Analyse van SNARE gemedieerde membraanfusie gebruiken enzymatische celfusie Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Leer een enzymatische celfusie-assay voor SNARE-gemedieerde membraanfusie met β-galactosidase als reporter. Deze methode kwantificeert fusiegebeurtenissen en analyseert meerdere SNARE-combinaties in COS-7-cellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk wordt ondersteund door het opstarten fondsen van de Universiteit van Louisville en CA135123 van de National Institutes of Health (tot CH).

1. Celkweek en transfectie <ol><li> COS-7 cellen worden gekweekt in Dulbecco Modified Eagle&#39;s medium (DMEM) aangevuld met 4,5 g / l glucose en 10% foetaal bovine serum (FBS). </li><li> Plasmide transfectie wordt uitgevoerd met Lipofectamine volgens de fabrikant (Invitrogen). </li></ol> 2. Fluorescentie microscopische analyse van het celoppervlak SNARE Expression <ol><li> De dag voor transfectie, 3 x 10 4 COS-7 cellen worden gezaaid op steriele 12 mm dekglaasjes (Fisher Scientific) in 24-well platen. </li><li> Voor v-cellen in elk putje, 0,25 ug van het plasmide dat codeert tTA (ptet-Off, CLONTECH) wordt gecotransfecteerd met 0,25 ug van de plasmiden die uitdrukking omgedraaid vamps. </li><li> Voor T-cellen in elk putje wordt 0,25 ug van het plasmide dat codeert TRE-LacZ (pBI-G, CLONTECH) gecotransfecteerd met 0,25 ug elk van de plasmiden die uitdrukking omgedraaid SNAP-25 en syntaxins 1 of 4. </li><li> 24 uur na transfection de cellen gefixeerd met 4% paraformaldehyde in PBS + + (PBS aangevuld met 0,1 g / l CaCl2 en 0,1 g / l MgCl2) gedurende 10 min, en vervolgens geblokkeerd in 10% FBS in PBS + + gedurende 30 minuten. </li><li> De cellen worden geïncubeerd gedurende 1,5 uur met anti-myc monoklonaal antilichaam 9E10 (neat hybridoma supernatant). </li><li> Na vier wasbehandelingen met PBS + + worden de cellen geïncubeerd gedurende 1 uur met FITC-geconjugeerde secundaire antilichamen (Jackson Immunoresearch Laboratories) bij een verdunning van 1:500. </li><li> Na vier wasbehandelingen met PBS + +, de gelabelde cellen worden gemonteerd verlengen Gold antifade reagens (Invitrogen). </li><li> Confocale beelden worden verzameld op een Olympus laser scanning confocale microscoop. De beelden worden verwerkt met de Adobe Photoshop-software. </li></ol> 3. FACS-analyse van het celoppervlak SNARE Expression <ol><li> De dag voor transfectie, 2 x 10 5 COS-7 cellen worden uitgezaaid in elk putje van 6-well platen. </li><li> 24 uur na transfection met de gespiegelde SNARE, ptet-Off en pBI-G