Name: Milieu Modulaties van het aantal dopaminesysteem Neuronen in volwassen muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Ontdek hoe milieumanipulaties de hersenplasticiteit en het gedrag van volwassen muizen beïnvloeden door middel van gepaarde huisvesting en verrijkte omgevingen. Deze methode helpt onderzoekers neuronale veranderingen in het dopaminesysteem te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door de National Health and Medical Research Council of Australia (NHMRC) Projectsubsidie 1022839. AJH is een Future Fellow (FT100100835) van de Australian Research Council (ARC) FT3. Het Florey Institute of Neuroscience and Mental Health erkent de steun van de Operational Infrastructure Support Grant van de regering van Victoria’s.

OPMERKING: Alle experimentele procedures op dieren werden goedgekeurd door de Florey Instituut voor Neurowetenschappen en geestelijke gezondheid Animal Ethics Committee en voldoen aan de Australische National Health en Medical Research Council gepubliceerd gedragscode voor de verzorging en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden (7 e editie, 2004). 1. Milieu Manipulaties <ol><li> Geslacht Koppelen <ol><li> Gebruik geslachtsrijp (&gt; 8 weken oud), leeftijd gematchte mannelijke en vrouwelijke muizen. LET OP: Wij gebruiken meestal de C57BL / 6 muizen, maar hebben dezelfde resultaten met behulp van Zwitserse muizen in dit protocol had. We gebruiken meestal n = 8 mannen en n = 8 vrouwtjes voor elk experiment verdeeld in n = 2 male-male paren (n = 4 mannetjes), n = 2 vrouwelijke uiteinden paren (n = 4 vrouwtjes), en n = 4 man-vrouw paren (n = 4 reuen en n = 4 vrouwtjes). </li><li> Bij aankomst in het dier bedrijf faciliteit, de groep-house de muizen naar geslacht voor&gt; 3 dagen om te acclimatiseren. Hier en throughout het geslacht pairing, houd externe prikkels uit de omgeving (bijvoorbeeld de omgevingstemperatuur, licht: donker cyclus, voedsel, water, behandeling en reiniging) constante of verdeel eveneens om alle muizen. </li><li> Willekeurig elke muis toewijzen aan een man-man paar, een vrouw-vrouw paar, of een man-vrouw paar. Plaats elk paar in een schone kooi afzonderlijk (2 muizen / kooi) met ad libitum toegang tot voedsel en water, en eenvoudig te huisvesten op deze wijze continu gedurende 7 dagen. OPMERKING: Routine veeteelt is OK in deze periode, maar moet eerlijk worden verdeeld over alle muizen. Zorg ervoor dat het koppelen van de mannelijke en vrouwelijke nestgenoten te voorkomen. </li></ol></li><li> Milieu-Verrijking <ol><li> Gebruik geslachtsrijp (&gt; 8 weken oud), leeftijd gematchte mannelijke of vrouwelijke muizen. OPMERKING: We gebruiken meestal n = 18 muizen per experiment, verdeeld in n = 6 / behandelingsgroep. </li><li> Bij aankomst in het dier bedrijf faciliteit houd ze-groep gehuisvest in identieke standaard ondergebracht (SH) (bv </em&gt; Zie hieronder) voorwaarden in dit stadium voor&gt; 3 dagen om te acclimatiseren. Hier en gedurende het experiment, houdt vreemde omgevingsstimuli (bijvoorbeeld omgevingstemperatuur, licht: donker cyclus, voedsel, water, behandeling en reiniging) constant en gelijkmatig verspreiden naar alle muizen. </li><li> Om het milieu verrijking beginnen, willekeurig elke muis naar een van de 3 groepen toe te wijzen: SH; loopwiel (RW) of verrijkt milieu (EE) en plaats elke groep muizen samen in dezelfde schone kooi met ad libitum toegang tot voedsel en water. LET OP: Hier grotere rat houdt kooien voor alle groepen, het meten van 27 cm breed, 42 cm lang en 16 cm diep werden gebruikt. <ol><li> Daarnaast bieden de volgende omgevingsomstandigheden aan elke groep: SH met alleen nest (papier pellets of zaagsel) op de vloer; RW bestaande uit SH plus 2 loopwielen; EE bestaande RW plus speelgoed (touwen, ladders, tunnels, en objecten zoals lege papieren handdoek rollen en stukjes weefsel papier) waarmee explore, spelen, klimmen, verstoppen, en nest. </li><li> Onderbrengen in deze wijze continu gedurende 14 dagen. OPMERKING: Routine veeteelt is OK in deze periode, maar moet eerlijk worden verdeeld over alle muizen. </li></ol></li><li> Onderwerp EE muizen om extra &#39;super-verrijking&#39; (SE) door ze samen te brengen in een grotere kooi met daarin roman speelgoed voor 1 uur / dag (zelfde uur per dag), 5 dagen / week. LET OP: Hier werd een 46 cm breed, 69 cm lang en 40 cm diep kunststof kuip gebruikt. <ol><li> Handhaaf nieuwigheid door de presentatie van een andere set van speelgoed elke sessie. Schoon speelgoed die opnieuw worden voorgelegd aan muizen met zeepwater en 80% ethanol om geuren te verwijderen. </li><li> Na elke SE-sessie, de terugkeer van de muizen om hun EE kooi. Handvat SH en RW muizen hetzelfde als SE muizen (met uitzondering van de SE zelf) gedurende deze periode (bijvoorbeeld verwijderen en terug te keren elk SH en RW muis van en naar zijn kooi). </li></ol></li></ol></li></ol><ol><li> Voorbereiding <ol><li> Gebruik steriele osmotische pompen en herseninfusiekit kits, die commercieel verkrijgbaar zijn. De dag voor de implantatie, met behulp van aseptische techniek, prime de implantaten door het invullen van elke pomp, verbindingsbuis en canule met steriele geneesmiddel of vehikel oplossing (zoals beschreven in de gebruiksaanwijzing van de pompen meegeleverd). Sluit ze elkaar en incubeer in steriele zoutoplossing overnacht bij 37 ° C. Incubeer drugs-en-voertuig gevulde implantaten los om kruisbesmetting te voorkomen. </li></ol></li><li> Chirurgie. OPMERKING: Afhankelijk van het land van de experimentator worden speciale dierproeven vergunningen of quota die nodig is om dergelijke vormen van chirurgie en postoperatieve experimenten na te streven. <ol><li> Steriliseren alle chirurgische apparatuur en maken gebruik van aseptische technieken. Verdoven van een muis (bijvoorbeeld met behulp van 1-2% isofluorane in de lucht) en plaats deze in een m³otaxic headframe. Controleer de diepte van de anesthesie tijdens de gehele procedure en beheren verdere verdoving als nodig is (bijvoorbeeld ontbreken van ledematen terugtrekking aan schadelijke poot snufje is een indicatie van een adequate anesthesie). Zorg ervoor dat de ogen worden beschermd tegen uitdroging door smeermiddel oogzalf, en dat de lichaamstemperatuur van de muis normaal tijdens de gehele procedure blijft. </li><li> Voeg een middellijn incisie door de huid vanaf tussen de ogen en afwerking 2 cm posterieur aan de achterkant van de schedel. Blunt ontleden de huid weg van de onderliggende fascia over de rug van de muis een subcutane &#39;pocket&#39; groot genoeg om gemakkelijk de pomp en de verbindingsbuis wanneer de canule wordt ingebracht (de verbindingsbuis niet worden gebogen na voltooiing) creëren. Schraap duidelijk de fascia uit over het dorsale aspect van de schedel. </li><li> Met behulp van een ongeveer 1,5 mm diameter tandheelkundige braam, drill down in de schedel op het juiste stereotaxisch coördineert until een dunne, flexibele laag van het bot blijft. Schil deze laag weg met behulp van fijne pincet (dit voorkomt beschadiging van de onderliggende dura mater en de hersenen met de tandheelkundige braam). Controleer de schedel wordt gereinigd van bloed en botfragmenten, en dat er geen verdere bloeding. </li><li> Met de canule in het bezit van een canule houder, plaats de pomp en de verbindingsbuis in het onderhuidse &#39;pocket&#39; bovenliggende terug van de muis. Vervolgens plaatst de punt van de canule in de juiste stereotaxische coördinaten en op het oppervlak van de hersenen. Verlagen zorgvuldig de canule in de hersenen, maar stoppen met ongeveer 1 mm kort van de vereiste diepte. OPMERKING: De resterende diepte zal worden onderhandeld na het aanbrengen van de eerste laag van tandheelkundige acryl. </li><li> Zorgen voor weer het oppervlak van de schedel is schoon en droog, vervolgens een klein volume van tandheelkundige acryl en gebruik een tandenstoker om het te glad over de gehele blootgestelde oppervlak van de schedel, met inbegrip van in de braam-gat door de schedel rond the canule. Voordat de acryl verhardt, hoe lager de canule tip de resterende diepte in het doel. </li><li> Maak een klein volume van tandheelkundige acrylaat en laag dit over de eerste als over de witte plastic ondersteuning van de canule, de canule op zijn plaats vast. Herhaal met extra lagen van acryl nodig. </li><li> Nadat de acryl is uitgehard, verwijder voorzichtig de canulehouder en snijd de witte plastic verwijderbare canule tabblad met behulp van een scalpel verwarmd met een butaan vlam. Tenslotte hechten de huid gesloten over de gehele implantaat. </li></ol></li><li> Postoperatieve Behandeling van Dieren <ol><li> Breng antiseptische zalf op de huid marges en beheren een ontstekingsremmend de muis (zoals meloxicam, 3 mg / kg sc). Verwijder de muis uit het frame, plaats het