$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały przeanalizowane przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.
1. Eksperymentalne zakażenie M. marinum z iniekcją dootrzewnowej
- Pipetą nałóż kroplę rozcieńczonego roztworu bakteryjnego o pojemności 5 μL na kawałek folii parafilmowej i wciągnij ją do igły insulinowej o pojemności 30 G.
- Do eksperymentu użyj dzikich ryb w wieku 5–8 miesięcy oraz mutantów rag1−/−hu1999. Znieczulaj dorosłe danio pręgowane w wodzie akwarium z esterem etylowo-esterowym o stężeniu 0,02% kwasu 3-aminobenzoowego (pH 7,0). Ustaw rybę brzuszną stroną do góry, w szczelinę na wilgotnym, piankowym plastiku.
UWAGA: Ryby mutantne rag-/- nie są w stanie przejść somatycznej rekombinacji i produkować funkcjonalnych komórek T i B. - Wstrzyknij igłę między płetwy miednicy pod kątem około 45°. Trzymaj igłę otwartą do góry, aby obserwować, czy całe otwarcie znajduje się wewnątrz jamy brzusznej. Powoli wstrzykuj zawiesinę bakteryjną i ostrożnie usuń igłę.
UWAGA: Jeśli czerwony smug wycieka z ryby po wstrzyknięciu, wyklucz rybę z eksperymentu. - Bezpośrednio po wstrzyknięciu przenieś rybę do zbiornika regeneracyjnego ze świeżą wodą.
- Pobieraj próbki zawiesiny bakteryjnej na płytkach 7H10 co 15 minut z używanej bakterii aliquot i inkubuj bakterię w temperaturze 29 °C przez 5 dni, a następnie weryfikuj dawkę infekcji, licząc kolonie na płytkach.
- Regularnie sprawdzaj stan zdrowia ryb i usypiaj każdą rybę z objawami infekcji z stężeniem ponad 0,02% esteru etylo-esteru 3-aminobenzoenowego (pH 7,0).
UWAGA: Około 7% dorosłych danio zakażonych 34 ±15 CFU oraz 30% danio zakażonych 2029 ± 709 CFU będzie miało objawy do 8 tygodnia19. Objawy mogą obejmować nieprawidłowe pływanie, brak reakcji na dotyk, dyszenie, obrzęk lub widoczne wychudzanie. - Utrzymuj danio według wspólnych standardów