Name: Inducerende Myointimal Hyperplasie Versus atherosclerose in Muizen: Een inleiding van twee geldige Models (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Leer twee muismodellen voor aortavernauwing: ballonkatheterisatie voor myointimale hyperplasie en dieetmanipulatie bij APOE-null muizen voor atherosclerose. Deze methoden helpen onderzoekers vasculaire ziekte mechanismen bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Christiane Pahrmann voor technische ondersteuning. SS ontving gelden van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-2 en SCHR992/4-2).

Alle dierlijke werkzaamheden moeten worden uitgevoerd volgens relevante richtlijnen verzorging van dieren. Verkrijgen institutionele goedkeuring voor dierlijke werk vóór begin protocol. 1. Myointimal Hyperplasia Model (A) Voor de intima hyperplasie model, kopen C57BL/6J (Voorraad nummer 000664, C57BL/6J) muizen op de leeftijd van 8 weken met een gewicht van ongeveer 25 g. Huis muizen voor deze experimenten onder gebruikelijke voorwaarden; voeden standaard muis muizen chow en bieden water ad libitum. <ol><li> Muis voorbereiding: Introduceer de muis om een verdoving staat met isofluraan (2%) gebruik van een inductie kamer. <ol><li> Verwijder de buik haar met een tondeuse, leg de muis op zijn rug en ter dekking van zijn neus en mond met het gezichtsmasker om de narcose te verzekeren. </li><li> Met Provo-Jodium, ontsmet de buikstreek universeel, gevolgd door 80% ethanol, in twee cycli. </li><li> Zorgen voor de afwezigheidvan reflexen door te knijpen de achterste ledematen om de voldoende diepte van de anesthesie te monitoren. </li><li> Scheid de huid en spieren langs de linea alba in twee stappen om de buikorganen bloot. </li><li> Leg de darmen in een zoutoplossing gehydrateerd handschoen. Wikkel de handschoen rond de darmen om ze vochtig te houden. </li><li> Aandachtig duidelijk het vetweefsel bevloering de abdominale aorta weg. Expose de infrarenale aorta tot zijn vertakking, het verzorgen elke tak schepen niet te verwonden. </li><li> Plaats eerst een microchirurgische klem op de proximale, infrarenale aorta het afsluiten van de bloedstroom. Nu, breng dan een tweede distale klem naast de aortabifurcatie. </li><li> Wanneer de bloedstroom wordt onderbroken, een kleine incisie in de aorta dicht bij het proximale klem. </li><li> Plaats de ballon-katheter, die is bevochtigd met 0,9% zoutoplossing en vooruit naar het distale klem van de aorta. </li><li> Voor endotheelschade, beroven de aorta door het opblazen van de balloon voorzichtig en langzaam trekken van de katheter in de richting van het proximale klem. </li><li> Herhaal de denudatie manoeuvre tweemaal. </li><li> Verwijder de katheter en sluit de aorta incisie met 10-0 Prolene lopen hechtingen. </li><li> Open de distale klem voorzichtig. In geval van een bloeding op de aortotomy plaats, sluit de klem weer, zoek het bloeden en zet extra onderbroken steken, als dat nodig is. </li><li> Als er geen bloeden kan worden waargenomen, opent u langzaam de proximale klem. </li><li> Een aorta-puls moet distaal zichtbaar vanaf de incisie. Nu de darmen kan worden geregeld terug in situ. </li><li> Spoel de buikholte gebruik voorverwarmde steriele zoutoplossing. </li><li> Sluit de buikwand te beginnen met de spierlaag behulp 6-0 Prolene lopen hechtingen. </li><li> Vervolgens wordt de huid aan te passen bij het gebruik van 5-0 prolene uitvoeren van lopende hechtingen. </li><li> Gedurende de tijd dat de muis nog verdoofd toepassing 4-5 mg / kg Carprofen via een subcutane injectie. </li><li> Voeg Metamizol aan het drinkwater (50 mg Metamizol per 100 ml) voor pijnbestrijding en verder gedurende 3 dagen na de operatie. Monitor dier gedurende herstel. Opmerking: De observatieperiode voor dit model is 28 dagen. </li></ol></li></ol> 2. Atherosclerose Model (B) Voor de atherosclerose model, kopen apolipoproteïne E deficiënte (ApoE - / -) muizen (Voorraad nummer 002052, B6.129P2-Apoetm1Unc / J) op een leeftijd van 4 weken, en vervolgens gevoed voor 4-6 maanden. Huis muizen voor deze experimenten onder gebruikelijke voorwaarden; voeden muizen hoge lipide westerse dieet bij aankomst (Harlan Laboratories TD.88137) en zorgen