onder een warmtelamp, en observeren tot hij weer bij bewustzijn. Gebruik een muis die een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld niet meer terug. OPMERKING: Experimental manipulaties zoals geslacht koppelen en milieu verrijking kan worden gestart of de dag na de operatie op zijn vroegst hervat. </li><li> Toezicht op hun lichaamsgewicht, algemene gedrag en uiterlijk per dag. Behandel tekenen van infectie (bijvoorbeeld zwelling, roodheid, pus) rond chirurgische incisies met actuele antiseptische zalf. Behandel eventuele tekenen ziekte, pijn, stress of ongemak (bijvoorbeeld verlies van&gt; 10% lichaamsgewicht, sociale terugtrekking, gebrek aan verzorging, &quot;opschudden&quot;, beweging disfunctie, epileptische aanvallen) met systemische analgetica en / of antibiotica als dat nodig is. </li><li> Euthanaseren muizen indien&gt; 15% gewichtsverlies of symptomen van ziekte, pijn, stress of ongemak niet worden verholpen binnen 1 week van corrigerende behandeling. </li></ol></li></ol> 3. Brain Tissue Voorbereiding, Immunohistochemisch Verwerking en Stereology <ol><li> Perfusie <ol><li> Onmiddellijk na het milieu / drugs manipulaties, de voorbereiding van de hersenen voor studie. <br/&gt; Opmerking: In de hier vermelde experimenten het aantal SNc TH + neuronen werden gemeten en vergeleken met elk van de verschillende behandelingsgroepen. </li><li> Toedienen eerst een overdosis van verdoving de muizen te doden (bijvoorbeeld 100 mg / kg ip natriumpentobarbiton). Eenmaal verdoofd maar voordat het hart stopt met kloppen, leg de muis op zijn rug en bind of vastpinnen beide voorpoten. </li><li> Met behulp van een scalpel weggesneden huid die over de thorax dan incisie door de spier net onder de ribbenkast in de buikholte. Plaats een klem op de processus xiphoideus van de ribbenkast en til de ribbenkast omhoog en van de lever blootstellen van het membraan. </li><li> Knip het membraan en door de ribben zijdelings aan beide zijden met grote schaar totdat de ribbenkast terug over de kop naar de longen en het hart bloot te klappen. Met behulp van fijne schaar een kleine incisie in het rechter atrium als een uitgang voor bloed en geperfuseerd oplossingen knip door de bodem van de linker ventricle en plaats een canule omhoog door de linker ventrikel, het linker atrium, en in de aorta. </li><li> Klem de canule op zijn plaats dan pomp warm (37 ° C) heparine en 0,1 M fosfaat gebufferde fysiologische zoutoplossing (PBS) door het vaatstelsel totdat de oplossing het rechter atrium verlaten geheel vrij bloed. Vervolgens pomp koud (4 ° C) fixatief (bijvoorbeeld 4% paraformaldehyde in PBS) door het vaatstelsel, totdat de muis goed vastgesteld. Verwijder de hersenen en plaats in PBS met 30% sucrose voor 2-3 dagen tot de hersenen wastafels. OPMERKING: Andere soorten weefsels preparaat kan worden toegepast, afhankelijk van de deskundigheid in de desbetreffende laboratorium. </li></ol></li><li> Voorbereiding van Vrij zwevende Weefsel secties <ol><li> Snijd seriecoupes door de gebieden van de hersenen van belang en het verzamelen van deze in PBS. LET OP: Wij snijden 40 micrometer dikke secties met behulp van een cryostaat. Andere soorten weefsel snijden kan worden toegepast, afhankelijk van de expertise in de corresponding laboratorium. </li></ol></li><li> Immunohistochemie <ol><li> Voeren standaard immunohistochemie voor eiwitten van belang. Incubeer secties 5% normaal geitenserum en 0,3% Triton X-100 in PBS bij kamertemperatuur gedurende 30 min, vervolgens immuunreactie met polyklonale konijn anti-TH (1: 400) bij 4 ° C gedurende 48 uur, vervolgens gebiotinyleerd polyklonaal geit anti -rabbit (1: 1000) bij kamertemperatuur gedurende 2 uur. </li><li> Vervolgens incuberen in avidine-peroxidase (1: 500) bij kamertemperatuur gedurende 1 uur, daarna op kobalt en nikkel geïntensiveerd diamino-benzidine (0,5 mg / ml) bij kamertemperatuur gedurende 18-20 min; de laatste 3-5 minuten van het diamino-benzidine incubatie toe waterstofperoxide (0,01%) tot chromageen precipitatie katalyseren. Was secties driemaal 10 min elk in PBS voor, na en tussen elk van de bovenstaande stappen. </li><li> Monteer de hoofdstukken over ontsloten microscoop dia&#39;s, de lucht te drogen, dan Nissl vlek (neutraal rood), uitdrogen in alcohol, duidelijke (X-3B), en dekglaasje. </li></ol></li><li&gt; Stereology <ol><li> Schatting van het totale aantal TH + en TH- SNc (en VTA en LC) neuronen met behulp van onpartijdige stereological methoden. Zorg ervoor dat de stereologist blind is voor de ontvangen behandeling. Uitsluiten glia op basis van soma diameter &lt;5 urn en tellen alleen die cellen met een zichtbare kern. </li><li> Identificeer de SNc (en VTA en LC) door de ruimtelijke locaties van TH + cellen en anatomische oriëntatiepunten / grenzen volgens de hersenen atlas van Paxinos en Watson 7. Telling TH + cellen in een counting frame (55 x 55 urn = 3025 um 2) goed vooraf bepaalde intervallen (x = 140 urn, y = 140 urn voor SNc; x = 100 um, y = 100 urn voor VTA en LC) gedurende elke kern in elke vierde sectie. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Aumann, T., Horne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+regulation+of+the+dopamine+phenotype+in+substantia+nigra+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons.</a> Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).</li>
<li>Sauer, H., Oertel, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+degeneration+of+nigrostriatal+dopamine+neurons+following+intrastriatal+terminal+lesions+with+6-hydroxydopamine%3A+a+combined+retrograde+tracing+and+immunocytochemical+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Progressive degeneration of nigrostriatal dopamine neurons following intrastriatal terminal lesions with 6-hydroxydopamine: a combined retrograde tracing and immunocytochemical study in the rat.</a> Neuroscience. 59, 401-415 (1994).</li>
<li>Stanic, D., Finkelstein, D. I., Bourke, D. W., Drago, J., Horne, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timecourse+of+striatal+re-innervation+following+lesions+of+dopaminergic+SNpc+neurons+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Timecourse of striatal re-innervation following lesions of dopaminergic SNpc neurons of the rat.</a> The European journal of neuroscience. 18, 1175-1188 (2003).</li>
<li>Aumann, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+regulates+expression+of+tyrosine+hydroxylase+in+adult+mouse+substantia+nigra+pars+compacta+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity regulates expression of tyrosine hydroxylase in adult mouse substantia nigra pars compacta neurons.</a> Journal of neurochemistry. 116, 646-658 (2011).</li>
<li>Aumann, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SK+channel+function+regulates+the+dopamine+phenotype+of+neurons+in+the+substantia+nigra+pars+compacta%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">SK channel function regulates the dopamine phenotype of neurons in the substantia nigra pars compacta.</a> Experimental neurology. 213, 419-430 (2008).</li>
<li>Aumann, T. D., Tomas, D., Horne, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+behavioral+modulation+of+the+number+of+substantia+nigra+dopamine+neurons+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Environmental and behavioral modulation of the number of substantia nigra dopamine neurons in adult mice.</a> Brain and behavior. 3, 617-625 (2013).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , 2nd, Academic Press. (2001).</li>
<li>Schultz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+dopamine+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Behavioral dopamine signals.</a> Trends in neurosciences. 30, 203-210 (2007).</li>
<li>Sun, P., Smith, A. S., Lei, K., Liu, Y., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+bonds+in+male+prairie+vole%3A+long-term+effects+on+emotional+and+social+behavior%2C+physiology%2C+and+neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry.</a> Behavioural brain research. 265, 22-31 (2014).</li>
<li>Aponso, P. M., Faull, R. L., Connor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+progenitor+cell+proliferation+and+astrogenesis+in+the+partial+progressive+6-hydroxydopamine+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Increased progenitor cell proliferation and astrogenesis in the partial progressive 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease.</a> Neuroscience. 151, 1142-1153 (2008).</li>
<li>Frielingsdorf, H., Schwarz, K., Brundin, P., Mohapel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+evidence+for+new+dopaminergic+neurons+in+the+adult+mammalian+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">No evidence for new dopaminergic neurons in the adult mammalian substantia nigra.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10177-10182 (2004).</li>