plasmiden worden cellen gefixeerd met 1% paraformaldehyde in PBS + + gedurende 15 min, en vervolgens geblokkeerd in 10% FBS in PBS + + gedurende 15 minuten. </li><li> De cellen worden geïncubeerd met het anti-myc monoklonaal antilichaam 9E10 gedurende 60 minuten. </li><li> Na drie wassingen met PBS + + de cellen gelabeld met FITC-geconjugeerde secundaire antilichamen (1:200 verdunning) gedurende 45 minuten. </li><li> Na drie wassingen met PBS + +, worden de cellen van de platen geschraapt met een celschraper. </li><li> 15.000 cellen worden geanalyseerd met een FACSCalibur flowcytometer (BD Biosciences). De gemiddelde fluorescentie-intensiteit van elk monster wordt verkregen met de CellQuest Pro software. </li></ol> 4. Enzymatische celfusie Assay <ol><li> De dag voor transfectie, 1,2 x 10 6 COS-7 cellen worden uitgezaaid in elke 100 mm weefselkweekplaat en 2 x 10 5 COS-7 cellen worden uitgezaaid in elk putje van 6-well platen. </li><li> Voor v-cellen, 0,5 - 5 ug elk Flipped VAMP plasmide wordt gecotransfecteerd met 5 ug ptet-Off in de cellen in elke 100 mm kweekschaal. Controle cellen gecotransfecteerd met de lege vector pcDNA3.1 (+) en ptet-Off. De N-glycosylering van vamps 1, 4, 5, 7 en 8, tunicamycine voorkomen (10 ug / ml) opgenomen in celkweekmedium gedurende transfectie. </li><li> Voor T-cellen in elk putje van de 6-well platen, 1 ug omgedraaid SNAP-25 plasmide en pBI-G worden gecotransfecteerd met 0,5 ug omgedraaid syntaxin1 plasmide of 0,05 ug plasmide syntaxin4 omgedraaid. </li><li> 24 uur na transfectie worden de v-cellen losgemaakt van de kweekschalen enzymvrije Cell Dissociation Buffer (Invitrogen). Losgemaakte cellen worden geteld met een hemacytometer en geresuspendeerd in HEPES gebufferde DMEM aangevuld met 10% FBS, 6,7 ug / ml tunicamycine en 0,67 mM DTT. </li><li> 4,8 x 10 5 geresuspendeerd v-cellen toegevoegd aan elk putje reeds de T-cellen. </li><li> Na 6, 12 of 24 uur rat 37 ° C in 5% CO2 </sub&gt;, de expressie van β-galactosidase wordt gemeten met de β-galactosidase enzym Assay System met Reporter Lysis Buffer volgens de fabrikant (Promega). In het kort worden de cellen tweemaal gewassen met PBS en gelyseerd in de Reporter Lysis Buffer. Cellysaten worden gemengd met een gelijk volume 2 x Assay Buffer. Als blanco controle wordt het Reporter Lysis Buffer gemengd met de Assay Buffer 2 ×. </li><li> Na 90 min wordt de colorimetrische reactie gestopt door toevoeging van 1 M natriumcarbonaat. </li><li> Absorptie bij 420 nm gemeten met een HITACHI 100-40 spectrofotometer. </li></ol>

