Name: Orgaan Ischemia-Reperfusie Letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat levertransplantatie model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Leer een rattenmodel bouwen voor ischemie-reperfusieletsel na levertransplantatie door hemodynamische veranderingen te simuleren. Deze methode biedt inzicht in orgaanschade en overlevingskansen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen graag de nuttige suggesties van Dr. Wen-tao Li en Dr. Ji-hua Wu van het Tweede Aangesloten Ziekenhuis van Guangxi Medical University erkennen. De auteurs willen onze teamgenoten bedanken voor nuttige opmerkingen en discussies. De auteurs willen ook de anonieme recensenten en redacteuren van JoVE bedanken voor hun opmerkingen. Speciale dank gaat uit naar dr. Yuan's ouders voor hun voortdurende steun en aanmoediging. Het werk werd ondersteund door Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).

De Animal Ethics Committee keurde het experiment van Guangxi Medical University (No20190920) goed. Alle dieren werden geleverd door het Animal Experiment Center van guangxi Medical University. We gebruikten SPF mannelijke Sprague Dawley ratten (200-250 g, 10-12 weken), gehouden onder de kamertemperatuur van 25 ± 2°C en vochtigheid van 50 ± 10%. De voeding werd 24 uur voor de operatie gestopt; er werd echter water verstrekt.
OPMERKING: Eén operator kan alle operaties uitvoeren zonder microchirurgiebasis of chirurgische microscoop.
1. Werking
<ol><li>Verdoof de ratten na het wegen met isofluraan (5%) met behulp van een dierenanesthesiemachine.</li>
	<li>Na 1-2 minuten klemt u de tenen van de rat voorzichtig vast met een pincet. Als de rat niet reageert na het knijpen, is hij in een staat van anesthesie terechtgekomen. Gebruik dierenartszalf op de ogen om droogheid te voorkomen. Gebruik dierenverwarmingslampen om de lichaamstemperatuur van de ratten op 37-38 °C te houden.</li>
	<li>Na abdominale desinfectie (povidone jodiumoplossing) bevestigt u de rat op de dissectietafel van het dier. Maak een mediane incisie van 3 cm onder het xiphoid-proces met behulp van een tang en een schaar.</li>
	<li>Open de buikholte, stel de lever bloot met behulp van een oprolmechanisme en mobiliseer het hepatogastric ligament. Gebruik wattenstaafjes om de middelste kwab van de lever voorzichtig om te draaien en draai deze naar boven om de porta hepatis bloot te leggen. Identificeer de CBD, PV en HA.</li>
	<li>Duw de dunne darm naar de linker onderbuikholte met wattenstaafjes, bedek deze met nat gaas en verplaats de intrahepatische vena cava naar de rechter nierader.</li>
	<li>Isoleer de poortader, de leverslagader en de inferieure vena cava boven de rechter nierader met een intraoculaire lens en tang gemarkeerd met 3-0 zijden draad, elk met een slipknoop.</li>
	<li>Snijd de linker- en rechter onderste extremiteitshuid open en stel de femurader bloot met behulp van een oogheelkundige tang. Injecteer langzaam heparine met een laag molecuulgewicht 625 IE/kg door de femurader om het hele lichaam te hepariniseren.</li>
	<li>Ligate de poortader, leverslagader en inferieure vena cava boven de rechter nierader met nr. 3-0 hechtingen, die 45 minuten duren (figuur 1). Vervang de dunne darm in de buikholte en bedek deze met gaas. Verminder inhalatie-anesthesie tijdens deze periodes.</li>
	<li>Laat na 45 minuten de poortader, de leverslagader en de inferieure vena cava boven de rechter nierader los.</li>
	<li>Hecht de spier en huid laag voor laag en beëindig de inhalatie-anesthesie. Zorg voor postoperatieve analgesie met subcutane morfine van 5 mg/kg om de 4 uur.</li>
	<li>Observeer de rat tot hij wakker is en voer onder een temperatuur van 25 ± 2 °C en een luchtvochtigheid van 50 ± 10%. Dierlijke verwarmingslampen zijn noodzakelijk.</li>
</ol>

<ol><li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation%3A+Cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li>
<li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li>
<li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury%3A+From+bench-to-bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li>
<li>Motiño, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li>
<li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia%2Freperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li>
<li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center%3B+2002-2019%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Iranian+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li>
<li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagulation+and+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li>
<li>Czigány, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+a+review%2C+recommendation%2C+and+publication+guide%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li>
<li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li>
<li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li>
<li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li>
<li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933(2018).</li>
<li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662(2015).</li>
<li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li>
<li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li>
<li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li>
<li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung%3Aan+experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li>
<li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heavy+water+%28D2O%29+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+%28IPRL%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818(2019).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia%2Freperfusion%3A+from+mouse+to+human%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li>
<li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Oncology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li>
</ol>

De auteurs van dit manuscript hebben geen belangenconflicten om openbaar te maken.