<li>Lie, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+substantia+nigra+contains+progenitor+cells+with+neurogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The adult substantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 6639-6649 (2002).</li>
<li>Chen, Y., Ai, Y., Slevin, J. R., Maley, B. E., Gash, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+proliferation+in+the+adult+hippocampus+and+substantia+nigra+induced+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Progenitor proliferation in the adult hippocampus and substantia nigra induced by glial cell line-derived neurotrophic factor.</a> Experimental neurology. 196, 87-95 (2005).</li>
<li>Yoshimi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possibility+for+neurogenesis+in+substantia+nigra+of+parkinsonian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Possibility for neurogenesis in substantia nigra of parkinsonian brain.</a> Ann Neurol. 58, 31-40 (2005).</li>
<li>Shan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+de+novo+neurogenesis+and+dopaminergic+neurogenesis+in+the+substantia+nigra+of+1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-induced+Parkinson%27s+disease-like+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced de novo neurogenesis and dopaminergic neurogenesis in the substantia nigra of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced Parkinson's disease-like mice.</a> Stem Cells. 24, 1280-1287 (2006).</li>
<li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+neurogenesis+in+the+adult+mammalian+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Evidence for neurogenesis in the adult mammalian substantia nigra.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7925-7930 (2003).</li>
<li>Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L., Joh, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transneuronal+regulation+of+tyrosine+hydroxylase+expression+in+olfactory+bulb+of+mouse+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Transneuronal regulation of tyrosine hydroxylase expression in olfactory bulb of mouse and rat.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 3, 69-78 (1983).</li>
<li>Black, I. B., Chikaraishi, D. M., Lewis, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-synaptic+increase+in+RNA+coding+for+tyrosine+hydroxylase+in+a+rat+sympathetic+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Trans-synaptic increase in RNA coding for tyrosine hydroxylase in a rat sympathetic ganglion.</a> Brain research. 339, 151-153 (1985).</li>
<li>Zigmond, R. E., Chalazonitis, A., Joh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preganglionic+nerve+stimulation+increases+the+amount+of+tyrosine+hydroxylase+in+the+rat+superior+cervical+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Preganglionic nerve stimulation increases the amount of tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion.</a> Neuroscience letters. 20, 61-65 (1980).</li>
<li>Biguet, N. F., Rittenhouse, A. R., Mallet, J., Zigmond, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preganglionic+nerve+stimulation+increases+mRNA+levels+for+tyrosine+hydroxylase+in+the+rat+superior+cervical+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Preganglionic nerve stimulation increases mRNA levels for tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion.</a> Neuroscience letters. 104, 189-194 (1989).</li>
<li>Richard, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+tyrosine+hydroxylase+gene+expression+in+rat+brain+and+adrenals+by+exposure+to+cold%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+research%22%5BJournal%5D)">Modulation of tyrosine hydroxylase gene expression in rat brain and adrenals by exposure to cold.</a> Journal of neuroscience research. 20, 32-37 (1988).</li>
<li>Schalling, M., Stieg, P. E., Lindquist, C., Goldstein, M., Hokfelt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+increase+in+enzyme+and+peptide+mRNA+in+sympathetic+ganglia+after+electrical+stimulation+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Rapid increase in enzyme and peptide mRNA in sympathetic ganglia after electrical stimulation in humans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4302-4305 (1989).</li>
<li>Liaw, J. J., He, J. R., Barraclough, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+tyrosine+hydroxylase+mRNA+levels+in+A1%2C+A2+and+locus+ceruleus+neurons+following+electrical+stimulation+of+A1+noradrenergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research.+Molecular+brain+research%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in tyrosine hydroxylase mRNA levels in A1, A2 and locus ceruleus neurons following electrical stimulation of A1 noradrenergic neurons.</a> Brain research. Molecular brain research. 13, 171-174 (1992).</li>
<li>Watabe-Uchida, M., Zhu, L., Ogawa, S. K., Vamanrao, A., Uchida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+mapping+of+direct+inputs+to+midbrain+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Whole-brain mapping of direct inputs to midbrain dopamine neurons.</a> Neuron. 74, 858-873 (2012).</li>
<li>Tepper, J. M., Lee, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+control+of+substantia+nigra+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">GABAergic control of substantia nigra dopaminergic neurons.</a> Progress in brain research. 160, 189-208 (2007).</li>
<li>Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+and+brain+repair%3A+harnessing+the+therapeutic+effects+of+cognitive+stimulation+and+physical+activity+to+enhance+experience-dependent+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathology+and+applied+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity.</a> Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).</li>
<li>Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environments%2C+experience-dependent+plasticity+and+disorders+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system.</a> Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).</li>
<li>Chmiel, D. J., Noonan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preference+of+laboratory+rats+for+potentially+enriching+stimulus+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects.</a> Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).</li>
<li>Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+runway+paradigm+to+assess+the+relative+strength+of+rats%27+motivations+for+enrichment+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+research+methods%22%5BJournal%5D)">Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects.</a> Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).</li>
<li>Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-environment+interactions+and+construct+validity+in+preclinical+models+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neuro-psychopharmacology+%26+biological+psychiatry%22%5BJournal%5D)">Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders.</a> Progress in neuro-psychopharmacology & biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).</li>
<li>Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strength+of+preference+for+nesting+material+as+environmental+enrichment+for+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice.</a> Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).</li>
<li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+enrichment+on+gene+expression+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).</li>
<li>Eckert, M. J., Abraham, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+enrichment+exposure+on+synaptic+transmission+and+plasticity+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Current+topics+in+behavioral+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).</li>
<li>Sztainberg, Y., Chen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+environmental+enrichment+model+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">An environmental enrichment model for mice.</a> Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).</li>
<li>Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+and+brain+plasticity%3A+towards+an+endogenous+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy.</a> Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Milieu-manipulaties De motivatie achter het ontwerp van deze milieu-manipulaties (geslacht koppelen en milieu verrijking) was om te bepalen of het milieu, en / of het gedrag ingegeven door het milieu, wordt geassocieerd met veranderingen in het aantal middenhersenen DA neuronen. De focus lag daarom op het leveren van omgevingen en het stimuleren van gedrag dat waarschijnlijk middenhersenen DA signalering betrekken. Deze omvatten het koppelen met het andere geslacht, en het milieu ve...

