Name: Rat Model van bloed-hersen barrière Verstoring toestaan Gerichte Neurovasculaire Therapeutics (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Leer de bloed-hersenbarrière verstoren bij ratten met intra-arteriële mannitol-infuus via de arteria carotis externa. Deze methode verbetert de aflevering van geneesmiddelen naar de hersenen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de JB Marshall Foundation.

1. Bereid Dier en Apparatuur voor Procedure <ol><li> Voordat chirurgie bereiden operatiegebied en het dier. Maak de halsslagader catheter door het invoegen van een 23-gauge naald in een stompe einde 12 &quot;van PE50 buis. Snijd ongeveer 45 ° afschuining aan de andere kant van de katheter. Steriliseren materiaal voorafgaand aan de procedure. Dragen een haar motorkap, chirurgisch masker en steriele handschoenen. </li><li> Plaats een verwarmingselement op het oppervlak waar de operatie wordt uitgevoerd. Activeer het en laat het opwarmen. Bedek het gebied met een absorberend bank kussen. </li><li> Controleer of u 25% mannitol in oplossing hebben zonder kristallen. Als kristallen aanwezig, los ze Door de flacon in een heet waterbad bij 80 ° C en roeren periodiek. </li><li> Noteer het gewicht van het dier. </li><li> Een propofol verdunning voor bezorging bij 0,8 mg / kg / min met een snelheid van 0,1 ml / min. </li><li> Plaats de rat in de inductie box gedurende 3 minuten. Instellingen: 5% isofluraan, 2 L / mindebiet op ventilator. </li><li> Op de top van een wegwerp handdoek, scheren de nek en beide binnenkant van de dijen. </li></ol> 2. Intuberen de Rat <ol><li> Plaats het dier weer in de inductie box gedurende 3 minuten. </li><li> Bereid uw endotracheale tube met een IV katheter. Voor dit formaat en de stam van de rat, gebruiken we een 18 ga katheter. De buis moet groot genoeg zijn om een ​​goede luchtcirculatie mogelijk te maken, maar klein genoeg om te passen in de luchtpijp worden zonder schade te veroorzaken. Trek de naald uit de plastic catheter en zorgvuldig de naald breken ca. 1 cm van de scherpe punt. De stootte naald zal de stylus zijn. Steek de naald terug in de katheter. </li><li> Hang de rat door de tanden op een schuin oppervlak. </li><li> Direct een licht schijnen tegen de nek van het dier en een rij tussen de oren. </li><li> Plaats een kleine spatel ca. 3 cm in de orofarynx. Til omhoog terwijl zachtjes trekken van de tong uit de mond. </li><li> Visualiseer de opening van de luchtpijp. U zult seea klein gaatje dicht te openen en bij elke ademhaling. </li><li> Steek katheter in het gat. U kunt soms het gevoel het plastic voer het kraakbeen van de luchtpijp. De luchtpijp is gevoelig. Forceer de katheter. </li><li> Zet de ventilator op 1 L / min en 60 slagen per minuut en de isofluraan tot 2%. </li><li> Sluit de katheter naar de ventilator en tape de buis het contactvlak. </li><li> Controleer of het dier verdoofd door het uitvoeren van een teen knijpen. </li></ol> 3. Bepaal Propofol IV Anesthesie <ol><li> Zet de rat met tape alle vier de ledematen en de staart aan het bedrijfsresultaat oppervlak. </li><li> Schrob de geschoren nek en lies sites met chloorhexidine zeep drie keer. Dan schrobben met chloorhexidine spoelen drie keer. </li><li> Bevestig een injectiespuit met propofol aan een IV uitbreidingsset. Monteer de spuit op een infuuspomp. </li><li> Met een scalpel, snijden door de huid van de geschoren dij. Vermijd het zagen spier. </li><li> Open de incisie met krachtps aan de femorale ader te visualiseren. </li><li> Trek weefsel over de slagader naar het schip bloot te leggen. </li><li> Plaats een 26 ga Monoject veterinaire IV katheter in de ader. Wanneer de naald de wand van de ader lekke banden voel je het gemakkelijker worden om te duwen. Trek de naald en duw de katheter in het vat. </li><li> Start de propofol infusie bij 0,1 ml / min. </li><li> 3-5 min na aanvang van de infusie propofol, schakelt de anesthesie gas een mengsel van 50% O2 en 50% N2 O en zet de isofluraan. </li></ol> 4. Expose de splitsing