Test in vitro do badania interakcji mikroorganizmów w kokulturze

Streszczenie

Źródło: Temkin, M. I. i in. Wysokoprzepustowe testy kokultury do badania interakcji mikroorganizmów. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film prezentuje test in vitro do badania interakcji mikroorganizmów między Corynebacterium propinquum a Staphylococcus w współkulturze.

Protokół

1. Szczepienie organizmu docelowego

UWAGA: Po inkubacji przez noc upewnij się, że hodowle są mętne. Niektóre hodowle bakteryjne mogą flokulować na dnie rurki hodowlanej. Wiruj rurki hodowlane, aby rozproszyć grudki i ocenić mętność hodowli.

1. Przygotuj płytkę docelową, wypełniając każdy dołek pustej płytki 12-dołkowej 1,8 mL bulionu z infuzją mózg-serce (BHI) oraz 200 μL celowej hodowli nocnej.
   UWAGA: Organizm docelowy odnosi się do organizmu, którego status hamowania określa się za pomocą testu interakcji kokulturowych. W tym eksperymencie organizmami docelowymi są Staphylococcus spp. wyizolowane z próbek ludzkich płukań nosowych.
2. Rozwiń i umieść sterylny stempel szczepionkowy na tarczę docelową. Delikatnie mieszaj hodowle w studniach, uważając, by nie przeniknęły do sąsiednich studni.
3. Podnieś pieczątkę szczepionkową i upewnij się, że na każdym końcu znajduje się kropla rozcieńczonej kultury docelowej.
4. Przygotuj płytkę kontrolną monokulturową, umieszczając pieczątkę szczepionkową na nienaszczepionej płycie bioaseasu i delikatnie kołysząc pieczątkę, aby kropla hodowli zaszczepiła każdą jamkę. Po zdjęciu pieczątki szczepionkowej, kropla hodowli powinna być widoczna w dołkach płytki bioaseju.
   1. Jeśli w otworach nie zostaną zaszczepione pieczęcią szczepionkową z powodu nierównych poziomów podłoża, należy umieścić 3 μL rozcieńczonej kultury nocnej na prawej stronie dołków za pomocą pipety.
5. Zaszczep płytki bioaseasu jak powyżej (patrz krok 1.4.1), ale wyrównaj pieczątkę tak, aby końcówki były zgodne z prawą stroną płytki z 12 dołkami. Upewnij się, że pieczątka nie styka się z istniejącą kolonią bakterii podczas szczepienia dołków.
6. Ostrożnie zdejmij stempel i włóż go z powrotem do tarczy docelowej.
7. Powtarzaj inokulację dla każdej płytki bioaseju, aż wszystkie płytki zostaną zaszczepione.
8. Inkubuj płytki biotestowe do góry nogami w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Płytka hodowla komórek z 12 dołkami, sterylna z pokrywką	Greiner bio-one	665 180
Agar, bakteriologiczny	VWR	J637
Bulion z infuzją serca mózgu	Dot Scientific	DSB11000-5000