DArgic signalering door neuronen in het ventrale tegmentale gebied (VTA) en substantia nigra pars compacta (SNC) van de middenhersenen wordt gedacht belangrijk voor een beloning gemotiveerd cognitieve, emotionele en motorische gedrag te zijn. Echter, te veel of te weinig middenhersenen DA signalering veroorzaakt veel invaliderende symptomen in een verscheidenheid van neurologische aandoeningen (zoals de ziekte van Parkinson, Attention Deficit Hyperactivity Disorder, schizofrenie, en drugsverslaving). Geneesmiddelen die verhogen of verlagen DA signalering verlichten deze symptomen, maar ze produceren ook bijwerkingen toe te schrijven aan ontregelde signalering en off-target effecten. Drug werkzaamheid neemt af in de tijd door de compenserende responsen van de hersenen. De uitdaging is dan ook om de normale middenhersenen DA signalering te herstellen in een meer gerichte en fysiologische manier, en een favoriete aanpak is door het verhogen of verlagen van het aantal middenhersenen DA neuronen. Bewijs is accumuleren voor sevrale decennia dat de expressie van genen en eiwitten die betrokken zijn bij het ​​metaboliseren van en handel DA en andere catecholaminen in de volwassen volwassen cellen is aanpasbaar (beoordeeld in 1). In de middenhersenen, vermindert het aantal tyrosine hydroxylase immunopositieve (TH +, de snelheidsbeperkende enzym in DA synthese) neuronen dan verhoogt volgende neurotoxine administratie 2,3, terwijl het aantal TH immunonegative (TH-) neuronen toont het tegenovergestelde patroon (dwz toeneemt Vervolgens daalt 3). Dit is consistent met het verlies dan winnen van de &quot;DA fenotype &#39;van sommige cellen. Het aantal TH + en TH- SNc neuronen is ook aangetoond veranderen in gelijke maar tegengestelde richtingen na verschillende behandelingen die de elektrische activiteit van deze cellen 4,5 veranderen. Bijvoorbeeld, infusie van de kleine geleiding, door calcium geactiveerde kalium (SK) kanaal antagonist apamin in middenhersenen gedurende 2 weken vermindert het aantal TH + en verhogingen (met hetzelfde bedrag) number van TH- SNc neuronen 4,5. Daarentegen infusie van de SK kanaal agonist 1-Ebio verhoogt het aantal TH + en vermindert (met dezelfde hoeveelheid) het aantal TH- SNc neuronen 4,5. Vergelijkbare veranderingen werden waargenomen na verschillende behandelingen voor SNc neuronale activiteit, waarvan sommige afferente input 4 gericht. Deze schijnbare regeling van het aantal SNc DArgic neuronen van neuronale activiteit en afferente invoer oppert de mogelijkheid dat het milieu of het gedrag aantal SNc neuronen beïnvloeden. Indeed volwassen muizen blootgesteld aan verschillende omgevingen of meer middenhersenen (SNc en VTA) TH + neuronen, en ten minste enkele van deze milieu-geïnduceerde veranderingen opgeheven door gelijktijdige blokkade van synaptische input middenhersenen 6. De doelstellingen van deze mededeling zijn: (1) geven meer details over hoe we onze milieu-manipulaties en infusies met geneesmiddelen uit te voeren; en (2) nadere gegevens ter ondersteuning van onze stelling dat de environment regelt het aantal middenhersenen DA neuronen, via afferente ingang.