van de gemeenschappelijke halsslagader <ol><li> Maak een incisie in de hals met scalpel. </li><li> Snijd tussen de twee grote speekselklieren met een schaar of scalpel. </li><li> Ontleden weg weefsel lateraal van de middellijn van de halsslagader bloot te leggen. Gebruik een tang om lagen van weefsel te openen. U kunt gebruik maken van een schaar om stukken die je bloot met de tang te verwijderen en om minimall bepaleny vasculaire. De controle bloeden met een gaasje, wattenstaafjes, en cauterisatie indien nodig. </li><li> Injecteer 3 ml zoutoplossing IP als er sprake is van matige tot hevige bloedingen. </li><li> Gebruik oprolmechanismen om weefsel weg te trekken van de halsslagader. Zoek de bifurcatie. </li><li> Maak de occipitale slagader net distaal van de bifurcatie. Cauterize het tussen forceps en scheiden een elektrocauterisatie. </li><li> Tang volledig bloot carotis bifurcatie en zoveel mogelijk de ECA. </li><li> Expose de superieure schildklier slagader aftakking van de Rekenkamer distaal van de occipitale slagader. Cauterize het tussen forceps en scheiden een elektrocauterisatie. </li></ol> 5. Katheteriseren van de externe halsslagader <ol><li> Plaats 2 lengtes van 4/0 zijde onder de Europese Rekenkamer. </li><li> Pak een lengte van hechtdraad met uw hemostat en schuif de Rekenkamer terug caudaal (naar de rat de voeten). </li><li> Neem de andere hechtdraad en craniaal binden voor zover (in de richting van de rat mond) mogelijk wet een chirurg knoop. Dit vormt een permanente ligatuur om de Europese Rekenkamer te offeren. </li><li> Verwijder de eerste hemostaat (degene die werd toepassen caudale spanning) en pak de andere hechtdraad (de een dat is geknoopt rond de Rekenkamer) en craniaal zachtjes spanning met de hemostaat. </li><li> Losjes Bind een andere chirurg knoop (niet beveiligt - laat nauwelijks gebonden) distaal van de bifurcatie en proximaal van de permanente ligatuur. </li><li> Spoelen met 1% lidocaïne om de slagader te ontspannen. </li><li> Vul uw katheter met gehepariniseerde zoutoplossing. </li><li> Plaats een tijdelijk voertuig clip zo dicht mogelijk bij de bifurcatie. Place vaartuig clip een hoek met ruimte voor katheterisatie maximaliseren. Schuif de losse knoop in de richting van de clip. </li><li> Maak een kleine arteriotomie (snede) in ECA net proximaal van de ligatuur met microscissors. Er mag geen bloeding zijn als de clip en ligatuur zijn veilig. </li><li> Behulp van een tang om de ECA wanden regelen, voer het afgeschuinde uiteinde van de katheter in het vat. </li&gt; <li> Bevestig de katheter met de losse hechting knoop. Bind de slagader rond de katheter. </li><li> Verwijder de clip en reinig het gebied met een wattenstaafje. </li><li> De katheter tot ongeveer 1 mm distaal bifurcatie. Houd de slagader met forceps proximaal aan de knoop om een ​​schip wordt geïmmobiliseerd. </li></ol> 6. Dien Mannitol <ol><li> Vul een 8 &quot;IV verlengset en een 6 ml spuit met mannitol zonder dat eventuele luchtbelletjes Bewaar deze in de incubator bij 37 ° C. Opmerking: Snel met mannitol - Het zal gemakkelijk neerslaan uit de oplossing bij kamertemperatuur.. </li><li> Om te visualiseren BBBD, kunt u beheren Evans blauwe kleurstof en bekijk het in te voeren op het gebied van de hersenen waar de barrière is verstoord. Hiertoe geven het dier 2 ml / kg 2% Evans Blue door een nieuwe injectieplaats op de benen om de contralaterale propofol infusie. </li><li> Bevestig de extensieset aan een 5 micrometer filteren en met mannitol te vullen om lucht bub verwijderenBles. Maak dan dit om de kraan zonder dat belletjes. </li><li> Dien mannitol bij 0,09 ml / sec gedurende 25 sec. Letten de mannitol evenwicht te bereiken met de stroom in halsslagader een punt juist proximaal van de ICA. Het moet lijken te pulseren met het hart van de rat tarief. Als de mannitol gewoon naar beneden stroomt in de richting van het hart die je hebt overwonnen de rat bloeddruk. Dit kan leiden tot levensbedreigende complicaties en slechte BBBD. </li></ol>

