Generowanie niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura w celu wywołania lokalnego niedokrwienia mózgu

Streszczenie

Źródło: Larpthaveesarp, A., et. al. Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje ustanowienie modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura. Tętnica szyjna wewnętrzna (ICA) jest odsłonięta, a ligatura jest zabezpieczona, aby ograniczyć napływ krwi. Okluda jest wprowadzana przez ICA, aby dotrzeć do tętnicy środkowej mózgu. Szczenię może następnie dojść do siebie przed dalszą analizą.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Niedrożność tętnicy środkowej mózgu

1. Zważ szczeniaka i upewnij się, że ma odpowiednią wagę (19-21 g). Znieczulij szczenię 3% izofluranem w 100% tlenu (O₂) i upewnij się, że nie ma reakcji na uszczypnięcie stopy. Utrzymuj temperaturę powierzchni ciała w zakresie od 35,5 °C do 37 °C za pomocą poduszki grzewczej pod sceną chirurgiczną.
2. Zabezpiecz zwierzę w pozycji leżącej taśmą w poprzek ramion. Za pomocą sterylnych wacików bawełnianych przetrzyj przedni obszar szyjki macicy roztworem jodu powidonu, a następnie wacik z 70% etanolu w podwójnie destylowanej wodzie, naprzemiennie między każdym roztworem w sumie cztery waciki.
3. Miejscowo naciekać 0,25% bupiwakainy do planowanego miejsca nacięcia. Za pomocą stereoskopu wykonaj nacięcie przedniej części szyjki macicy w linii środkowej od 5 do 7 mm, aby odsłonić tętnicę szyjną wspólną (CCA). Umieść 2-4 retraktory, aby ubytek był otwarty, a tętnica odsłonięta.
4. Zlokalizuj tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA), tętnicę potyliczną (OA) i tętnicę szyjną zewnętrzną (ECA). Zadbaj o tętnice, aby uzyskać wyraźny widok. Uważaj, aby nie naruszyć nerwu błędnego.
   UWAGA: W przypadku szczeniąt operowanych pozorowane, nacięcie pozostawia się otwarte, a tętnice są odsłonięte, po czym nacięcie jest zszywane w zamknięciu. Całkowity czas znieczulenia jest równy czasowi operacji okluzji.
5. Wytnij 1,5 cm jedwabnej nici do szycia 6-0 z jedwabiu. Rozpleć szew, wyciągając pojedyncze pasma. Upewnij się, że pojedyncze pasma są schludne i nie są postrzępione.
   UWAGA: Jeśli to konieczne, wygładź postrzępione końce, zanurzając pojedyncze pasmo w sterylnej wodzie i pielęgnując pasmo końcówkami kleszczy.
6. Trzymając pasmo szwu kleszczami pod kątem 45 stopni, przesuwaj kleszcze szerokim ruchem łukowym, aby przejść pod ICA tak, aby końcówki kleszczy wyłoniły się między ICA a OA.
   UWAGA: Jeśli sekcja zostanie wykonana dobrze, ten krok będzie stosunkowo łatwy. Jeśli ICA i choroba zwyrodnieniowa stawów stykają się, należy uważać, aby nie pęknąć tętnic podczas używania kleszczy do izolowania ICA. Jeśli wystąpi krwawienie, uciskaj tętnicę kleszczami, aż krwawienie ustanie. Wchłonąć krew sterylnym wacikiem.
7. Chwyć koniec pasma szwu, który jest przytrzymywany przez kleszcze i pociągnij go tak, aby koniec był łatwo dostępny. Zwolnij pasmo z kleszczy i wycofaj kleszcze spod ICA, odwracając ruch w kroku 1.5 (Rysunek 1A).
8. Zawiąż tymczasową ligaturę wokół ICA u podstawy, najbliżej miejsca, w którym oddziela się od CCA.
   UWAGA: Ważne jest, aby zawiązać węzeł tak, aby koniec pasma, który zostanie pociągnięty w celu usunięcia węzła, był wystarczająco długi (większy niż 1 mm, mniej niż 3 mm), aby można go było łatwo chwycić kleszczami, upewniając się, że po drugiej stronie węzła znajduje się odpowiednia ilość pasma szwu do zwinięcia.
9. Ostrożnie schuj ICA na boki i użyj klipsa, aby przymocować pasmo do nadmiaru skóry w pobliżu okolicy pachy po stronie przeciwnej do nacięcia. Upewnij się, że to cofające się pasmo jest wystarczająco napięte, aby zatrzymać przepływ krwi, zanim przejdziesz do następnego kroku, aby zminimalizować ryzyko niekontrolowanego krwawienia. Zauważ, że tętnica jest płaska i blada.
   UWAGA: Nie wycofuj zbyt mocno, ponieważ może to spowodować częściowe lub całkowite rozerwanie ICA. Wycofanie można regulować tuż przed wykonaniem arteriotomii, pociągając za pasmo po stronie przeciwnej do klipsa.
10. Użyj kleszczy pod kątem 45°, aby chwycić kolejne nieplecione pasmo szwu i owinąć je pod i wokół ICA, jak w kroku 1.5. Ustaw to pasmo bocznie do nici retrakcyjnej (Rysunek 1B).
    UWAGA: Ten krok można również wykonać przed wycofaniem. Jeśli nie masz pewności co do jakości zwijania, ten węzeł można bardzo luźno zawiązać przed następnym krokiem.
11. Wytnij arteriotomię 0,2 mm w połowie odległości między zawiązanymi i niezwiązanymi ligaturami, zbliżając się do zawiązanej ligatury.
    UWAGA: Krew pozostała w zawiązanej tętnicy może opróżnić się przez arteriotomię, ale nie powinna przekraczać 5 μL. Jeśli krwawienie utrzymuje się, ostrożnie pociągnij pasmo retrakcji, aby zwiększyć retrakcję, uważając, aby uniknąć uszkodzenia tętnicy z powodu nadmiernego napięcia.
12. Za pomocą linijki metrycznej zmierz szew okluzyjny i przetnij szew z dodatkowym naddatkiem 2-3 mm, aby usunąć okluder podczas reperfuzji. Przytrzymaj okluder kleszczami pod kątem 45 stopni i użyj prostych kleszczy, aby utworzyć zgięcie na odpowiedniej długości, aby dotrzeć do MCA, wyznaczając punkt zatrzymania dla postępu.
    UWAGA: Długość okluzji 10 mm od końca silikonowej końcówki do zgięcia jest używana dla poporodowych lub P-10 Sprague Dawley lub Long Evans szczurów w tym zakresie wagowym.
13. Za pomocą kleszczy 45° wprowadź nylonowy szew okluzyjny pokryty silikonem do arteriotomii i przesuń szew do zgięcia, które wyznacza wcześniej ustaloną odległość do MCA (Rysunek 1C). Upewnij się, że postęp jest płynny; Natychmiast zatrzymaj postęp, jeśli wyczujesz opór. Podczas przesuwania należy skierować szew w kierunku równoległym do CC/ECA, w kierunku głowy.
    UWAGA: Jeśli szew jest wysunięty grzbietowo w kierunku kręgosłupa zwierzęcia, może przebiegać do tętnicy skrzydłowo-podniebiennej (PTA). Jeśli opór jest odczuwalny po 3-5 mm posunięcia, szew uderzył w złącze PTA. Cofnij okluder z tętnicy, aż silikonowa głowica znajdzie się w pobliżu arteriotomii przed dostosowaniem kierunku postępu. Nie jest konieczne całkowite usunięcie okludera z arterionomii.
14. Zabezpiecz okluder, wiążąc tymczasową ligaturę za pomocą nici z kroku 1.10 (Rysunek 1D).
15. Zdejmij zacisk zwijacza. Przytnij pasma obu tymczasowych ligatur tak, aby pasmo węzła, które jest ciągnięte w celu usunięcia węzła, było łatwe do uchwycenia prostymi kleszczami i było dłuższe niż pasmo ciągnięte w celu zaciśnięcia węzła.
    UWAGA: Pasemka muszą być na tyle krótkie, aby nie plątały się w jamie po zamknięciu.
16. Usuń retraktory i zamknij ubytek za pomocą plecionego jedwabiu 6-0, aby utworzyć trzy do czterech przerwanych szwów.
17. Wyjmij szczeniaka ze znieczulenia i umieść go na poduszce grzewczej w powietrzu w pomieszczeniu. Monitoruj młode, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać leżący mostek i upewnij się, że w pełni wyzdrowiało przed powrotem do matki. Upewnij się, że szczenię utrzymuje temperaturę powierzchni ciała w zakresie od 35,5 °C do 37 °C.

