Name: Tracking van enkele eiwitten in lipide-dubbellagen met behulp van fluorescentiemicroscopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Leer enkelvoudige-eiwittracking in lipide-dubbellagen met fluorescentiemicroscopie. Dit protocol onthult verborgen eiwittoestanden en versnelt onderzoek naar membraaneiwitdynamica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1/4 Waveplate</td><td>Thorlabs</td><td>WPQ05M-633</td><td>zorg ervoor dat het overeenkomt met de laser</td></tr><tr><td>100X Oil Objective</td><td>Olympus</td><td>12-563-659</td><td>1.45 N/A apochromatisch</td></tr><tr><td>16:0-18:1 PC</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>850457</td><td>POPC Fosfolipiden</td></tr><tr><td>18:0 PEG2000 PE</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880210</td><td>Ammoniumzout</td></tr><tr><td>300mm Lens</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-300-A-ML</td><td></td></tr><tr><td>633 nm He:Ne Laser</td><td>Melles Griot</td><td>05-LHP-927</td><td>Kan worden gewijzigd naar andere bronnen en naar andere golflengten</td></tr><tr><td>633nm band-pass filter</td><td>Chroma Tech</td><td>633/10X</td><td>Aanpassen aan de gebruikte laser</td></tr><tr><td>655nm Long-Pass Filter</td><td>Chroma Tech</td><td>ET655lp</td><td>Veranderen om te passen bij de golflengten van de kleurstof/laser</td></tr><tr><td>Andor Solis I</td><td>Andor&nbsp;</td><td>Andor Solis I</td><td>Software voor beeldopname</td></tr><tr><td>ATTO 655&nbsp;</td><td>ATTO-TEC</td><td>AD 655</td><td>NHS-Ester modificatie, elke kleurstof met de modificatie die geschikt is voor enkelmolecuulwerk kan worden gebruikt. ATTO wordt aanbevolen, maar Cy5/7 kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Bio-beads SM-2 Resin</td><td>BioRad</td><td>1523922</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride</td><td>Millipore Sigma</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Catalase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3155-50MG</td><td>uit runderlever, waterige oplossing, &ge;30000 eenheden/mg</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>C547-1</td><td>HPLC of spectroscopische kwaliteit</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>ESCO Optics</td><td>R525000</td><td>25mm Quartz</td></tr><tr><td>Dichroic Beamsplitter</td><td>Semrock</td><td>FF545/650-Di01-25x36</td><td>Aanpassen aan de golflengten van de kleurstof/laser</td></tr><tr><td>EMCCD Camera</td><td>Andor&nbsp;</td><td>iXon Ultra 888</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tubes 15mL&nbsp;</td><td>Greiner Bio-one</td><td>188261</td><td>cellestar cell cultuurbuizen</td></tr><tr><td>Glucose Oxidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2133-50KU</td><td>uit Aspergillus niger, typer VII, &ge;100000 eenheden/g vast (zonder toegevoegde zuurstof)</td></tr><tr><td>Heat Gun</td><td>Harbor Freight</td><td>56434</td><td>Gebaten bij het verwarmen van het parafilm, over het algemeen kan elke hittepistool worden gebruikt</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>Low Autofluorescence Immersion Oil</td><td>Thorlabs</td><td>MOIL-30</td><td></td></tr><tr><td>Methonal</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A452-1</td><td>HPLC of spectroscopische kwaliteit</td></tr><tr><td>Micro Centrifuge Tube</td><td>VMR</td><td>525-1126</td><td>1,5 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>Micro Pipetters</td><td>Ependorf</td><td></td><td>Verschillend; 1000 &micro;L, 100 &micro;L en 10 &micro;L worden aanbevolen</td></tr><tr><td>&Oslash;1.5" Lens Tubes</td><td>Thorlabs</td><td>SM1.5L10</td><td>De buitenste draad is geschaafd voor monstervoorbereiding</td></tr><tr><td>Optical Table</td><td>Newport</td><td>RPR Reliance</td><td>De grootte van de tafel is afhankelijk van de beschikbare ruimte</td></tr><tr><td>Optical Tissues</td><td>Thorlabs</td><td>MC-50E</td><td>Reiniging van verschillende componenten</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Millipore Sigma</td><td>P7669</td><td>Controleer of er geen fluorescerende gassen vrijkomen tijdens het proces</td></tr><tr><td>Piezo Actuator</td><td>Newport</td><td>PZA12</td><td></td></tr><tr><td>Pneumatic Vibration Isolators</td><td>Newport</td><td>I-2000 Series</td><td>gebruikt om de optische tafel te stabiliseren voor eventuele ongelijkheden&nbsp;</td></tr><tr><td>Refrigerated Bath</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Isotemp 3016</td><td></td></tr><tr><td>Shutter Controller</td><td>Thorlabs</td><td>SC10</td><td>Gelinkt aan de beeldsoftware</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Millipore Sigma</td><td>S988</td><td></td></tr><tr><td>Steritop Filter</td><td>Millipore Sigma</td><td>S2GPT05RE</td><td></td></tr><tr><td>Switchbox Driver and Controller&nbsp;</td><td>Newport</td><td>PZC200</td><td>Stage controller</td></tr><tr><td>Syringe Filter</td><td>J.T. Baker</td><td>SF01-98</td><td>PES 25mm 0.2 &micro;M</td></tr><tr><td>TEC Element</td><td>Thorlabs</td><td>TEC3-2.5</td><td>Wordt gebruikt om de Peltier-warmtepomp op de monsterhouder en objectiefkraag aan te sluiten</td></tr><tr><td>Temperature contoller</td><td>Meerstetter Engineering</td><td>TEC-1091</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Detector</td><td>Thorlabs</td><td>TH100PT</td><td></td></tr><tr><td>Thermistor</td><td>Thorlabs</td><td>TH10K</td><td></td></tr><tr><td>Tube-O-Dialyzer</td><td>G Biosciences</td><td>786-611</td><td>4K MWCO</td></tr><tr><td>UV Ozone Cleaner</td><td>Novascan</td><td>PSDP_UV</td><td>Pro Series - Digital&nbsp;</td></tr><tr><td>Zoom Optics&nbsp;</td><td>Thorlabs</td><td>SM1NR1</td><td></td></tr></tbody></table>