voor water ad libitum voor een duur van 4 tot 6 maanden. <ol><li> Muis voorbereiding: <ol><li> Voeden de ApoE - / - muizen met westerse dieet te beginnen bij 4 weken oud. Dieetmanipulatie moeten rechtstreeks beginnen bij aankomst. </li><li> Handhaaf westerse dieet gedurende de duur van het experiment. &lt;/ Li&gt; </ol></li></ol> 3. Analyse <ol><li> Myointimal hyperplasie model (A) Het gebied van belang in dit model is het &quot;beschadigde oppervlak&quot;. Opties voor analyse omvatten luminale vernietiging, I / M-verhouding (intima / media verhouding), maximale myointima dikte myointimal gebied Trichrome kleuring voor fibrose, en H &amp; E kleuring van mononucleaire cellen (zoals weergegeven in figuren 1A-1C). Volgens de wetenschappelijke vraag talrijke andere kleuringen zoals Picrosirius rood voor collageen, immunohistochemie en confocale werkwijzen kunnen worden toegepast. </li><li> Atherosclerose model (B) De gebieden van belang in dit model zijn de aortaklep, de aortaboog en de dalende aorta. Opties voor analyse: Soedanrood kleuring voor lipiden en trichroomkleuring van de aortaklep, de aortaboog en de dalende aorta (zie figuur 1D). Dit model levert ook een verscheidenheid aan andere vlekken opties zoalsbijvoorbeeld Oil Red O voor neutrale lipiden, Picrosirius rood, immunohistochemie, en confocale methoden. <ol><li> Soedan rode vlekken: Voer de Soedan rode vlekken op vers geoogste aortaweefsel. <ol><li> Verwijder de voeding 6h voor de oogst. </li><li> Introduceer de muis om een ​​verdoving staat met isofluraan (2%) met behulp van een inductie kamer. Verzekeren de afwezigheid van reflexen door te knijpen de achterste ledematen om de voldoende diepte van de anesthesie te monitoren. </li><li> Open de kist; afgesneden van de apex van het hart en perfuseren via de linker ventrikel, eerst met zoutoplossing (3 ml), gevolgd door 4% PFA (3 ml) via de aortawortel de aorta vast. </li><li> Bevrijd de aorta van de wortel naar de splitsing. Probeer om vetweefsel te verwijderen zoveel mogelijk. </li><li> Snijd het hart en de aorta wortel, en bewaar ze in 4% PFA voor histologie. </li><li> Voor histologie de aortawortel dient zorgvuldig in paraffine blok geplaatst in een rechtopstaande positie op het uitsnijden van de aor toestaantic wortel genereren dia&#39;s die alle 3 valvulaire folders weer te geven. </li><li> Snijd het ene uiteinde van de aorta boom en zet hem op de siliconenlaag met fijne pennen. Open de aorta lengterichting en bevestig de aorta weefsel. </li><li> Spoel het weefsel met 50% ethanol. Dompel het weefsel met Sudan III kleuring oplossing voor ongeveer 15 minuten. </li><li> Licht spoelen met 50% ethanol om het overtollige Soedan III te verwijderen. (Let op: 50% ethanol kan de kleurstof weg te wassen.) Spoel met dH 2 O, en foto&#39;s te nemen voor verdere analyse. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Manuel, D. G., Leung, M., Nguyen, K., Tanuseputro, P., Johansen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+cardiovascular+disease+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Burden of cardiovascular disease in Canada.</a> Can J Cardiol. 19, 997-1004 (2003).</li>
<li>ER, O. B., Ma, X., Simard, T., Pourdjabbar, A., Hibbert, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+neointima+formation+following+vascular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Hematol+Disord+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of neointima formation following vascular injury.</a> Cardiovasc Hematol Disord Drug Targets. 11, 30-39 (2011).</li>
<li>Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+atherosclerosis%3A+a+perspective+for+the+1990s%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of atherosclerosis: a perspective for the 1990s.</a> Nature. 362, 801-809 (1993).</li>
<li>Meng, X., Zhang, F., Valji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+guidance+for+the+creation+of+a+small+animal+model+of+aortic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Interv+Radiol%22%5BJournal%5D)">Ultrasound guidance for the creation of a small animal model of aortic injury.</a> J Vasc Interv Radiol. 22, 1193-1197 (2011).</li>