<ol><li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A. K., Dolman, D. E. M., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+disease%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of disease. 37, 13-25 (2010).</li>
<li>Smith, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The Blood-Brain Barrier.</a> 89, 193-208 (2003).</li>
<li>Kroll, R. A., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outwitting+the+blood-brain+barrier+for+therapeutic+purposes%3A+osmotic+opening+and+other+means%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Outwitting the blood-brain barrier for therapeutic purposes: osmotic opening and other means.</a> Neurosurgery. 42, 1083(1998).</li>
<li>Kroll, R. A., Pagel, M. A., Muldoon, L. L., Roman-Goldstein, S., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+volume+of+distribution+to+the+brain+with+interstitial+infusion%3A+dose%2C+rather+than+convection%2C+might+be+the+most+important+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Increasing volume of distribution to the brain with interstitial infusion: dose, rather than convection, might be the most important factor.</a> Neurosurgery. 38, 746-754 (1996).</li>
<li>Butt, A. M., Jones, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+histamine+and+antagonists+on+electrical+resistance+across+the+blood-brain+barrier+in+rat+brain-surface+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Effect of histamine and antagonists on electrical resistance across the blood-brain barrier in rat brain-surface microvessels.</a> Brain research. 569, 100-105 (1992).</li>
<li>Inamura, T., Black, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradykinin+selectively+opens+blood-tumor+barrier+in+experimental+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Bradykinin selectively opens blood-tumor barrier in experimental brain tumors.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 14, 862-870 (1994).</li>
<li>Matsukado, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+tumor+uptake+of+carboplatin+and+survival+in+glioma-bearing+rats+by+intracarotid+infusion+of+bradykinin+analog%2C+RMP-7%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Enhanced tumor uptake of carboplatin and survival in glioma-bearing rats by intracarotid infusion of bradykinin analog, RMP-7.</a> Neurosurgery. 39, 125(1996).</li>
<li>Kroll, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+drug+delivery+to+intracerebral+tumor+and+surrounding+brain+in+a+rodent+model%3A+a+comparison+of+osmotic+versus+bradykinin+modification+of+the+blood-brain+and%2For+blood-tumor+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Improving drug delivery to intracerebral tumor and surrounding brain in a rodent model: a comparison of osmotic versus bradykinin modification of the blood-brain and/or blood-tumor barriers.</a> Neurosurgery. 43, 879(1998).</li>
<li>Kinoshita, M., McDannold, N., Jolesz, F. A., Hynynen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+localized+delivery+of+Herceptin+to+the+mouse+brain+by+MRI-guided+focused+ultrasound-induced+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Noninvasive localized delivery of Herceptin to the mouse brain by MRI-guided focused ultrasound-induced blood-brain barrier disruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103, 11719-11723 (2006).</li>
<li>Neuwelt, E. A., Dahlborg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy+administered+in+conjunction+with+osmotic+blood-brain+barrier+modification+in+patients+with+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuro-oncology%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy administered in conjunction with osmotic blood-brain barrier modification in patients with brain metastases.</a> Journal of neuro-oncology. 4, 195-207 (1987).</li>
<li>Doolittle, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+a+multicenter+study+using+intraarterial+chemotherapy+in+conjunction+with+osmotic+opening+of+the+blood-brain+barrier+for+the+treatment+of+patients+with+malignant+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of a multicenter study using intraarterial chemotherapy in conjunction with osmotic opening of the blood-brain barrier for the treatment of patients with malignant brain tumors.</a> Cancer. 88, 637-647 (2000).</li>
<li>Guillaume, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-arterial+chemotherapy+with+osmotic+blood-brain+barrier+disruption+for+aggressive+oligodendroglial+tumors%3A+results+of+a+phase+I+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intra-arterial chemotherapy with osmotic blood-brain barrier disruption for aggressive oligodendroglial tumors: results of a phase I study.</a> Neurosurgery. 66, 48(2010).</li>