tracking van enkele eiwitten in lipide-dubbellagen met behulp van fluorescentiemicroscopie

Tracking Single Proteins in Lipid Bilayers Using Fluorescence Microscopy

Tracking van enkele eiwitten in lipide-dubbellagen met behulp van fluorescentiemicroscopie

Direct observation is a fundamental method for scientific discovery and understanding. Time-lapse single-molecule fluorescence imaging allows the ...

tracking-single-proteins-lipid-bilayers-using-fluorescence

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Dit protocol beschrijft hoe totale interne reflectiefluorescentiemicroscopie te gebruiken om enkele receptoren op het oppervlak van levende cellen te visualiseren en te volgen en daarmee de laterale mobiliteit van receptoren, de grootte van receptorcomplexen te analyseren, evenals om voorbijgaande receptor-receptorinteracties te visualiseren. Dit protocol kan worden uitgebreid tot andere membraaneiwitten.

Hoge-resolutie Spatiotemporal Analyse van Receptor Dynamics door Single-molecule fluorescentie microscopie

Ruimtelijke verdeling en temporele dynamica van plasmamembraaneiwitten en lipiden is een populair onderwerp in de biologie. Hier wordt dit probleem aangepakt door een ruimte-tijdelijke beeldfluctuatieanalyse die conceptueel dezelfde fysische grootheden levert als enkeldeeltjevolgen, maar gebruik maakt van kleine moleculaire labels en standaard microscoopopstellingen.

Van Fast Fluorescentie Imaging om moleculaire diffusie wet op de Live-celmembranen in een Commercial Microscoop

We presenteren een werkwijze voor het bereiden mica ondersteunde lipide bilagen voor hoge resolutie microscopie. Mica is transparant en plat op atomaire schaal, maar zelden gebruikt in de beeldvorming als gevolg van de behandeling van problemen; onze voorbereiding leidt zelfs afzetting van het mica plaat, en vermindert de gebruikte bilaag bereiding materiaal.

Voorbereiding van Mica Ondersteunde lipidendubbellagen voor hoge resolutie optische microscopie Imaging

Hier wordt de bereiding van eiwit-gefunctionaliseerde planaire glas-ondersteunde lipide bilayers, de bepaling van eiwitmobiliteit binnen en de meting van eiwitdichtheden getoond. Een routekaart voor het bouwen van een ruisonderdrukte Total Internal Reflection microscoop wordt geschetst, die het mogelijk maakt om enkele bilayer-residente fluorochromen met hoge ruimtelijk-temporele resolutie te visualiseren.