<li>Deuse, T., Koyanagi, T., Erben, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+inhibition+of+epsilon+protein+kinase+C+inhibits+vascular+restenosis+after+balloon+injury+and+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Sustained inhibition of epsilon protein kinase C inhibits vascular restenosis after balloon injury and stenting.</a> Circulation. 122, 170-178 (2010).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Sultan, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+restenosis+development+after+mechanical+injury%3A+a+new+field+of+application+for+malononitrilamides%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of restenosis development after mechanical injury: a new field of application for malononitrilamides.</a> Cardiology. 108, 128-137 (2007).</li>
<li>Tao, M., Mauro, C. R., Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> Am J Pathol. 182, 277-287 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).</li>
<li>Hua, X., Deuse, T., Michelakis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+internal+mammary+artery+%28IMA%29+transplantation+and+stenting%3A+a+human+model+to+study+the+development+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Human internal mammary artery (IMA) transplantation and stenting: a human model to study the development of in-stent restenosis.</a> J Vis Exp. , 3663(2012).</li>
<li>Daugherty, A., Whitman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+atherosclerosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Methods Mol Biol. , (2003).</li>
<li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arterioscler Thromb. 14, 133-1340 (1994).</li>
<li>Zhang, Y., Li, L., You, J., Cao, J., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+7-difluoromethyl-5%2C+4%27-dimethoxygenistein+on+aorta+atherosclerosis+in+hyperlipidemia+ApoE%28-%2F-%29+mice+induced+by+a+cholesterol-rich+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of 7-difluoromethyl-5, 4'-dimethoxygenistein on aorta atherosclerosis in hyperlipidemia ApoE(-/-) mice induced by a cholesterol-rich diet.</a> Drug Des Devel Ther. 7, 233-242 (2013).</li>
<li>Rudolph, T. K., Rudolph, V., Edreira, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitro-fatty+acids+reduce+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Nitro-fatty acids reduce atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 30, 938-9345 (2010).</li>
<li>Rondelet, B., Kerbaul, F., Motte, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bosentan+for+the+prevention+of+overcirculation-induced+experimental+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Bosentan for the prevention of overcirculation-induced experimental pulmonary arterial hypertension.</a> Circulation. 107, 1329-1335 (2003).</li>
<li>Zeibig, S., Li, Z., Wagner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+oxLDL+binding+protein+Fc-CD68+on+plaque+extension+and+vulnerability+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of the oxLDL binding protein Fc-CD68 on plaque extension and vulnerability in atherosclerosis.</a> Circ Res. 108, 695-703 (2011).</li>
<li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myointimal+hyperplasia%3A+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+organs%22%5BJournal%5D)">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artificial organs. 15, 103-118 (1991).</li>
<li>Nitschke, Y., Weissen-Plenz, G., Terkeltaub, R., Rutsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Npp1+promotes+atherosclerosis+in+ApoE+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+and+molecular%22%5BJournal%5D)">Npp1 promotes atherosclerosis in ApoE knockout mice.</a> Journal of cellular and molecular. 15, 2273-2283 (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hoewel beide ziekten daarmee soortgelijke symptomen bij de patiënt, de onderliggende mechanismen van plaque ontwikkeling en derhalve de behandeling benaderingen erg verschillend 2. In verschillende vormen van arteriële stenose klinische bevindingen bij de patiënten en de looptijd van plaqueontwikkeling afhankelijk van het onderliggende mechanisme. Afhankelijk van de klinische bevindingen in de patiënt moeten verschillende methoden monsteranalyse worden uitgevoerd 5,15. ...