<table><tbody><tr><td>Isofluorane</td><td>Baxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, Australia</td><td>AHN3640</td><td></td></tr><tr><td>ALZET Osmotic pump 1002</td><td>DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530</td><td>0004317</td><td></td></tr><tr><td>ALZET Brain infusion kit 1</td><td>DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530</td><td>0004760</td><td></td></tr><tr><td>ALZET cannula holder 1</td><td>DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530</td><td>0008860</td><td></td></tr><tr><td>Vertex Monomer Self-curing (dental acrylic solvent)</td><td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Vertex Self Curing (dental acrylic powder)</td><td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>METACAM (Meloxicam)</td><td>Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 Australia</td><td>L10100</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pentobarbitone</td><td>Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Australia</td><td>571177</td><td></td></tr><tr><td>Normal goat serum</td><td>chemicon-temecula, CA</td><td>S26-Litre</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck Millipore Headquarters&nbsp;, 290 Concord road, Billerica, MA 01821</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>Polyclonal rabbit anti-tyrosine hydroxylase</td><td>Merck Millipore Headquarters&nbsp;, 290 Concord road, Billerica, MA 01821</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Polyclonal biotinylated goat anti-rabbit</td><td>Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Australia 2060</td><td>EO432</td><td></td></tr><tr><td>Avidin peroxidase</td><td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td><td>A3151-1mg</td><td></td></tr><tr><td>Diamino-benzidine</td><td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td><td>D-5637</td><td></td></tr><tr><td>Stereo Investigator</td><td>MicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