<ol><li>Rothman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+intracellular+protein+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of intracellular protein transport.</a> Nature. 372, 55-63 (1994).</li>
<li>Jahn, R., Lang, T., Sudhof, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Membrane fusion.</a> Cell. 112, 519-533 (2003).</li>
<li>Bonifacino, J. S., Glick, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanisms+of+vesicle+budding+and+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The mechanisms of vesicle budding and fusion.</a> Cell. 116, 153-166 (2004).</li>
<li>Jahn, R., Scheller, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNAREs--engines+for+membrane+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">SNAREs--engines for membrane fusion.</a> Nature. 7, 631-643 (2006).</li>
<li>Weber, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNAREpins%3A+minimal+machinery+for+membrane+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SNAREpins: minimal machinery for membrane fusion.</a> Cell. 92, 759-772 (1998).</li>
<li>Hu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+of+cells+by+flipped+SNAREs%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y%29%22%5BJournal%5D)">Fusion of cells by flipped SNAREs.</a> Science (New York, N.Y). 300, 1745-1749 (2003).</li>
<li>Hu, C., Hardee, D., Minnear, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+fusion+by+VAMP3+and+plasma+membrane+t-SNAREs%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Membrane fusion by VAMP3 and plasma membrane t-SNAREs.</a> Experimental cell research. 313, 3198-3209 (2007).</li>
<li>Hasan, N., Corbin, D., Hu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusogenic+Pairings+of+Vesicle-Associated+Membrane+Proteins+%28VAMPs%29+and+Plasma+Membrane+t-SNAREs+-+VAMP5+as+the+Exception%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fusogenic Pairings of Vesicle-Associated Membrane Proteins (VAMPs) and Plasma Membrane t-SNAREs - VAMP5 as the Exception.</a> PloS one. 5, e14238(2010).</li>
<li>Gossen, M., Bujard, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+control+of+gene+expression+in+mammalian+cells+by+tetracycline-responsive+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promoters.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 89, 5547-5551 (1992).</li>
<li>Hanson, P. I., Heuser, J. E., Jahn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitter+release+-+four+years+of+SNARE+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitter release - four years of SNARE complexes.</a> Current opinion in neurobiology. 7, 310-315 (1997).</li>
<li>McMahon, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellubrevin+is+a+ubiquitous+tetanus-toxin+substrate+homologous+to+a+putative+synaptic+vesicle+fusion+protein.+%5Bsee+comments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cellubrevin is a ubiquitous tetanus-toxin substrate homologous to a putative synaptic vesicle fusion protein. [see comments.</a> Nature. 364, 346-349 (1993).</li>
<li>Steegmaier, M., Klumperman, J., Foletti, D. L., Yoo, J. S., Scheller, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicle-associated+membrane+protein+4+is+implicated+in+trans-Golgi+network+vesicle+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">Vesicle-associated membrane protein 4 is implicated in trans-Golgi network vesicle trafficking.</a> Molecular biology of the cell. 10, 1957-1972 (1999).</li>
<li>Zeng, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+synaptobrevin%2FVAMP+homologous+protein+%28VAMP5%29+is+increased+during+in+vitro+myogenesis+and+present+in+the+plasma+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">A novel synaptobrevin/VAMP homologous protein (VAMP5) is increased during in vitro myogenesis and present in the plasma membrane.</a> Molecular biology of the cell. 9, 2423-2437 (1998).</li>
<li>Galli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+tetanus+neurotoxin-insensitive+vesicle-associated+membrane+protein+in+SNARE+complexes+of+the+apical+plasma+membrane+of+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">A novel tetanus neurotoxin-insensitive vesicle-associated membrane protein in SNARE complexes of the apical plasma membrane of epithelial cells.</a> Molecular biology of the cell. 9, 1437-1448 (1998).</li>
<li>Wong, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endobrevin%2C+a+novel+synaptobrevin%2FVAMP-like+protein+preferentially+associated+with+the+early+endosome%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">Endobrevin, a novel synaptobrevin/VAMP-like protein preferentially associated with the early endosome.</a> Molecular biology of the cell. 9, 1549-1563 (1998).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De oorspronkelijke celfusie assay 6 bepaalt SNARE gemedieerde fusie events met fluorescentiemicroscopie. Hier beschrijven we een innovatieve assay die SNARE gemedieerde fusie events kwantificeert door geactiveerde expressie van β-galactosidase en spectrometrische metingen. Met deze assay, we routinematig analyseren 15-20 v-en t-SNARE combinaties in een experiment. Met behulp van flowcytometrie om SNARE expressie te meten op het celoppervlak, we titreren de expressie niveaus van vamps en vergelijken hun membra...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van reagens en uitrusting </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12800-017 </td></tr><tr><td> COS-7 cellen </td><td> ATCC </td><td> CRL-1651 </td></tr><tr><td> tunicamycine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T7765-5MG </td></tr><tr><td> ptet-Off </td><td> Clontech </td><td> K1620-A </td></tr><tr><td> pBI-G </td><td> Clontech </td><td> 6,150-1 </td></tr><tr><td> lipofectamine </td><td> Invitrogen </td><td> 18324-012 </td></tr><tr><td> Enzym-vrije cel dissociatie oplossing </td><td> Invitrogen </td><td> 13151-014 </td></tr><tr><td> Konijn anti-Tet-repressor polyklonaal antilichaam </td><td> Millipore </td><td> AB3541 </td></tr><tr><td> FITC-geconjugeerd ezel anti-muis IgG (H + L) </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 715-095-150 </td></tr><tr><td> Laser scanning confocale microscoop </td><td> Olympus </td><td> FV1000 </td></tr><tr><td> FACSCalibur flowcytometer </td><td> BD Biosciences </td><td></td></tr><tr><td> β-galactosidase enzym Assay System met Reporter Lysis Buffer </td><td> Promega </td><td> E2000 </td></tr><tr><td> Model 100-40 UV-VIS spectrofotometer </td><td> Hitachi </td><td> C740843 </td></tr></tbody></table>