Single Molecule Fluorescentie Microscopie op Ondersteunde Planar dubbellagen

Hier presenteren we een protocol om enkele, SNARE-bemiddelde fusie gebeurtenissen tussen liposomen en ondersteund dubbellagen in microfluïdische kanalen met gepolariseerde TIRFM, met 'single molecule gevoeligheid en ~ 15 msec tijdsresolutie te detecteren. Lipide en oplosbare lading afgifte kan gelijktijdig worden gedetecteerd. Liposoom grootte, lipide diffusie, en fusie porie eigenschappen worden gemeten.

SNARE-gemedieerde Fusie van Single proteoliposomen met Tethered Ondersteund dubbellagen in een microfluïdische Flow Cell gecontroleerd door gepolariseerde TIRF Microscopie

Hier presenteren we een protocol voor één deeltje beeldanalyse waarmee kwantitatieve evaluatie van diffusie coëfficiënten, soorten van beweging en cluster grootte van enkele deeltjes ontdekt door fluorescentie microscopie bijhouden.

Beeldverwerking Protocol voor de analyse van de verspreiding en de clustergrootte van membraan receptoren door fluorescentie microscopie

3D single-molecuul lokalisatie microscopie wordt gebruikt om de ruimtelijke posities en bewegings trajecten van fluorescently gelabelde eiwitten in levende bacteriële cellen te sonde. Het experimentele en data-analyse protocol dat hierin wordt beschreven, bepaalt het heersende diffusieve gedrag van cytosolische eiwitten op basis van gegroepeerde enkelvoudige molecuul trajecten.

Single-molecule tracking microscopie-een hulpmiddel voor het bepalen van de Diffusieve toestanden van cytosolische moleculen

Dit protocol beschrijft een iSCAT-gebaseerde beeldverwerking en single-particle tracking-benadering die het gelijktijdige onderzoek van de moleculaire massa en het diffusieve gedrag van macromoleculen die interageren met lipidemembranen mogelijk maakt. Stapsgewijze instructies voor monstervoorbereiding, massa-naar-contrastconversie, filmacquisitie en nabewerking worden gegeven naast aanwijzingen om mogelijke valkuilen te voorkomen.

Massagevoelige deeltjestracking om membraangeassocieerde macromolecuuldynamica te karakteriseren

Celvrije reconstitutie is een belangrijk hulpmiddel geweest om de cytoskeletassemblage te begrijpen, en het werk in het afgelopen decennium heeft benaderingen vastgesteld om septinedynamica in minimale systemen te bestuderen. Hier worden drie complementaire methoden gepresenteerd om septineassemblage in verschillende membraancontexten te observeren: vlakke bilayers, sferische steunen en staafsteunen.

Reconstitutie van septineassemblage bij membranen om biofysische eigenschappen en functies te bestuderen

Hier wordt een protocol gepresenteerd om de binding, mobiliteit en assemblage van afzonderlijke moleculen op kunstmatige overvolle lipidemembranen uit te voeren en te analyseren met behulp van single-molecule total internal reflection fluorescence (smTIRF) microscopie.

Single-Molecule Diffusie en assemblage op polymeer-crowded lipide membranen

Dit protocol beschrijft hoe TIRF-microscopie kan worden gebruikt om individuele ionkanalen te volgen en hun activiteit in ondersteunde lipidemembranen te bepalen, waardoor het samenspel tussen laterale membraanbeweging en kanaalfunctie wordt gedefinieerd. Het beschrijft hoe de membranen moeten worden voorbereid, de gegevens moeten worden vastgelegd en de resultaten moeten worden geanalyseerd.

Single-Molecule Imaging van Laterale Mobiliteit en Ion Channel Activity in Lipid Bilayers met behulp van Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) Microscopie

Leer enkelvoudige-eiwittracking in lipide-dubbellagen met fluorescentiemicroscopie. Dit protocol onthult verborgen eiwittoestanden en versnelt onderzoek naar membraaneiwitdynamica.

Tracking van enkele eiwitten in lipide-dubbellagen met behulp van fluorescentiemicroscopie

Meer video's verkennen