milieu modulaties van het aantal dopaminesysteem neuronen in volwassen muizen

Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

Langdurige veranderingen in de hersenen of &#39;plasticiteit van het brein&#39; ten grondslag liggen aan adaptief gedrag en de hersenen herstel na ziekte of letsel. Bovendien kan de interactie met onze omgeving plasticiteit van het brein te induceren. In toenemende mate wordt het onderzoek probeert te identificeren welke omgevingen plasticiteit van het brein gunstig voor de behandeling van de hersenen en gedragsstoornissen te stimuleren. Twee milieu manipulaties beschreven die verhogen of tyrosine hydroxylase immunopositive (TH +, de snelheidsbeperkende enzym in dopamine (DA) synthese) in de volwassen muis middenhersenen verlagen neuronen. De eerste bestaat koppeling mannelijke en vrouwelijke muizen continu samen gedurende 1 week, waarbij middenhersenen TH + neuronen in mannetjes verhoogt met ongeveer 12%, maar vermindert middenhersenen TH + neuronen met ongeveer 12% bij vrouwen. De tweede groep omvat een behuizing muizen continu voor 2 weken in &#39;verrijkte omgeving&#39; (EE) met loopwielen, speelgoed, touwen, nestmateriaal, enz., Die ikncreases middenhersenen TH + neuronen met ongeveer 14% bij mannen. Daarnaast wordt een protocol beschreven voor gelijktijdige infusie van medicijnen direct in de middenhersenen tijdens deze milieu manipulaties om onderliggende mechanismen milieuredenen hersenplasticiteit identificeren. Bijvoorbeeld wordt EE-inductie van meer middenhersenen TH + neuronen afgeschaft gelijktijdige blokkade van synaptische ingang op neuronen van de middenhersenen. Samen vormen deze gegevens blijkt dat informatie over het milieu wordt doorgegeven via synaptische input voor middenhersenen neuronen om in of uit uitdrukking van &#39;DA&#39; genen schakelen. Zo passende milieueisen stimulatie, of drug targeting van de onderliggende mechanismen, nuttig voor de behandeling van de hersenen en gedragsstoornissen in verband met onevenwichtigheden in de middenhersenen DA zou kunnen zijn (bijvoorbeeld de ziekte van Parkinson, Attention Deficit Hyperactivity Disorder, schizofrenie, en drugsverslaving).

Volwassen muizen blootgesteld aan deze milieu manipulaties aantallen middenhersenen (SNc en VTA), maar niet LC veranderd, TH + neuronen en EE plus gelijktijdige middenhersenen infusie van hetzij picrotoxine of bicuculline (GABAA-receptorantagonisten) afschaft EE-inductie van meer SNc TH + neuronen. Deze gegevens werden eerder gepubliceerd 6. De huidige gegevens zijn verzameld in repliceren experimenten uitgevoerd als onderdeel van die vorige studie, maar zijn niet elders gepubliceerd. <p class=...

Dit protocol beschrijft twee verschillende omgevingsmanipulaties en een gelijktijdig protocol voor herseninfusie om omgevingsgeïnduceerde hersenveranderingen te bestuderen die ten grondslag liggen aan adaptief gedrag en hersenherstel bij volwassen muizen.

