Opracowaliśmy półautomatyczną metodę optycznej analizy bicia serca (SOHA) do analizy szybkich nagrań optycznych z serc Drosophila, rybek danio oraz embrionów myszy. Prezentujemy zastosowanie naszej metodologii w analizie funkcji serca muszki owocowej oraz embrionów myszy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Półautomatyczna optyczna analiza rytmu serca w przypadku małych serc
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Opracowaliśmy metodę analizy szybkich zapisów optycznych zDrosophila, serca danio pręgowanego oraz embrionalne serca myszy (Fink, et. al., 2009). Nasza metoda Półautomatycznej Optycznej Analizy Tętna (SOHA) wykorzystuje nowatorski algorytm detekcji ruchu, który jest w stanie wykryć ruchy serca związane z poszczególnymi zdarzeniami skurczowymi i rozkurczowymi. Program dostarcza szereg fizjologicznie istotnych odczytów, w tym odstępy skurczowe i rozkurczowe, częstość akcji serca, a także jakościowe i ilościowe miary arytmii tętna. Program oblicza również pomiary średnicy serca podczas rozkurczu i skurczu, na podstawie których wyliczane są procentowe skrócenie frakcyjne oraz zmiany powierzchni frakcyjnej. Wyniki są dostarczane w formie pliku cyfrowego kompatybilnego z większością programów do arkuszy kalkulacyjnych. Pomiary są dokonywane dla każdego uderzenia serca w zapisie, co zwiększa moc statystyczną wyników. Prezentujemy każdy z etapów wymagających wprowadzenia danych przez użytkownika oraz pokazujemy zastosowanie naszej metodologii w analizie funkcji serca we wszystkich trzech genetycznie modyfikowalnych modelach serca.
Protokół
Kliknij tutaj, aby przejrzeć opis procedury półautomatycznej analizy rytmu serca (SOHA).
Półautomatyczna optyczna analiza tętna
1. Obróbka wstępna -
Ten etap dostarcza informacji na temat rozkurczowej i skurczowej średnicy serca.
Krawędzie serca są identyfikowane i zaznaczane podczas maksymalnego rozkurczu i skurczu. Nagrania optyczne można odtwarzać z niską prędkością, a nawet klatka po klatce, co pozwala na precyzyjne zidentyfikowanie klatek, w których następuje maksymalny skurcz i ro....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Model Drosophila okazał się potężnym narzędziem genetycznym, które wykorzystywano do badania różnorodnych kwestii naukowych, od rozwoju embrionalnego po procesy uczenia się i pamięć. Ostatnio ten wszechstronny organizm modelowy został zastosowany do badania genetyki funkcji serca. Wiele prób ilościowej oceny fizjologii serca u dorosłych Drosophila opierało się na obserwacjach przeprowadzanych u nienaruszonych much poprzez kutykulę odwłoka. Większość tych podejść opiera się na obserwacji wizualnej lub rejestracji zmian na.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.
Podziękowania
KO i AC są wspierani przez grant i stypendium z American Heart Association. SIB i RB są wspierani przez granty z NIH.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Oprogramowanie MatLab | Mathworks | Wymagane środowisko dla oprogramowania analitycznego. | |
| Cyfrowa kamera EM-CCD | Hamamatsu Corp. | 9100 lub 9300 | Inne szybkie kamery cyfrowe również będą odpowiednie. |
| Oprogramowanie do akwizycji danych obrazowych HC | Hamamatsu Corp. | Inne oprogramowanie do akwizycji obrazu, które generuje pliki wideo w formacie avi, również będzie odpowiednie. | |
| Mikroskop świetlny z obiektywem 10x | Leica Microsystems | Zastosowanie obiektywu immersyjnego, który eliminuje granicę faz powietrze-woda, znacznie poprawia rozdzielczość |
Bibliografia
- Cammarato, A., Dambacher, C. M., Reedy, M. C., Knowles, A. F., Kronert, W. A., Bodmer, R., Ocorr, K., Bernstein, S. I. Myosin Transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles. Mol Biol Cell. 19 (2), 553-562 (2008).
- Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Me....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