<li>Remsen, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+anesthetic+choice%2C+PaCO2%2C+and+other+factors+on+osmotic+blood-brain+barrier+disruption+in+rats+with+brain+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+%26+Analgesia%22%5BJournal%5D)">The influence of anesthetic choice, PaCO2, and other factors on osmotic blood-brain barrier disruption in rats with brain tumor xenografts.</a> Anesthesia & Analgesia. 88, 559-559 (1999).</li>
<li>Nilaver, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+herpesvirus+and+adenovirus+to+nude+rat+intracerebral+tumors+after+osmotic+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Delivery of herpesvirus and adenovirus to nude rat intracerebral tumors after osmotic blood-brain barrier disruption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92, 9829(1995).</li>
<li>Fortin, D., McCormick, C. I., Remsen, L. G., Nixon, R., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+neurotoxicity+of+etoposide+phosphate+administered+in+combination+with+other+chemotherapeutic+agents+after+blood-brain+barrier+modification+to+enhance+delivery%2C+using+propofol+for+general+anesthesia%2C+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Unexpected neurotoxicity of etoposide phosphate administered in combination with other chemotherapeutic agents after blood-brain barrier modification to enhance delivery, using propofol for general anesthesia, in a rat model.</a> Neurosurgery. 47, 199(2000).</li>
<li>Neuwelt, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+CNS+lymphoma+treated+with+osmotic+blood-brain+barrier+disruption%3A+prolonged+survival+and+preservation+of+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+oncology%22%5BJournal%5D)">Primary CNS lymphoma treated with osmotic blood-brain barrier disruption: prolonged survival and preservation of cognitive function.</a> Journal of clinical oncology. 9, 1580(1991).</li>
<li>Remsen, L. G., Trail, P. A., Hellström, I., Hellström, K. E., Neuwelt, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+delivery+improves+the+efficacy+of+a+tumor-specific+doxorubicin+immunoconjugate+in+a+human+brain+tumor+xenograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Enhanced delivery improves the efficacy of a tumor-specific doxorubicin immunoconjugate in a human brain tumor xenograft model.</a> Neurosurgery. 46, 704(2000).</li>
<li>Neuwelt, E. A., Pagel, M. A., Kraemer, D. F., Peterson, D. R., Muldoon, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+chemoprotection+without+compromise+of+chemotherapy+efficacy+in+a+rat+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Bone marrow chemoprotection without compromise of chemotherapy efficacy in a rat brain tumor model.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 309, 594-599 (2004).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Er zijn weinig middelen maximale werkzaamheid van BBBD. Het is belangrijk om bloeding minimaliseren tijdens het snijden van de installatie. Bloeddruk en hartslag kan worden beïnvloed door grote bloedingen en deze factoren is bekend dat de mate van BBBD 13 beïnvloeden. Bloeden kan worden verminderd door hechtingen grote bloedvaten, zoals de superieure schildklier en occipitale slagaders, die moeten worden gedeeld ligeren. Bovendien kan elektrocauterisatie worden gebruikt om schepen te verdelen en gebieden die ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Materiaalnaam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Commentaar </td></tr><tr><td> Long Evans ratten </td><td> Harlan Laboratories </td><td></td><td> 210 tot 250 g, man </td></tr><tr><td> PE 50 buizen </td><td> Beckton-Dickinson </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 18 gauge x 2.5 &quot;IV catheter </td><td> Terumo </td><td></td><td> Voor ET tube </td></tr><tr><td> 30 &quot;IV uitbreiding stelt </td><td> Abbott </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 26 gauge veterinaire IV katheter </td><td> Monoject </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Evans blauwe kleurstof </td><td> Sigma </td><td> E2129 </td><td></td></tr><tr><td> Bipolaire </td><td> Codman </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Filter, 5 urn </td><td> Braun </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rat model van bloed-hersen barrière verstoring toestaan ​​gerichte neurovasculaire therapeutics