OLT bij ratten is een ideaal model voor het bestuderen van orgaanbehoud bij levertransplantatie, IRI, transplantatieafstoting, immuuntolerantie, transplantatiepathologie en farmacologie, homotransplantatie en xenotransplantatie. Op dit moment wordt het veel gebruikt in het experimentele onderzoek naar levertransplantatie.
Tijdens pilotstudies dienden we eerst pentobarbitale natrium intraperitoneale anesthesie toe en ontdekten dat dit leidde tot hoge postoperatieve mortaliteit en korte tolerant...

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is een veel voorkomende complicatie na levertransplantatie. Lever IRI is een pathologisch proces waarbij ischemiegemedieerde celschade en abnormale verslechtering van leverreperfusie. Lever IRI en de lokale aangeboren immuunrespons kunnen worden onderverdeeld in warme en koude IRI, volgens verschillen in de klinische omgeving1. Hete IRI wordt veroorzaakt door stamcelletsel, meestal als gevolg van levertransplantatie, shock en trauma2. Cold IRI is een complicatie van levertransplantatie veroorzaakt door endotheelcellen en periferecirculatie 3. Klinische rapporten hebben aangetoond dat lever-IRI geassocieerd is met 10% van vroege orgaanfalen en de incidentie van acute en chronische afstoting kan verhogen4,5. Bovendien kan lever IRI ook meerdere orgaandisfunctiesyndromen of systemisch ontstekingsreactiesyndroom induceren, met een hogemortaliteit 6. Patiënten met extrahepatische orgaanbetrokkenheid blijven meestal langer in het ziekenhuis, geven meer geld uit en hebben een slechtereprognose 7. De ontwikkeling van complicaties hangt nauw samen met de lengte van de anhepatische fase van levertransplantatie8.
Orthotopische levertransplantatie (OLT) bij ratten werd voor het eerst gemeld door de Amerikaanse professor Lee in 1973. De experimentele operatie simuleerde de stappen van klinische levertransplantatie en de anastomose van bloedvaten en het gemeenschappelijke galkanaal (CBD) met behulp van de hechtmethode. De procedure is moeilijk en tijdrovend met een laag slagingspercentage9. In 1979 hebben Kamada et al. een aanzienlijke verbetering aangebracht ten opzichte van OLT bij ratten door creatief gebruik te maken van de 'two-cuff methode' voor anastomose van de poortader om de anhepatische fase binnen 26 minuten te beheersen10. In hetzelfde jaar stelde Zimmermann de 'single biliary stent method' voor. Op basis van Lee's werk gebruikte Zimmermann polyethyleen buizen om de CBD van de donor en ontvanger direct te anastomoseren, de reconstructie van CBD te vereenvoudigen en de functie van de sluitspier te behouden, en deze methode werd de standaard voor galreconstructie van OLT-modellen11. In 1980 stelden Miyata et al. de 'driemanchetmethode' voor waarbij de portaalader (PV), suprahepatische vena cava (SVC) en intrahepatische vena cava (IVC) werden anastomosed door de manchetmethode. Er is echter een risico op vervorming van de canule met deze methode, wat kan leiden tot de obstructie van inferieure vena cava reflux12. In 1983 werd de "tweemanchetmethode" voorgesteld met behulp van de manchetmethode voor anastomose van de PV en IVC, maar met de hechtmethode voor de SVC13. Deze methode werd door wetenschappers wereldwijd toegepast om OLT-modellen op te zetten. Sindsdien zijn de cuff anastomosestappen verbeterd om de anhepatische fase te verkorten en de overlevingskans van de ratten te verbeteren14. Op dezelfde manier worden in de klinische praktijk verbeterde methoden gebruikt om de anhepatische fase15te verkorten . Fundamenteel onderzoek naar IRI na levertransplantatie heeft echter aangetoond dat de overlevingskans omgekeerd gerelateerd is aan de mate van letsel aan extrahepatische organen. Daarom is verder onderzoek vereist en is een eenvoudig en reproduceerbaar diermodel nodig om IRI na levertransplantatie te simuleren.
Op basis van de definitie van de anhepatische fase simuleerden we de hemodynamische veranderingen in levertransplantatie resulterend in IRI van extrahepatische organen bij ratten. Hierin geven we een gedetailleerde beschrijving van hoe een diermodel van de anhepatische fase (leverischemie) bij ratten kan worden gebouwd om fundamenteel onderzoek naar IRI na levertransplantatie te vergemakkelijken.