analyse van snare gemedieerde membraanfusie gebruiken enzymatische celfusie assay

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

De interacties van SNARE (s oluble N-ethylmaleimide-gevoelige factor een ttachment eiwit re Ceptor) eiwitten op blaasjes (v-snaren) en op doel membranen (t-snaren) katalyseren intracellulaire vesikels fusie 1-4. Reconstitutie testen zijn essentieel voor het ontleden van het mechanisme en de regeling van SNARE-gemedieerde membraanfusie 5. In een celfusie assay 6,7 worden SNARE eiwitten ectopisch tot expressie op het celoppervlak. Deze &quot;omgedraaid&quot; SNARE eiwitten schijf cel-cel fusie waaruit blijkt dat SNAREs volstaan ​​om celmembranen fuseren. Omdat de celfusie test is gebaseerd op microscopische analyse is minder efficiënt bij gebruik van meerdere v-en t-SNARE interacties kwantitatief te analyseren. Hier beschrijven we een nieuwe assay 8 dat SNARE gemedieerde fusie events kwantificeert door geactiveerde expressie van β-galactosidase. Tweecomponenten van het Tet-Off genexpressiesysteem 9 gebruikt als uitleessysteem: de tetracycline-gecontroleerde transactivator (tTA) en een reporter plasmide dat het LacZ gen onder controle van de tetracycline-response element (TRE-LacZ) codeert. We transfecteren tTA in COS-7 cellen die v-SNARE eiwitten op het celoppervlak (v-cellen) en transfecteren TRE-LacZ gedraaid in COS-7 cellen die t-SNARE eiwitten omgedraaid op het celoppervlak (T-cellen) . SNARE-afhankelijke fusie van het v-en T-cellen resulteert in de binding van tTA met TRE de transcriptie-activering van LacZ en expressie van β-galactosidase. De activiteit van β-galactosidase wordt gekwantificeerd met een colorimetrische methode absorptie bij 420 nm. De blaasjes-geassocieerde membraaneiwitten (vamps) zijn v-SNAREs die zich in verschillende post-Golgi vesiculaire compartimenten 10-15. Uitspreken vamps 1, 3, 4, 5, 7 en 8 op hetzelfde niveau vergelijken we de membraanfusieactiviteiten met de enzymatische assay celfusie. Op basis van spectrometrische meting, deze test biedt een kwantitatieve benadering voor het analyseren van SNARE-gemedieerde membraanfusie en voor high-throughput studies.

Om een ​​kwantitatieve celfusie test te ontwikkelen, wij profiteren van de sterke transcriptionele activering door de binding van tTA aan TRE. In afwezigheid van tTA, transcriptie van het lacZ gen in TRE-LacZ zwijgt. Wanneer tTA aanwezig is, bindt aan het TRE en activeert de transcriptie van LacZ. Figuur 1 toont een stroomdiagram van de enzymatische assay celfusie. tTA getransfecteerd in v-cellen die v-SNARE eiwitten op het celoppervlak en TRE-LacZ getransfecteerd in ...

We hebben een celfusie test die SNARE-gemedieerde membraanfusie events kwantificeert door geactiveerde expressie van β-galactosidase.

Analyse van SNARE gemedieerde membraanfusie gebruiken enzymatische celfusie Assay

De interacties van SNARE-eiwitten (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) op blaasjes (v-SNARE's) en op doelmembranen ...

Het algemene doel van deze procedure is om snare-gemedieerde celfusie-gebeurtenissen te kwantificeren via de geactiveerde expressie van bèta-galactoside. Dit wordt bereikt door eerst v- en t-snare-eiwitten ectopisch tot expressie te brengen op het oppervlak van cost-zeven-cellen. De volgende stap van de procedure is het combineren van de cellen die v-snare-eiwitten tot expressie brengen met cellen die t-snare-eiwitten tot expressie brengen.Dit resulteert in snare-gemedieerde celgefuseerde versmelting en de geactiveerde expressie van bèta-galactoside. Uiteindelijk wordt de door celversmelting geïnduceerde bèta-galactoside-activiteit gemeten met behulp van een spectrofotometer. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals de microscopische SAL-regio-assay, is dat er meerdere snare-combinaties geanalyseerd kunnen worden.Kwantitatief gezien kan deze methode worden toegepast om het mechanisme en de regulatie van SNARE-gemedieerde membraanfusie te begrijpen. Het kan daarnaast worden ingezet voor high-throughput studies. De procedure zal worden gedemonstreerd door Dr. Na Hassan, postdoc, en David Humphrey, technicus uit mijn laboratorium, de dag

analysis-snare-mediated-membrane-fusion-using-an-enzymatic-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Methode voor het meten van virale Fusion Kinetics bij de Single Particle Level

In deze video laten we zien efficiënte electrofusie van...

Cel Electrofusion gevisualiseerd met fluorescentiemicroscopie

Mitochondriale fusie werd gemeten door het bijhouden van de gelijkschakeling van de photoconverted matrix-gerichte GFP over het mitochondriale netwerk in de tijd. Tot dusver kon slechts een cel worden onderworpen aan een uur lang kinetische analyse tegelijk. Wij presenteren een methode die meet gelijktijdig meerdere cellen, waardoor versnelling van het proces van gegevensverzameling.