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Endotheelcellen met tight junctions met de basale membraan en astrocyt einde voeten heen hersenbloedvaten de bloed-hersenbarrière 1 te vormen. De barrière sluit selectief moleculen kruising tussen bloed en hersenen op basis van hun grootte en lading. Deze functie kan belemmeren de levering van geneesmiddelen voor neurologische aandoeningen. Een aantal chemotherapeutische geneesmiddelen, bijvoorbeeld niet doeltreffend de bloed-hersenbarrière te bereiken tumorcellen 2. Aldus verbeteren de afgifte van geneesmiddelen over de bloed-hersen barrière is een gebied van belang. De meest voorkomende werkwijzen voor het verbeteren van de aflevering van geneesmiddelen aan de hersenen direct cerebrale infusie en bloed-hersenbarrière verstoring 3. Directe intracerebrale infusie garandeert dat therapieën de hersenen bereiken, maar deze werkwijze heeft een beperkt vermogen om het geneesmiddel te dispergeren 4. Bloed-hersen barrière verstoring (BBBD) aldieptepunten medicijnen om rechtstreeks voort uit de bloedsomloop in de hersenen en dus effectiever te bereiken gedispergeerd tumorcellen. Drie methoden van barrièrebeschadiging zijn osmotische barrièrebeschadiging, farmacologische barrièrebeschadiging, en focused ultrasound met microbellen. Osmotische verstoring, ontwikkeld door Neuwelt, gebruikt een hypertone oplossing van 25% mannitol dat de cellen van de bloed-hersenbarrière waardoor ze krimpen en verstoren de tight junctions ontwatert. Barrièrebeschadiging kan farmacologisch worden bereikt met vasoactieve stoffen zoals histamine en bradykinine 5 6. Deze methode is echter voornamelijk voor de selectieve hersentumoren afsluitorgaan 7. Bovendien werd RMP-7, een analoog van het peptide bradykinine, bevonden inferieur in vergelijking head-to-head met osmotische BBBD met 25% mannitol 8. Een andere methode, ultrasone (FUS) in combinatie met microbellen ultrageluid contrastmiddelen, is ook aangetoondom reversibel openen de bloed-hersen barrière 9. In vergelijking met FUS, hoewel, 25% mannitol heeft een langere geschiedenis van de veiligheid in menselijke patiënten dat maakt het een bewezen hulpmiddel voor translationeel onderzoek 10-12. Om BBBD verwezenlijken moet mannitol worden geleverd met een hoge snelheid direct in de hersenen arteriële circulatie. Bij mensen wordt een endovasculaire katheter geleid naar de hersenen waar snelle, directe stroom kan worden bereikt. Dit protocol modellen menselijke BBBD zoveel mogelijk. Na een cut-down tot aan de splitsing van de gemeenschappelijke halsslagader, wordt een katheter ingebracht retrograde in de Rekenkamer en worden gebruikt om rechtstreeks te leveren mannitol in de interne halsslagader (ICA) circulatie. Propofol en N 2 O verdoving worden op hun vermogen om de effectiviteit van barrièrebeschadiging 13 maximaliseren. Indien correct uitgevoerd, deze procedure heeft de mogelijkheid om veilig, effectief en reversibel opent de bloed-hersenbarrière en improve de levering van geneesmiddelen die niet gewoonlijk de hersenen bereiken 8,13,14.