<table><tbody><tr><td>4% paraformaldehyde-oplossing</td><td>Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd</td><td>P804536</td><td></td></tr><tr><td>luchtdroger</td><td>Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.</td><td>BPG</td><td></td></tr><tr><td>Alanine aminotransferase (ALT)Kit</td><td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td><td>E-BC-K235-S</td><td></td></tr><tr><td>ammoniak</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>10002118</td><td></td></tr><tr><td>amylase Kit</td><td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td><td>E-BC-K005-M</td><td></td></tr><tr><td>watervrij ethanol</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>100092183</td><td></td></tr><tr><td>Dierdier anesthesiemachine</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>R640</td><td></td></tr><tr><td>aspartaataminotransferase (AST)kit</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03040</td><td></td></tr><tr><td>automatische biochemische analyzer.</td><td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td><td>2400</td><td></td></tr><tr><td>Biosystemen (wanneer noodzakelijk)</td><td>Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.</td><td>BL-420F</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>BY-600A</td><td></td></tr><tr><td>dekglas</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd</td><td>10212432C</td><td></td></tr><tr><td>creatinine Kit</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03076</td><td></td></tr><tr><td>ontwateringsmachine</td><td>Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd</td><td>Donatello Series 2</td><td></td></tr><tr><td>inbeddingsmachine</td><td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td><td>KH-BL1</td><td></td></tr><tr><td>diepvriesmachine</td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-L5</td><td></td></tr><tr><td>hematoxyline-eosine kleuroplossing</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1005</td><td></td></tr><tr><td>hoogwaardige paraffinewas</td><td>Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd</td><td>Q/YSQN40-91</td><td></td></tr><tr><td>zoutezuur</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>10011018</td><td></td></tr><tr><td>intraoculaire lens (IOL)tang</td><td>Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>JTZRN</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>microschaar (wanneer noodzakelijk)</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>WA1010</td><td></td></tr><tr><td>naaldhouders</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>J32010</td><td></td></tr><tr><td>neutrale gom</td><td>Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd.</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>normaal optisch microscoop</td><td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td><td>Nikon Eclipse CI</td><td></td></tr><tr><td>oftalmische tang</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>J3CO30</td><td>recht</td></tr><tr><td>oftalmische tang</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>JD1060</td><td>buigen</td></tr><tr><td>oftalmische schaar</td><td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td><td>J1E0</td><td></td></tr><tr><td>pathologische snijmachine</td><td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td><td>RM2016</td><td></td></tr><tr><td>pipetten</td><td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td><td>7010101008</td><td></td></tr><tr><td>retractors</td><td>Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd.</td><td>JNT-KXQ</td><td></td></tr><tr><td>scanner</td><td>Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd</td><td>Pannoramic 250</td><td></td></tr><tr><td>diapositiva</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>xyleen</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

orgaan ischemia-reperfusie letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat levertransplantatie model

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopische levertransplantatie (OLT) bij ratten is een beproefd diermodel dat wordt gebruikt voor preoperatieve, intraoperatieve en postoperatieve studies, waaronder ischemie-reperfusieletsel (IRI) van extrahepatische organen. Dit model vereist tal van experimenten en apparaten. De duur van de anhepatische fase hangt nauw samen met de tijd om IRI te ontwikkelen na transplantatie. In dit experiment gebruikten we hemodynamische veranderingen om extrahepatische orgaanschade bij ratten op te wekken en bepaalden we de maximale tolerantietijd. De tijd tot de ernstigste orgaanverwonding varieerde voor verschillende organen. Deze methode kan gemakkelijk worden gerepliceerd en kan ook worden gebruikt om IRI van de extrahepatische organen na levertransplantatie te bestuderen.