Milieu Modulaties van het aantal dopaminesysteem Neuronen in volwassen muizen

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om gecontroleerde omgevingssituaties te creëren die hersenplasticiteit en gedragsveranderingen bij muizen stimuleren. Dit wordt bereikt door muizen in man-vrouwparen te huisvesten tegenover man-mannen- en vrouw-vrouwencontroleparen om de effecten van langdurige genderkoppeling op de hersenen te bestuderen; als alternatief kunnen muizen samen worden gehuisvest in kooien gevuld met verschillende objecten om te verkennen en mee te spelen, tegenover standaard kooien, om de effecten van omgevingsverrijking op de hersenen te bestuderen. Andere behandelingen, zoals het toedienen van geneesmiddelen, kunnen aan deze omgevingsstimulaties worden toegevoegd om te helpen de mechanismen achter de geobserveerde hersen- en gedragsveranderingen te identificeren.De resultaten tonen aan dat deze omgevingsverrijkingen en behandelingen veranderingen teweegbrengen in het aantal dopaminerge neuronen in de middenhersenen die afhankelijk zijn van GABAerge synaptische transmissie in de middenhersenen. Omgevingsverrijking is een paradigma dat de somatosensorische motorische en cognitieve stimulatie voor muizen verhoogt. Met deze aanpak hebben studies een toegenomen neuroplasticiteit en ook verbeteringen in het leren en het geheugen aangetoond in vele ziekte-modellen.De implicaties van deze techniek reiken tot het begrijpen van mechanismen van plasticiteit in de volwassen hersenen die worden veroorzaakt door omgevingsinvloeden. Dit is relevant voor de behandeling van vele van deze ziekten van de hersenen en de geest. We kregen voor het eerst een idee voor deze methode toen we opmerkten dat het aantal dopaminerge neuronen in de middenhersenen verandert als reactie op het verstoren van de neuronale activiteit in de middenhersenen die wordt aangestuurd door synaptische input.Een visuele demonstratie van de osmotische pomp en de herseninfusiecanule kan cruciaal zijn, aangezien de procedures vrij moeilijk aan te leren kunnen zijn. Schriftelijke beschrijvingen voor de genderkoppeling. Huisvest seksueel volwassen, leeftijd-gematchte mannelijke en vrouwelijke muizen per gender, waarbij koppeling binnen hetzelfde nest wordt vermeden; plaats elke muis willekeurig in een mannelijk-mannelijk paar, een vrouwelijk-vrouwelijk paar of een mannelijk-vrouwelijk paar in een schone kooi in isolatie met ad libitum toegang tot voedsel en water, zowel nu als gedurende de gehele genderkoppeling.Houd alle overbodige omgevingsstimuli constant of gelijkmatig verdeeld over alle muizen en huisvest de dieren gedurende zeven dagen continu. Wijs voor omgevingsverrijking seksueel volwassen, qua leeftijd overeenkomende mannelijke of vrouwelijke muizen willekeurig toe aan een van drie groepen: standaard huisvesting, met looprad of omgevingsverrijkt gedurende ten minste drie dagen. Houd ze in deze condities.Met ad libitum toegang tot voedsel en water gedurende 14 dagen. Tijdens de omgevingsverrijking moet de standaard kooi enkel strooisel bevatten. De groep met loopwiel moet strooisel bevatten plus twee loopwielen, en de groep met omgevingsverrijking moet strooisel, twee loopwielen en speelgoed bevatten.Onderwerp de omgevingsverrijkte muizen aan aanvullende superverrijking door hen gedurende één uur per dag samen in een grotere kooi te plaatsen waarin nieuwe speeltjes aanwezig zijn. Breng de muizen vijf dagen per week op hetzelfde tijdstip elke dag terug naar hun omgevingsverrijkte kooi. Behoud na elke sessie het nieuwe karakter door bij elke sessie een andere set speeltjes aan te bieden.Reinig alle speeltjes die aan de muizen worden aangeboden met zeepsop en 80% ethanol. Om eventuele geuren te verwijderen, moeten de standaard gehuisveste groepen en de groepen met looprad op dezelfde manier en gedurende een vergelijkbare periode per dag worden verplaatst, maar zonder toevoeging van de super-verrijkingsmaterialen op de dag vóór de implantatie. Vul met aseptische techniek elke steriele osmotische pomp, verbindingsbuis en canule met de steriele drug- of vehicle-oplossing volgens de instructies van de fabrikant.Verbind vervolgens de onderdelen met elkaar en incubeer deze op de dag van de operatie gedurende de nacht in steriele zoutoplossing bij 37 °C. Nadat de sedatie via een knijptest is bevestigd, brengt u oogzalf aan bij het dier en plaatst u het in rugligging op een warmtemat. Maak vervolgens, met gebruik van aseptische techniek, een midline incisie door de huid, beginnend twee centimeter posterior van de achterrand van de schedel en eindigend tussen de ogen. Disseceer de huid stomp weg van de onderliggende fascia over de rug van de muis, zodat er een subcutane pocket ontstaat die groot genoeg is om de pomp en de verbindingsslang er gemakkelijk in te plaatsen.Schraap vervolgens de fascia schoon van het dorsale aspect van de schedel en gebruik een tandartsboor met een diameter van ongeveer 1,5 millimeter om in de schedel te boren op de juiste stereotaxische coördinaten totdat er een dunne, flexibele botlaag overblijft; verwijder deze laag met een fijne pincet. Zodra de schedel vrij is van bloed en botfragmenten en er geen verdere bloedingen zijn, gebruikt u een canulehouder om de pomp en de verbindingsslang in de zojuist gecreëerde pocket te plaatsen. Positioneer nu de tip van de canule op de juiste stereotaxische coördinaten op het oppervlak van de hersenen en laat de slang vervolgens voorzichtig in de hersenen zakken tot één millimeter boven de vereiste diepte.Zorg ervoor dat het oppervlak van de schedel opnieuw schoon en droog is, en gebruik vervolgens een tandenstoker om vers bereide tandheelkundige acryl over het gehele blootgestelde gebied van de schedel glad te strijken, inclusief in het boorgat rond de canule, voordat de acryl uithardt. Breng de tip van de canule verder naar beneden tot de resterende diepte in het doelgebied. Wanneer de canule op zijn plaats zit, brengt u voorzichtig een tweede laag vers bereide tandheelkundige acryl aan op de schedel, alsofook over de witte plastic houder voor de canule, om de canule op zijn plaats te fixeren.Zodra het acrylaat is uitgehard, verwijdert u voorzichtig de canulehouder en gebruikt u een verhit scalpelblad om door het plastic canuletabblad te smelten. Hecht vervolgens de huid over het gehele implantaat dicht. Breng antisepticumzalf aan op de huidranden en dien een ontstekingsremmer toe aan het dier.Verwijder tot slot de muis uit het frame. Plaats het dier onder een warmtelamp en houd het in de gaten totdat het volledig is hersteld. Volwassen mannelijke muizen die zeven dagen lang met volwassen vrouwelijke muizen zijn gekoppeld, hebben ongeveer 12% meer neuronen in het positieve SNC-gebied van het middenbrein dan mannetjes die met mannetjes zijn gekoppeld.Daarentegen hebben vrouwtjes die met mannetjes zijn gekoppeld ongeveer 12% minder TH-positieve SNC-neuronen dan vrouwtjes die met vrouwtjes zijn gekoppeld. Het aantal TH-positieve SNC- neuronen en neuronen in het ventrale tegmentale gebied is ook verhoogd bij volwassen mannelijke muizen die gedurende 14 dagen zijn blootgesteld aan een verrijkte koppeling in een stimulerende omgeving plus superverrijking. Bij dieren die een verrijkte omgeving plus superverrijking kregen met infusie van een vehikel, vertoonden zij ongeveer 14% meer TH-positieve SNC-neuronen.Standaard gehuisveste dieren die een infusie van het vehikel kregen en dieren die werden onderworpen aan een verrijkte omgeving plus superverrijking in combinatie met infusie van een gabaa-receptorantagonist vertonen deze toename echter niet. Bij het uitvoeren van omgevingsmanipulaties is het belangrijk om eventuele verstoringen voor de dieren tot een minimum te beperken, zoals het minimaliseren van geluid en het vermijden van kooiwisselingen. Bij het inrichten van een verrijkte omgeving is het essentieel om gevarieerd nestmateriaal toe te voegen en de nestlocatie constant te houden om stress bij de dieren te minimaliseren.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe de omgeving van volwassen muizen kan worden gemanipuleerd om veranderingen in de hersenen en het gedrag teweeg te brengen. Vergeet niet dat de gebruikte geneesmiddelen extreem gevaarlijk kunnen zijn; draag daarom altijd beschermende kleding bij het voorbereiden van de osmotische pompen.

environmental-modulations-number-midbrain-dopamine-neurons-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Primaire los middenhersenen dopamine celculturen zorgen voor de studie van de presynaptische kenmerken van dopamine neuronen. Ze kunnen worden gebruikt om real-time dopamine-afgifte kinetiek en een eiwitfractie / mRNA niveaus van de regulatoren van dopamine exocytose monitor. Hier tonen we u hoe u deze culturen genereren uit knaagdier pasgeborenen.