In geïndustrialiseerde landen blijft ischemische hartziekten een belangrijke oorzaak van sterfte 1. De oorzaken voor coronaire stenose zijn legio en omvatten myointimal hyperplasie evenals atherosclerose, met revascularisatie resterende de meest voorkomende behandeling strategie 2. Onderzoek modellen duidelijk onderscheid tussen de mechanistische paden van intimale hyperplasie en atherosclerose zijn essentieel voor de pathobiological en pathofysiologische processen arteriële plaque ontwikkeling te onderzoeken. In deze video twee verschillende muismodellen gebruikt om ofwel de ontwikkeling van myointimal hyperplasie of atherosclerose te bestuderen worden geïntroduceerd. Myointimal hyperplasie wordt verondersteld te vormen via de &quot;responstijd naar schade&quot; paradigma oorspronkelijk beschreven voor atherosclerose 3. De mechanische verstoring van de endotheliale laag leidt tot een intensieve verbouwing versterkt door paracriene effecten. Er zijn verschillende different diermodellen vaak gebruikt om myointimal hyperplasie studeren. Sommige groepen gebruiken dan metaal in de omhooggaande aorta van ratten 4. De aorta erosie model uitgevoerd met een ballonkatheter wordt ook vaak gebruikt in laboratoriumratten 5,6. De intima hyperplasie model uitgevoerd in het laboratorium muizen 7 implementeert ligatie van de halsslagader en induceert myointimal laesies 8. In ons laboratorium, de abdominale aorta erosie model - evenals een gehumaniseerd stent restenose model 9 worden algemeen gebruikt - de ontwikkeling van myointimal hyperplasie bestuderen. Deze video benadrukt dat het kiezen van de juiste experimentele diermodel is cruciaal voor mechanistische of pathofysiologische studies van arteriële stenose. Myointimal hyperplasie modellen moeten worden onderscheiden van atherosclerose modellen. Voor deze laatste, apolipoproteïne E deficiënte (ApoE - / -) muizen worden in combinatie met westerse dieet vaak gebruikt om atheroscl inducerenerotische laesies 10,11,12,13. Voorbeelden voor de inductie van beide soorten myointimal ziekte bij muizen hier, samen met verschillende model aangepast opties vat stenose 14 te analyseren.