Rattentolerantie voor leverischemie In dit diermodel zijn de locaties waar de bloedvaten tijdens het gebruik lagen, weergegeven in figuur 1. De ratten werden willekeurig verdeeld in 5 groepen voor ischemie gedurende 15 minuten (I15-groep), 30 minuten (I30-groep), 45 minuten (I45-groep), 60 minuten (I60) en schijngroep, met 10 ratten in elke groep. De overlevingskans van elke groep werd 14 dagen na de operatie waargenomen. Alle ratten overleefden in de I15-groep, I30-groep...

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van hoe een diermodel van de anhepatische fase (leverischemie) bij ratten kan worden gebouwd om fundamenteel onderzoek naar ischemie-reperfusieletsel na levertransplantatie te vergemakkelijken.

Orgaan Ischemia-Reperfusie Letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat levertransplantatie model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Orgaanischemie-reperfusie letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat lever transplantatie model. Ischemia-reperfusie letsel is een veel voorkomende toepassing na levertransplantatie. Patiënten met extrahepatische orgaanbetrokkenheid blijven meestal langer in het ziekenhuis, geven meer uit en hebben een slechtere prognose.De ontwikkeling van de complicatie hangt nauw samen met de lengte van de anhepatische fase van levertransplantatie. Fundamenteel onderzoek naar de ischemie-reperfusieletsel na levertransplantatie heeft echter aangetoond dat de overlevingskans na levertransplantatie omgekeerd gerelateerd is aan de mate van letsel aan extrahaptische organen. Op basis van de definitie van de anhaptische fase simuleerden we de hemodynamische verandering in levertransplantatie die resulteerde in ischemie-reperfusieletsel van extrahaptische organen.Van dit artikel is om een gedetailleerde beschrijving te geven van hoe een diermodel van de anhaptische fase bij ratten te bouwen, fundamenteel onderzoek naar de ischemie-reperfusieletsel na levertransplantatie. Dr. Yuan Yuan is verantwoordelijk voor alle video dieren operaties. Twee oogheelkundige tangen, recht en buigend, en interoculaire lens, IOL-tang, oftalmische schaar, één tot twee oprolmechanismen, wattenstaafjes, 3-0 chirurgische hechtingen, iodoform gaas, hechtnaalden, Biosystemen indien nodig en interoculaire lens, IOL-tang wordt gebruikt om bloedvaten te scheiden vanwege ronde koppen.Dierlijke anesthesie machine, ontwateringsmachine, inbeddingsmachine, pathologische snijmachine, bevroren machine, weefselsnijmachine, luchtdroogoven, neurale optische microscoop, de scanner, enfluraan voor algemene anesthesie, 4% paraformaldehydeoplossing, anyhydreuze ethanol, xyleen, hoogrenderende paraffinewas, hematoxyline-eosinekleurstofoplossing, zoutzuur, ammoniak, dia, afdekglas, neutrale gom en stervende reagentia en verbruiksmaterialen. Pipetten, centrifuge, automatische biochemische analysator, alanine amino transferase, ALT kit, aspartaat, amino transferase, AST kit, creatinine kit. Na het wegen worden de ratten verdoofd met isofluraan door een dierenanesthesiemachine.Maak na abdominale desinfectie een mediane incisie van drie centimeter onder het xiphoid-proces met behulp van een tang en een schaar. Open de buikholte, stel de lever bloot met behulp van een oprolmechanisme en mobiliseer het hepatogastrische ligament. Gebruik wattenstaafjes om de middelste kwab van de lever voorzichtig om te draaien en draai deze naar boven om de porta habitis bloot te leggen.Identificeer het galkanaal, de poortader en de leverslagader. Duw de dunne darm naar de linker onderbuikholte met behulp van katoenen swaps en verplaats de inferieure vena cava naar de rechter nierader, isoleer de poortader, leverslagader en de inferieure vena cava boven de rechter nierader met een intraoculaire lens, IOL, tang gemarkeerd met 3-0 zijden draad elk met een slipknoop. Snijd de huid van de linker- en rechter onderste extremiteit open en stel de femurader bloot met behulp van oogheelkundige tang.Injecteer langzaam heparine met