Primaire los middenhersenen Dopamine celculturen van knaagdieren pasgeborenen

Een protocol voor het uitvoeren van unilaterale 6-OHDA letsels van de mediale voorhersenen bundel bij muizen wordt beschreven. Deze methode heeft een laag sterftecijfer (13,3%) met 89% van de overlevende dieren die&gt; 95% verlies van striatale dopamine en 90,63 ± -4,02% ipsiversive rotatie voorkeur voor de kant van de laesie.

Ontwikkeling van een eenzijdig-gelaedeerde 6-OHDA muismodel van de ziekte van Parkinson

Dopamine is duidelijk geregeld in de middenhersenen kernen, die de cellichamen en dendrieten van de dopamine neuronen bevatten. Hier beschrijven we een dissectie en sample-handling aanpak om de resultaten te maximaliseren, en dus conclusies en inzichten, op dopamine regelgeving in de middenhersenen kernen van de substantia nigra (SN) en ventrale tegmentale gebied (VTA) bij knaagdieren.

Uitgebreide Profilering van Dopamine verordening in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied

De ziekte van Parkinson en bewegingsstoornissen in het algemeen, gevoelig en betrouwbaar gedrag assays zijn essentieel voor het testen van nieuwe potentiële geneesmiddelen. We beschrijven hier een beheersbare batterij sensorimotorische tests voor muizen die gevoelig zijn voor verschillende mate van schade aan het nigrostriatale systeem en nuttig voor preklinische studies.

Beoordeling van Sensorimotor Functie in muismodellen van de ziekte van Parkinson

Werkwijzen voor de manipulatie en analyse van NF-kB-afhankelijke volwassen hippocampus neurogenese beschreven. Een gedetailleerd protocol wordt gepresenteerd voor een dentate gyrus-afhankelijke gedragstest (genoemd het ruimtelijk patroon scheiding-Barnes doolhof) voor het onderzoek naar cognitieve uitkomst bij muizen. Deze techniek moet ook helpen onderzoek mogelijk te maken in andere experimentele instellingen.

Methoden voor de modulatie en analyse van NF-kB-afhankelijke Adult Neurogenese

Lipoxygenase (LOX) isozymen kunnen producten genereren die neuro-inflammatie en neurodegeneratie kunnen verhogen of verminderen. Een gen-omgeving interactiestudie kan LOX isozym-specifieke effecten identificeren. Met behulp van het 1-methyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model van nigrostriatale schade in twee LOX isozym-deficiënte transgene lijnen maakt het mogelijk om de bijdrage van LOX-isozymen aan dopaminerge integriteit en ontsteking te vergelijken.

Gen-omgeving Interactiemodellen om gevoeligheidsmechanismen bij de ziekte van Parkinson te ontmaskeren

Dopaminerge neuronen spelen een essentiële regulerende rol in de hersenen. Hun verlies wordt geassocieerd met de ziekte van Parkinson. In deze video laten we zien hoe je primaire culturen van centrale dopaminerge neuronen kunt genereren vanuit embryonaal muizen mesencephalon. Dergelijke culturen zijn nuttig om de extreme kwetsbaarheid van deze neuronen voor verschillende stressfactoren te bestuderen.

Primaire Cultuur van de Muis dopaminerge neuronen

De oorzaken van degeneratie van dopaminerge neuronen in de middenhersenen tijdens de ziekte van Parkinson zijn niet volledig begrepen. Cellulaire kweeksystemen bieden een essentieel hulpmiddel voor de studie van de neurofysiologische eigenschappen van deze neuronen. Hier presenteren we een geoptimaliseerd protocol dat kan worden gebruikt voor in vitromodellering van neurodegeneratie.

Isolatie, Cultuur en onderhoud op lange termijn van de Primary mesencefale dopaminerge neuronen uit embryonale knaagdieren Brains

Synaptosomal dopamine opname en krachtige vloeibare chromatografie vertegenwoordigen experimentele analysetools te onderzoeken van dopamine homeostase in muizen door beoordeling van de functie van de dopamine transporter en niveaus van dopamine in striatale weefsel, respectievelijk. Hier presenteren we protocollen voor dopamine weefsel inhoud meten en beoordelen van de functionaliteit van de dopamine transporter.

Beoordeling van Dopaminerge homeostase in muizen door gebruik van High-performance Liquid Chromatography analyse en Synaptosomal Dopamine opname

Dit werk presenteert een stapsgewijze protocol voor de onbevooroordeelde stereological schatting van Dopaminerge neuronale cel nummers in de muis substantia nigra met behulp van standaard microscopie apparatuur (dat wil zeggen, een lichte Microscoop, een tabel van de gemotoriseerde object (x, y, z vliegtuig), en publiek domein-software voor digitale beeldanalyse.

Stereological raming van de Dopaminerge Neuron nummer in de muis Substantia Nigra met behulp van de optische Fractionator en standaard microscopie apparatuur

We ontwikkelden een versneld social defeat stress-model voor adolescente C57BL/6-muizen, dat werkt bij zowel mannetjes als vrouwtjes en blootstelling mogelijk maakt tijdens discrete adolescente periodes. Blootstelling aan dit model leidt tot sociale vermijding, maar alleen bij een subset van verslagen mannelijke en vrouwelijke muizen.

Social Defeat Stress-model voor adolescente C57BL/6 mannelijke en vrouwelijke muizen

Ontdek hoe milieumanipulaties de hersenplasticiteit en het gedrag van volwassen muizen beïnvloeden door middel van gepaarde huisvesting en verrijkte omgevingen. Deze methode helpt onderzoekers neuronale veranderingen in het dopaminesysteem te bestuderen.

Milieu Modulaties van het aantal dopaminesysteem Neuronen in volwassen muizen

Meer video's verkennen