<table><tbody><tr><td>Thyoglycollate Broth 3%</td><td>Fluka</td><td>70157</td><td>poeder</td></tr><tr><td>PFA 4%</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>#157135S</td><td>20%</td></tr><tr><td>Sudan III kleuringsoplossing</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S4131</td><td>poeder</td></tr><tr><td>muis C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Stock # 0006664</td><td></td></tr><tr><td>muis ApoE -/-</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Stock #002052</td><td></td></tr><tr><td>Western Dieet</td><td>Harlan Laboratories</td><td>TD.88137</td><td></td></tr><tr><td>haartrimmer</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td></td><td>Isofluraan</td></tr><tr><td>microchirurgische klem</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4 mm</td></tr><tr><td>klem applicator</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>katheter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 proleennaad</td><td>Ethicon</td><td>788G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 proleennaad</td><td>Ethicon</td><td>8709H</td><td></td></tr><tr><td>5-0 proleennaad</td><td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Carprofen</td></tr><tr><td>Metacam 1,5 mg/ml</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td></td><td>Metamizol</td></tr></tbody></table>

inducerende myointimal hyperplasie versus atherosclerose in muizen: een inleiding van twee geldige models

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Diverse in vivo laboratorium knaagdiermodellen voor de inductie van slagader stenose zijn ingesteld om ziekten die arteriële plaque vorming en vernauwing bevatten zoals waargenomen bijvoorbeeld ischemische hartziekte nabootsen. Twee zeer reproduceerbaar muismodellen - zowel resulterend in stenose, maar elke onderliggende waarde een andere weg van ontwikkeling - worden hier geïntroduceerd. De modellen zijn de twee meest voorkomende oorzaken van stenose; namelijk een muismodel voor elke myointimal hyperplasie, en atherosclerose worden getoond. Om myointimal hyperplasie, wordt een ballonkatheter letsel van de abdominale aorta uitgevoerd. Voor de ontwikkeling van atherosclerotische plaque, het ApoE - / - is muismodel combinatie met westerse vet dieet gebruikt. Verschillende model aangepast opties voor het meten en evalueren van de resultaten worden genoemd en beschreven in dit manuscript. De introductie en de vergelijking van deze twee modellen biedt information voor wetenschappers om de juiste slagader stenose model overeenkomstig de wetenschappelijke vraag kiezen.