een laag molecuulgewicht 625 IE/kg door de femurader om het hele lichaam te hepariniseren. Ligate de poortader, leverslagader en inferieure vena cava boven de rechter nierader met nummer 3-0 hechtingen, die 45 minuten duren. Vervang de dunne darm in de buikholte en bedek deze met gaas.Inademingsanesthesie wordt tijdens deze periodes verminderd. Laat na 45 minuten de poortader, de leverslagader en de inferieure vena cava boven de rechter nierader los. Hecht de spier en de huid laag voor laag en beëindig de inhalatie-anesthesie.Zorg voor postoperatieve analgesie met subcutane morfine van 5 mg/kg om de vier uur Observeer de rat tot hij wakker is en blijf gevoed onder een temperatuur van 25 plus of min twee graden Celsius en vochtigheid van 50 plus of min 10%Dierlijke verwarmingslampen zijn noodzakelijk. In dit diermodel werden de ratten willekeurig verdeeld in vijf groepen volgens ischemie gedurende 15 minuten, ik 15 groep, 30 minuten, ik 30 groep, 45 minuten, ik 45 groep, 60 minuten, ik 60, en een schijngroep met 10 ratten in elke groep. Hun overlevingskans van elke groep werd 14 dagen na de operatie waargenomen.Alle ratten overleefden in de I 15, I 30 en schijngroepen. Acht overleefden 14 dagen in de I 45-groep en slechts twee overleefden in de I 60-groep. De resultaten suggereerden dat de ratten de anhepatische fase hooguit 45 minuten konden verdragen.Tijdens het experiment werd Biosystems gebruikt om de veranderingen van hartslag en bloeddruk vast te leggen, rechter interne carotisslagaderintubatie voor en na de anhepatische fase. We ontdekten dat de hartslag en gemiddelde arteriële druk, MAP van ratten, drastisch veranderden na vasculaire ligatie. Na ligatie waren leverischemie, congestie en oedeem in de darmen, maagvariëteiten en splenomegalie duidelijk.80 ratten werden willekeurig verdeeld in acht groepen, waaronder ischemie gedurende 45 minuten, T0, reperfusie gedurende zes uur, T6, 12 uur, T12, 24 uur, T24, 48 uur, T48, 72 uur, T72, zeven dagen, T7, in respectievelijk 14 dagen, T14. De nieren, alvleesklier, dunne darm, hart- en longweefsels werden meegenomen en bevlekt met HE nadat ratten waren geofferd. Behalve het hart werden pathologische scores gegeven op basis van respectievelijk verwijzingen.De resultaten toonden aan dat de tijd van maximale verwonding van de extrahepatische organen varieerde. Het was zes tot 24 uur na de operatie voor de alvleesklier en 24 tot 48 uur voor de longen. Het darmkanaal en de nieren raakten het zwaarst gewond na 45 minuten ischemie.Er was 24 uur na de operatie geen duidelijke afwijking van het darmslijmvlies en de nieren herstelden zich na 48 uur. Wat het hart betreft, met het verstrijken van de tijd na reperfusie, werden lokale myocardcelnarcose, celfragmentatie en -ontbinding, inflammatoire celinfiltratie en lokale vasodilatatie en congestie 24 tot 48 uur na de operatie in het weefsel gevonden. Serum werd verzameld en de niveaus van ALT, AST, creatinine en amylase werden gedetecteerd door een automatische biochemische analysator.Alle indicatoren piekten op 24 tot 48 uur, in tegenstelling tot de pathologische veranderingen. Hoewel de niveaus 48 uur na de operatie in principe normaal waren, bleef de pathologische schade aanhouden. Kortom, het model bij ratten is eenvoudig en gemakkelijker te gebruiken zonder microchirurgie en biedt basis voor fundamenteel onderzoek naar de ischemie-reperfusieletsel van extrahepatische organen na leverischemie.

organ-ischemia-reperfusion-injury-simulating-hemodynamic-changes-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We een gemakkelijk te stellen herziening van de klassieke twee manchet techniek orthotope levertransplantatie in rat.

Orthotope levertransplantatie bij ratten

Orthotope levertransplantatie bij ratten is een onmisbare experimenteel model voor biomedisch onderzoek. Hier presenteren we onze chirurgische procedures voor orthotope rat levertransplantatie met een lever-arteriële reconstructie met behulp van een 50% gedeeltelijke graft.