Wyniki

Rycina 1: Obrazy chirurgiczne na żywo z zabiegu tMCAO. (A) Pierwsze pasmo szwu jest zapętlone wokół ICA, jak opisano w kroku 1.6. (B) Pierwsza tymczasowa ligatura jest wiązana, a ICA jest chowany. Drugie pasmo szwu jest zapętlone wokół ICA, bocznie do pierwszego pasma szwu, jak opisano w kroku 1.9. (C) Pokryty silikonem szew okluzyjny jest wprowadzan...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Isoflourane	Henry Schein	50033	Znieczulenie, przy 3%
Trynocny Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Poduszka grzewcza	Sunbeam	000731-500-000	Niskie do średniego ustawienia
Termometr IR	Instrumenty Extech	72-5270
zestaw do chowania dla małych zwierząt	Narzędzia naukowe	18200-20
Nożyczki CermaCut	Narzędzia naukowe	14958-09
Dumont #5SF Kleszcze	Narzędzia do nauki pięknej	112522-00	2x
Kleszcze Dumont #5/45	Narzędzia do nauki pięknej	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Zakazy zastosowania zacisków	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Narzędzia do nauki pięknej	15000-03	2mm krawędź tnąca
Szwy okluzyjne	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Linijka	Narzędzia naukowe
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 ml/kg
Aplikatory z końcówką bawełnianą	Henry Schein	100-9249
Taśma laboratoryjna	VWR	89097-990