<img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/50019/50019fig1.jpg" /> Figuur 1. Visualiseren bloedhersenbarrière verstoring via Evans blauwe kleurstof extravasatie. Evans blauwe kleurstof is een pigment dat bindt aan albumine en is niet extravasatie in de hersenen onder fysiologische omstandigheden. Verstoring van de bloed-hersenbarrière aan een zijde van de hersenen kan Evans blauwe vlek te voeren en de verstoorde halfrond blauw terwijl de niet-verstoorde halfron...

Bloed-hersen barrière verstoring helpt de levering van bepaalde geneesmiddelen naar de hersenen. Mannitol geleverd intra-arterieel krimpt cellen rondom de bloedvaten om fysiek verstoren de barrière.

Rat Model van bloed-hersen barrière Verstoring toestaan ​​Gerichte Neurovasculaire Therapeutics

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

Het algemene doel van deze procedure is het verstoren van de bloed-hersenbarrière. Dit wordt bereikt door het dier eerst onder IV-anesthesie te plaatsen met een endotracheale luchtweg. Vervolgens wordt de bifurcatie van de gemeenschappelijke halsslagader blootgelegd.Vervolgens wordt een katheter ingebracht in de uitwendige halsslagader. Ten slotte wordt mannitol toegediend. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de verstoring van de bloed-hersenbarrière laten zien door extravasatie van Evan's Blauwe Kleurstof.Het belangrijkste voordeel van deze techniek boven bestaande methoden van intra-arterielle therapie is dat het geneesmiddelen mogelijk maakt om de hersenen binnen te dringen, die onder fysiologische omstandigheden niet normaal gesproken de bloed-hersenbarrière oversteken. Dit heeft gevolgen op het gebied van de neurowetenschappen omdat het ons in staat stelt nieuwe therapieën te testen die slecht in staat zijn om de bloed-hersenbarrière te passeren. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot neuro-oncologie, omdat veel chemotherapeutische middelen de bloed-hersenbarrière niet passeren.Welnu, hoewel deze methode ons inzicht geeft in nieuwe oncologie, kan het ons ook informatie verschaffen over andere neurologische stoornissen die worden behandeld met geneesmiddelen met een slechte bloed-hersenbarrière doorlaatbaarheid. We hopen dat de visuele demonstratie van deze methode onderzoekers en bekend met dierchirurgie in staat zal stellen deze techniek in hun laboratoria te gebruiken. Om te beginnen, bereid een oplossing van 25% mannitol voor en controleer of er geen kristallen zijn.Als er kristallen aanwezig zijn, los ze op door de flacon in een 80 graden Celsius waterbad te plaatsen en te roeren. Meet periodiek de massa van het dier en bereid twee 12 cc spuiten propofol voor om met een snelheid van 0,1 milliliter per minuut te worden toegediend. Nadat het dier is verdoofd in een inductiekamer, plaats het op een wegwerphanddoek en scheer de nek en binnenkant van de dijen.Plaats het dier terug in de inductiekamer gedurende drie minuten. Om voor te bereiden op intubatie om de rat te intuberen, begin met het voorbereiden van een endotracheale buis met een IV-katheter. De buis moet groot genoeg zijn om voldoende luchtstroom mogelijk te maken, maar klein genoeg om in de luchtpijp te passen zonder schade te veroorzaken.Om een stylus te maken, trek de naald uit de plastic katheter en breek de naald voorzichtig. Ongeveer een centimeter vanaf de scherpe punt, plaats de naald terug in de katheter. Hang vervolgens de rat aan zijn tanden op een schuin oppervlak, schijn een licht direct tegen de nek van het dier, uitgelijnd tussen zijn oren.Plaats vervolgens een kleine spatel in de orofarynx. Ongeveer drie centimeter. Til omhoog terwijl u voorzichtig de tong uit de mond trekt.Visualiseer de opening van de luchtpijp als een klein gaatje dat opent en sluit. Bij elke ademhaling steekt u voorzichtig de katheter in het gaatje, zorg ervoor dat u het niet in het kraakbeen van de gevoelige luchtpijp duwt. Stel de ventilator in op één liter per minuut en 60 BPM en vervolgens isofluorine op 2% Verbind vervolgens de katheter met de ventilator en plak de buis op het operatieoppervlak.Controleer of het dier verdoofd is door een teenprikken uit te voeren. Bevestig de route door alle vier ledematen in de staart op het operatieoppervlak te plakken. Reinig de geschoren nek en lies met chloorhexidinezeep drie keer.Vervolgens schrobben met chloorhexidine. Spoel drie keer. Bevestig een spuit met propofol aan een IV-verlengslang en monteer de spuit op de infusiepomp.Snij vervolgens met een scalpel door de huid van de geschoren dij zonder de spier te snijden. Gebruik vervolgens een pincet om de incisie te openen en de femorale ader te lokaliseren en trek het weefsel over de ader weg om het vat bloot te leggen. Breng een 26 G mono eject veterinaire IV-katheter in de ader in.Zodra de naald de wand van de ader doorboort, wordt het gemakkelijker om te duwen. Trek de naald terug en duw de katheter drie tot vijf minuten in het vat. Nadat de propofol-infusie is begonnen, schakel de anesthesiegas over naar een mengsel van 50% O2 en 50% N twee O en zet de isofluorine uit.Om de bifurcatie van de gemeenschappelijke halsslagader bloot te leggen, begint u met een scalpelmes om een middenlijnsnede in de nek te maken. Snijd door de oppervlakkige fascia langs de middenlijn om de sterno-hyoïde spier over de luchtpijp te bereiken. Verplaats het weefsel lateraal om een groep van drie spieren te visualiseren, de sterno-hyoïde, de di-gastrische en de sterno-mastoïde die met pincet of schaar het rattencarotisdriehoekje vormen.Separeer de fascia tussen de spieren van het carotisdriehoekje om de halsslagader bloot te leggen. Gebruik bipolaire cauter om kleine vaten te verdelen met gaas en wattenstaafjes Om het bloeden onder controle te houden, gebruik retractoren om de spieren uit elkaar te houden met pincet. Verplaats het weefsel van de halsslagader en vind de bifurcatie.Bloot de achterhoofdsslagader net distaal van de bifurcatie. Cauteriseerd het tussen pincet en gebruik een elektrocauter om het te scheiden met pincet. Blootstel de halsslagader volledig en zoveel mogelijk de uitwendige halsslagader of ECA.Bloot de superieure schildklierarterie die aftakt van de ECA distaal van de achterhoofdsslagader. Cauteriseerd het tussen pincet en scheid het om de ECA te cateteren. Plaats twee stukken van vier oh zijden onder het.Gebruik een hemostaat en grijp een lengte van het naadwerk en trek de ECA terug coly met de andere naald. Bind het met de chirurgsknoop zo ver mogelijk craniaal, distaal van de bifurcatie en proximaal van de permanente ligatuur. Bind los een andere chirurgische knoop om de slagader te ontspannen.Irrigeer het met 1% lidocaine, vul de katheter met heparine-zoutoplossing. Plaats vervolgens een tijdelijke vaatclip onder een hoek zo dicht mogelijk bij de