Figuur 1 toont de verschillende analyse-opties en de geïnduceerde ziekte staat voor beide modellen. Voor de intima hyperplasie model, is de analyse van representatieve dwarsdoorsneden in trichroomkleuring getoond. Uit deze dwarsdoorsneden, kunnen de resultaten zoals I / M-verhoudingen, maximaal plaquedikte maximale dikte van de intima in de lumen luminale vernietiging in procenten, en plaque ruimte worden gemeten en berekend. Om de resultaten van de atherosclerose model eval...

Deze video toont twee modellen van intima plaque ontwikkeling in muizen slagaders en benadrukt de verschillen in myointimal hyperplasie en atherosclerose.

Inducerende Myointimal Hyperplasie Versus atherosclerose in Muizen: Een inleiding van twee geldige Models

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om twee valide diermodellen te introduceren die via verschillende mechanismen leiden tot vernauwing van de aorta. Het eerste model is balloncatheterisatie van de aorta om de ontwikkeling van myointimale hyperplasie te induceren. Eerst wordt de infrarenale abdominale aorta blootgelegd en afgeklemd.Vervolgens wordt de aorta geopend met een transversale incisie en wordt de ballonkatheter ingebracht. Het endotheel van de aorta wordt daarna verwijderd met de opgeblazen katheter en de chirurgische ingreep wordt voltooid. Het tweede model is een dieetmanipulatie van transgene APOE-null muizen om atherosclerotische plaques te creëren.Deze muizen worden onder standaardcondities gehouden en gedurende vier tot zes maanden gevoed met een westers dieet met een hoog lipidengehalte. Uiteindelijk laat histologische analyse van de chirurgisch geïnduceerde myo-intimale hyperplasie en het model voor dieetrestrictie zien dat deze resulteren in een verschillende vernauwing van het lumen. Vandaag tonen we u twee verschillende modellen om lumenvernauwing op te wekken: het muismodel waarbij een ballonkatheter wordt gebruikt om vaatschade te induceren en het model voor arteriosclerose.Door gebruik te maken van transgene muizen met een westers dieet kan het ballonkathetermodel helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van stenose. Het transgene homozygote upper E mutant muismodel wordt gebruikt om de pathofysiologie van atherosclerose te bestuderen. Voor het model voor intimale hyperplasie worden C 57 black six J muizen gebruikt met een gewicht van ongeveer 25 gram.Houd ze onder normale omstandigheden met een normaal dieet. Na het anesthetiseren van de muis met 2% isofluraan, trimt u het haar op de buik en dient u carprofen via een subcutane injectie toe voor analgesie. Desinfecteer vervolgens de huid afwisselend met Povidon-jodium en 80% ethanol in twee cycli.Controleer nu op de afwezigheid van reflexen door middel van een teenknijp. Begin de operatie door de huid en spieren langs de linea alba te scheiden. Wikkel vervolgens de darmen in een met zoutoplossing bevochtigde handschoen en verwijder daarna zorgvuldig het vetweefsel om de abdominale aorta vrij te leggen.Leg nu de infrarenale aorta vrij tot aan de bifurcatie. Let er hierbij op geen zijtakken te beschadigen. Klem nu de aorta af.Plaats eerst een microsurgische klem op de proximale infrarenale aorta om de bloedstroom te stoppen. Plaats vervolgens een tweede distale klem naast de aortabifurcatie. Zodra de bloedstroom is onderbroken, wordt er een kleine incisie in de aorta gemaakt vlakbij de proximale klem.Voer de katheter in richting de distale klem van de aorta om een endotheelschade aan te brengen. Denudeer de aorta door de katheterballon op te blazen en de katheter vervolgens voorzichtig en langzaam in de richting van de proximale klem terug te trekken. Herhaal deze handeling tweemaal, voor een totaal van drie aorta-inflaties.Verwijder nu de katheter en sluit de incisie in de aorta met 10 au proline doorlopende hechtingen. Terwijl de hechtingen op hun plaats zitten, wordt de distale klem voorzichtig geopend indien er sprake is van bloedingen bij de AOR-autotomieplaats. Sluit de klem opnieuw, lokaliseer de bloeding en stop deze met aanvullende onderbroken hechtingen.Wanneer er geen bloedingen optreden, wordt de proximale klem langzaam geopend. Een aortapuls moet zichtbaar zijn distaal van de incisie. Plaats nu de darmen in C twee.Sluit vervolgens de buikwand, beginnend met de spierlaag, met zes doorlopende OTT-prolinehechtingen. Sluit daarna de huid met vijf OTT-hechtingen en plaats de muis terug in de kooi. Voeg gedurende de eerste drie postoperatieve dagen metrazol toe aan het drinkwater voor pijnbestrijding.Houd het dier gedurende het herstel, dat ongeveer 28 dagen duurt, in de gaten. Voor het atherosclerosemodel worden vier weken oude A POE-deficiënte muizen gebruikt. Huisvest deze muizen onder standaardcondities met een westers dieet met een hoog vetgehalte gedurende vier tot zes maanden.Houd dit dieet gedurende het hele experiment in stand. Onttrek zes uur voor het oogsten van de aorta de toegang tot voedsel. Bereid de muis vervolgens voor op de operatie zoals beschreven in de voorgaande sectie.Begin de operatie door de borstkas te openen. Snijd vervolgens de apex van het hart af en perfuseer deze onder milde druk met drie milliliter 4% paraformaldehyde via de aortawortel om de aorta te fixeren. Maak daarna de aorta vrij van de wortel tot aan de bifurcatie.Probeer zoveel mogelijk van het vetweefsel te verwijderen. Snijd vervolgens de aortaboog af en bewaar deze in 4%para formaldehyde. Verplaats nu het hart en de aortaboom naar een met silicone beklede schaal met PBS in de schaal.Snijd één uiteinde van de aortaboom af en fixeer deze met fijne pinnen op de siliconenlaag. Open de aorta in de lengterichting en laat het aortaweefsel enkele minuten in PBS bij kamertemperatuur liggen. Spoel het weefsel vervolgens één keer met 50% ethanol en dompel het onder in een Sudan-bad.Ten derde, de weefsels ongeveer 15 minuten inkleuren met de kleuringsoplossing. Spoel het weefsel na het kleuren snel enkele seconden met 50% ethanol om enkel het overtollige Sudan te verwijderen. Te lang spoelen zal te veel kleurstof verwijderen; spoel het weefsel onmiddellijk met gedestilleerd water en ga over tot beeldvorming. Voor het model van myointimale hyperplasie werden gedenudeerde muis aorta's geoogst, in paraffine ingebed en gekleurd met trichroom. De ratio's werden berekend op basis van de trichroomgekleurde coupes door de dikte van de intima en de media te meten.Met behulp van computeranalyse gevolgd door de berekening van de ratio, werd de maximale plaque-dikte gemeten als de maximale intimadikte in het lumen via een computer morpho tree. Het percentage lumenobliteratie werd berekend als de ratio van het nieuwe binnenlumen ten opzichte van het oorspronkelijke lumen. Het plaque-oppervlak werd berekend door het nieuwe binnenlumen af te trekken van het oorspronkelijke lumen.Dezelfde analyses werden uitgevoerd op met trichroom gekleurde dwarsdoorsneden van het atherosclerosemodel bij de aortaklep, de aortaboog en de descenderende aorta, uitsluitend voor het atherosclerosemodel. De descenderende aorta werd longitudinaal geopend en gekleurd met Sudanrood. Het plaque-oppervlak en het totale aortaoppervlak werden met behulp van een computer gemeten voor de analyse van beide modellen.Andere methoden, zoals histopathologie en confocale immunofluorescentiemicroscopie, kunnen worden uitgevoerd om vragen te beantwoorden over luminale obliteratie, morfologie en cellulariteit. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

inducing-myointimal-hyperplasia-versus-atherosclerosis-mice-an

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We beschrijven protocollen voor onze muis graft arteriosclerois (GA) modellen die tussenkomst van een muis bloedvatsegment betrekken in een ontvanger van dezelfde inteeltstam. Door terugkruisen extra genetische veranderingen in het vat donor kan het model het effect van specifieke genen op GA beoordelen.

