Generowanie modelu szczura glejaka wielopostaciowego

Streszczenie

Źródło: Bolcaen, J., et. al., Napromienianie pod kontrolą PET i MRI modelu szczura glejaka przy użyciu mikropromiennika. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje procedurę ustanawiania szczurzego modelu glejaka poprzez stereotaktyczne wstrzykiwanie komórek glejaka powodującego guz mózgu do kory przedczołowej.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Model komórek szczura F98 GB

1. Hoduj komórki F98 GB, uzyskane z ATCC, w monowarstwach przy użyciu zmodyfikowanego Eagle Medium firmy Dulbecco, 10% surowicy cielęcej, 1% penicyliny, 1% streptomycyny, 1% L-glutaminy i 0,1% amfoterycyny b i umieść w inkubatorze CO₂ (5% CO₂ i 37 °C).
2. Zaszczepić komórki glejaka w mózgu samic szczurów Fischer F344 (masa ciała 170 g).
   1. Używaj sterylnych narzędzi i zawsze noś sterylne rękawice.
   2. Znieczulić szczury, wstrzykując mieszaninę 74 mg/kg ketaminy i 11 mg/kg ksylazyny dootrzewnowo (IP) za pomocą strzykawki insulinowej (1 ml, 29 g). Potwierdź znieczulenie przez brak odpowiedzi na odruch wycofania kończyny. Unieruchomić szczury w urządzeniu stereotaktycznym za pomocą punktów mocowania nosa i uszu. Umieść karbomerowy żel pod oczy, aby zapobiec wysuszeniu oczu pod narkozą.
   3. Ogol szczura od poziomu oczu do tyłu czaszki i zdezynfekuj skórę jodowidonem.
   4. Odsłoń czaszkę przez nacięcie w linii środkowej skóry głowy o długości 2 cm i wykonaj otwór o średnicy 1 mm (wiertło diamentowe) 2 mm z tyłu i 2,5 mm z boku do bregmy w prawej półkuli czołowej.
   5. Wprowadzić stereotaktyczną igłę insulinową (29 G) i wstrzyknąć 5 μl zawiesiny komórek (20 000 komórek F98 GB) na głębokość 3 mm za pomocą sterownika pompy mikrostrzykawkowej (ustawienia: wstrzyknięcie (I50), szybkość 1 nL/s (001 SDN)).
   6. Powoli wyjąć strzykawkę i zamknąć nacięcie woskiem kostnym. Zszyj skórę i zdezynfekuj ją jodonem powidonu.
   7. Ustabilizuj temperaturę ciała zwierzęcia po operacji za pomocą czerwonej lampy. Monitoruj przebudzenie szczura, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać leżący mostek. Nie należy zwracać zwierzęcia do towarzystwa innych zwierząt, dopóki nie wyzdrowieje w pełni. Trzymaj wszystkie zwierzęta w kontrolowanych warunkach środowiskowych (12 godzin normalnych cykli światła/ciemności, 20-24 °C i 40-70% wilgotności względnej) z jedzeniem i wodą ad libitum. Upewnij się, że uważnie śledzisz zwierzęta, monitorując ich masę ciała, jedzenie, spożycie wody oraz ich aktywność i normalne zachowanie. Użyj śmiertelnej dawki pentobarbitalu sodu do eutanazji zwierząt (160 mg/kg), jeśli zaobserwuje się spadek masy ciała o 20% lub gdy normalne zachowanie poważnie się pogorszy (e., brak pielęgnacji).

Materiały