rat-model-blood-brain-barrier-disruption-to-allow-targeted

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Microbellen-gemedieerde focused ultrasound verstoring van de bloed-hersen barrière (BBB) ​​is een veelbelovende techniek voor niet-invasieve gerichte toediening van medicijnen in de...

MRI-geleide Verstoring van de bloed-hersen barrière met behulp van Transcraniële Focused Ultrasound in een ratmodel

In this video, we describe a comprehensive protocol to establish an in vitro model mimicking the blood-brain tumor barrier. The model holds promise to understand the delivery of therapeutic agents for the treatment of brain tumors.

Blood-Brain Tumor Barrier or BBTB Model: An Adaption of the Blood-Brain Barrier or BBB Model to Evaluate Delivery of Therapeutics to the Tumor

Oprichting van menselijke modellen van de bloed-hersenbarrière (BBB) ​​kan profiteren onderzoek naar hersenen voorwaarden in verband met BBB mislukking. We beschrijven hier een verbeterde techniek voor de bereiding van een contact BBB model dat coculturing menselijke astrocyten en brein endotheelcellen maakt aan de tegenovergestelde zijden van een poreus membraan.

Verbeterde werkwijze voor de bereiding van een Human-Cell gebaseerde, Contact Model van de bloed-hersenbarrière

Het doel van deze studie was om de reproduceerbaarheid van een in vitro BBB model met een syngene ratten co-kweek van endotheelcellen en astrocyten valideren. De endotheelcellen monolaag gepresenteerd hoge TEER en lage LY permeabiliteit. Expressie van specifieke eiwitten TJ, functionele reacties op ontstekingen en functionaliteit van vervoerders en receptoren werden beoordeeld.