Muismodellen voor Graft Arteriosclerosis

We beschrijven procedures om atherosclerotische laesies in muismodellen te kwantificeren en te karakteriseren door middel van nauwkeurig snijden van de aortasinus en de ascenderende aorta, gecombineerd met histochemische en immunohistochemische analyse.

Kwantitatieve analyse en karakterisering van atherosclerotische laesies in de muis aortasinus

Diermodellen hebben bewezen waardevolle instrumenten definiëren gastheer en pathogeen specifieke mechanismen die bijdragen aan de ontwikkeling van chronische ontsteking. Hier beschrijven we een muismodel van orale infectie met het humaan pathogeen Porphyromonas gingivalis en detail methoden om de progressie van inflammatie lokale en systemische plaatsen.

Een muismodel voor pathogenen geïnduceerde Chronische ontsteking op lokale en systemische sites

De muis dijbeenslagader draad letsel model van restenose is technisch uitdagend. In dit protocol laten we de belangrijkste technische gegevens van essentieel belang voor het succesvol uitvoeren van draad letsel aan consistente neointima voor studies van restenose induceren.

Een muizenmodel van slagaderrestenose: technische aspecten van Femorale Wire Injury

Deze studie beschrijft een invasieve procedure voor de inductie van versnelde atherosclerose bij muizen. In vergelijking met andere methoden met behulp van elektrisch- of cryo-geïnduceerde letsel, mechanisch geïnduceerde letsel bootst de menselijke conditie van restenose na revascularisatie therapieën en is ideaal voor de studie van de betrokken moleculaire mechanismen.

Inductie van versnelde atherosclerose bij muizen: het "Wire-Injury" Model

Dit artikel demonstreert een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie (MH) na de ballon van de aorta blessure.

Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta

Murine modellen van atherosclerose zijn nuttige instrumenten om te onderzoeken van pathogene trajecten op moleculair niveau, maar vereisen gestandaardiseerde kwantificering van de ontwikkeling van de laesie. Dit protocol beschrijft een geoptimaliseerde methode om te bepalen van de laesie grootte in de grote arteriële vaten, met inbegrip van de aorta wortel, aortaboog, en brachiocephalische slagader.

Kwantificering van atherosclerose bij muizen

Dit artikel demonstreert een efficiënte chirurgische aanpak om acute ischemie vast te stellen bij muizen met een kleine incisie. Deze aanpak kan door de meeste onderzoeksgroepen worden toegepast zonder laboratoriumupgrades.

Een gewijzigd chirurgisch model van ischemie van de achterpoten in ApoE-/- Muizen met behulp van een miniatuurincisie

Hier presenteren we een muizenmodel voor anastomose van de dijbeenslagader, en bieden we onderzoekers een waardevol diermodel om vasculaire anastomosestenose te bestuderen en te simuleren. Deze ontwikkeling is cruciaal voor het vergroten van ons begrip van de pathofysiologie die aan deze aandoening ten grondslag ligt en voor het mogelijk maken van nauwkeuriger en effectiever onderzoek naar vaatziekten.

Ontwikkeling van een muizenmodel voor anastomosestenose van de dijbeenslagader

De beperkende manchet die in dit artikel is bedoeld om atherosclerose te induceren in de muis gemeenschappelijke halsslagader. Door de conische vorm van de binnenste lumen van de geïmplanteerde cuff genereert goed gedefinieerde gebieden met een lage, hoge en oscillerende shear stress triggering de ontwikkeling van atherosclerotische letsels van verschillende inflammatoire fenotypes.

Implantatie van een carotis Cuff voor het activeren van Shear-stress geïnduceerde atherosclerose in Muizen

Leer twee muismodellen voor aortavernauwing: ballonkatheterisatie voor myointimale hyperplasie en dieetmanipulatie bij APOE-null muizen voor atherosclerose. Deze methoden helpen onderzoekers vasculaire ziekte mechanismen bestuderen.

Inducerende Myointimal Hyperplasie Versus atherosclerose in Muizen: Een inleiding van twee geldige Models

Meer video's verkennen