Een snellere, met hoge resolutie, MTPA-GFP-gebaseerde Mitochondriale Fusion Assay verwerven Kinetische gegevens van meerdere cellen parallel geschakeld Met behulp van confocale microscopie

Lichtmicroscooptechnieken gekoppeld aan biochemische analyses verduidelijken de betrokkenheid van SNARE-gemedieerde exocytose bij netrine-afhankelijke axonvertakking. Deze combinatie van technieken maakt identificatie mogelijk van moleculaire mechanismen die axonvertakking en celvormverandering controleren.

Gebruik makend van gecombineerde methoden om de rol van de plasmamembraan Delivery Tijdens Axon vertakking en neuronale Morphogenesis Definieer

Hier presenteren we een protocol om enkele, SNARE-bemiddelde fusie gebeurtenissen tussen liposomen en ondersteund dubbellagen in microfluïdische kanalen met gepolariseerde TIRFM, met 'single molecule gevoeligheid en ~ 15 msec tijdsresolutie te detecteren. Lipide en oplosbare lading afgifte kan gelijktijdig worden gedetecteerd. Liposoom grootte, lipide diffusie, en fusie porie eigenschappen worden gemeten.

SNARE-gemedieerde Fusie van Single proteoliposomen met Tethered Ondersteund dubbellagen in een microfluïdische Flow Cell gecontroleerd door gepolariseerde TIRF Microscopie

Dit protocol wordt een nieuwe methode voor de kwantitatieve visualisatie van complexe vorming van SNARE-eiwitten, gebaseerd op Förster resonance energie-overdracht en levensduur van de fluorescentie microscopie imaging waardoor beschreven.

Visualiseren van intracellulaire SNARE mensenhandel door fluorescentie levensduur microscopie Imaging

Dit protocol beschrijft een fluorescentie schommelingen spectroscopie gebaseerde aanpak om te onderzoeken van interacties tussen eiwitten bemiddelen cel interacties, d.w.z. eiwitten gelokaliseerd in cel kruispunten, rechtstreeks in levende cellen. Wij bieden gedetailleerde richtsnoeren op kalibreren van het instrument, data-acquisitie en analysemethoden, inclusief correcties mogelijk artefact bronnen.

Een fluorescentie schommelingen spectroscopie Assay voor eiwit-eiwitinteractie op cel contacten

Hier presenteren we de gedetailleerde procedure van een onlangs ontwikkelde protease assay platform met behulp van N-terminal hexahistidine/maltose-bindend-proteïne en fluorescente proteïne-gesmolten recombinante substraten gekoppeld aan het oppervlak van nikkel-nitrilotriacetic zure magnetische agarose kralen. Een latere in-gel-analyse van de monsters van de assay gescheiden door elektroforese van het gel van natrium dodecyl sulfaat-polyacrylamide is ook gepresenteerd.

Gebruik van recombinante Fusion eiwitten in een fluorescerende Protease Assay Platform en hun In-gel renaturatie

De biologische membraan fusie wordt gekatalyseert door gespecialiseerde fusie proteïnen. Het meten van de fusogenic eigenschappen van eiwitten kan worden bereikt door lipide mengen assays. We presenteren een methode voor het zuiveren van recombinant fruitvliegje atlastin, een eiwit dat bemiddelt homotypic fusie van de ER, reconstitutie aan voorgevormde liposomen, en testen voor fusie capaciteit.

Reinigingsmiddel-bijgestaan reconstitutie van recombinant fruit vliegje Atlastin in liposomen voor lipide-mengt analyses

Dit protocol beschrijft een confocale beeldvormingstechniek om drie fusiemodi in boviene bijnierchromaffinecellen te detecteren. Deze fusiemodi omvatten 1) close-fusion (ook wel kiss-and-run genoemd), waarbij fusieporiën worden geopend en gesloten, 2) stay-fusion, waarbij fusieporie wordt geopend en de geopende porie wordt gehandhaafd, en 3) krimpfusie, waarbij gesmolten blaasjeskrimp betrokken zijn.

Confocale microscopie om drie modi van fusieporiëndynamiek in bijnierchromaffinecellen te meten

Leer een enzymatische celfusie-assay voor SNARE-gemedieerde membraanfusie met β-galactosidase als reporter. Deze methode kwantificeert fusiegebeurtenissen en analyseert meerdere SNARE-combinaties in COS-7-cellen.

Analyse van SNARE gemedieerde membraanfusie gebruiken enzymatische celfusie Assay

Meer video's verkennen