Oprichting van een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van Rat bloed-hersenbarrière (BBB): een focus op BBB Ondoordringbaarheid en receptor-gemedieerd transport

Hier presenteren we een muis hersenen vasculaire permeabiliteit assay gebruik intraperitoneale injectie van fluorescerende traceurs gevolgd door perfusie die gelden voor dierlijke modellen van de bloed - hersenbarrière dysfunctie. Een hemi-hersenen wordt gebruikt voor het beoordelen van permeabiliteit kwantitatief en anderzijds voor tracer visualisatie/immunokleuring. De procedure duurt 5-6 h voor 10 muizen.

Een In Vivo bloed - hersenbarrière permeabiliteit Assay in muizen met behulp van Fluorescently label Tracers

Het algemene doel van deze procedure is bedoeld als een zeer reproduceerbaar techniek voor in vivo beoordeling van de verstoring van de bloed - hersen barrière in rat modellen van ischemische beroerte.

In Vivo eenbeoordeling van de verstoring van de bloed - hersen barrière in een Rat Model van ischemische beroerte

Hier presenteren we een protocol met een beschrijving van de instelling van een in gnudles BBB (bloed-hersenbarrière)-Minibrain polyester poreuze membraan cultuur invoegen systeem teneinde het vervoer van biomoleculen of infectieuze agentia via een menselijke BBB en hun fysiologische effect op de naburige hersencellen.

Een Model Interface menselijke Blood-Brain barrière kruisingen door ziekteverwekkers of geneesmiddelen en hun interacties met de hersenen bestuderen

Drug targeting aan tumoren van het centrale zenuwstelsel is een grote uitdaging. Hier beschrijven we een protocol om te produceren van een in vitro nabootsen van de bloed-hersen tumor-barrière lymfkliertest en/of menselijke cellen gebruiken en bespreken het belang ervan voor de voorspelbaarheid van het centrale zenuwstelsel tumor targeting in vivo.

Predicting In Vivo Payloads levering met behulp van een bloed-hersen Tumor-barrière in een schotel

De bloed-hersenbarrière (BBB) is een meercellige neurovasculaire eenheid die hersenhomeostase strak regugugaat. Door menselijke iPSCs en organ-on-chip technologieën te combineren, hebben we een gepersonaliseerde BBB-chip gegenereerd, geschikt voor ziektemodellering en CNS-voorspellingen voor medicijndoordring. Een gedetailleerd protocol wordt beschreven voor de productie en werking van de BBB-chip.

Generatie van een menselijke iPSC-gebaseerde bloed-hersenbarrière chip

Dit protocol beschrijft een methode om een menselijk bloed-hersenbarrière (BBB) in vitro model vast te stellen. De endotheelcellen en pericyten worden aan elke kant van een insertfilter (bloedcompartiment) gezaaid en astrocyten worden in de onderste put (hersencompartiment) gezaaid. Het gekarakteriseerde model werd gebruikt voor nanodeeltjestransportexperimenten.

Een drievoudig kweekcelsysteem dat de menselijke bloed-hersenbarrière modelleert

De bloed-hersenbarrière (BBB) speelt een cruciale rol bij het in stand houden van een stabiele en gezonde hersenomgeving. BBB-disfunctie wordt in verband gebracht met veel neurologische aandoeningen. We hebben een 3D, stamcel-afgeleid model van de BBB ontwikkeld om cerebrovasculaire pathologie, BBB-integriteit te onderzoeken en hoe de BBB wordt veranderd door genetica en ziekte.

Reconstructie van de bloed-hersenbarrière in vitro om neurologische aandoeningen te modelleren en therapeutisch aan te pakken

Leer de bloed-hersenbarrière verstoren bij ratten met intra-arteriële mannitol-infuus via de arteria carotis externa. Deze methode verbetert de aflevering van geneesmiddelen naar de hersenen.

Rat Model van bloed-hersen barrière Verstoring toestaan ​​Gerichte Neurovasculaire Therapeutics

Meer video's verkennen

Rat Model van bloed-hersen barrière Verstoring toestaan Gerichte Neurovasculaire Therapeutics