Chirurgische ingrepen voor een Rat Model van deelspoelen orthotope levertransplantatie met hepatische arteriële reconstructie

Het geïsoleerde rattenhart is een duurzaam model voor ischemie-reperfusieletsel. Hier beschrijven we het proces van het oogsten van het kloppende hart van een rat via in situ aortacanuletie, Langendorff-perfusie van het hart, gesimuleerde ischemie-reperfusieletsel en infarctkleuring om de omvang van het ischemische letsel te bevestigen.

Inductie en beoordeling van ischemie-reperfusie schade in Langendorff-geperfuseerde Rat Hearts

Een unieke rattenlever hilaire clamp model ontwikkeld voor het bestuderen van de effecten van farmacologische moleculen bij het verbeteren van ischemie-reperfusieletsel. Dit model omvat directe canulatie van het portaal toevoer naar het segment ischemische lever via een tak van de poortader, zodat hij direct hepatische afgifte.

Wijze van Direct Segmentale Intra-lever Delivery Met behulp van een Rat Liver Hilar Clamp Model

Het doel van deze studie is om de rat orthotopische levertransplantatie model te wijzigen om beter te vertegenwoordigen menselijke levertransplantatie en verbetering van de overleving van de ontvanger. De gepresenteerde methode hersteld leverslagaderlijke instroom door het aansluiten van de donor lever gemeenschappelijke lever slagader aan de juiste lever van de ontvanger slagaderslagader.

Verminderde complicaties na arteriële heraansluiting in een ratmodel van orthotopische levertransplantatie

Hier presenteren we optimalisaties voor een longtransplantatiemodel bij ratten die dienen om de resultaten te verbeteren. We bieden een maattabel voor manchetten op basis van lichaamsgewicht, een meetstrategie om de 4eintercostale ruimte te bepalen en methoden voor wondsluiting en BAL (bronchoalveolaire lavage) vloeistof- en weefselverzameling.

Een rattenlongtransplantatiemodel van warme ischemie / reperfusieletsel: optimalisaties om de resultaten te verbeteren

In dit protocol wordt een model van orthotopische levertransplantatie bij varkens beschreven na statische koude opslag van donororganen gedurende 20 uur zonder het gebruik van een veno-veneuze bypass tijdens engraftment. De aanpak maakt gebruik van een vereenvoudigde chirurgische techniek met minimalisering van de anhepatische fase en geavanceerd volume- en vasopressorbeheer.

Varkenslevertransplantatie zonder veno-veneuze bypass als donormodel met uitgebreide criteria

Het hier beschreven heterotope hulplevertransplantatieprotocol bij ratten biedt een praktisch onderzoeksinstrument voor het onderzoeken van mechanismen van afstoting van het levertransplantaat. Dit model helpt bij het verlichten van de chirurgische hindernissen en dierlijke stress van orthotope levertransplantatie bij ratten.

Heterotopisch aanvullend transplantaatmodel voor ratten in de hele lever met behulp van een hepaticouretostomie voor onderzoeken naar afstoting van transplantaten

Dit artikel introduceert een gestandaardiseerde procedure voor gecontroleerde, omkeerbare malperfusie van viscerale organen in rattenmodellen. Het doel is om deze malperfusietoestanden te induceren met een hoge mate van methodologische zekerheid en controle, met behoud van technische eenvoud en foutbestendigheid.

Gecontroleerde reversibele viscerale arteriële ischemie, veneuze congestie en gecombineerde malperfusie via laparotomie op de middellijn bij ratten

Vrije weefsel overdracht wordt op grote schaal gebruikt in de reconstructieve chirurgie om vorm en functie te herstellen na oncologische resectie en trauma. Voorconditionering dit weefsel vóór de operatie kan uitkomst te verbeteren. Dit artikel beschrijft...

In situ Transversale rectusabdominis myocutane Flap: een rat model van myocutane ischemiereperfusieletsel

Leer een rattenmodel bouwen voor ischemie-reperfusieletsel na levertransplantatie door hemodynamische veranderingen te simuleren. Deze methode biedt inzicht in orgaanschade en overlevingskansen.

Orgaan Ischemia-Reperfusie Letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat levertransplantatie model

Meer video's verkennen