Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Przygotowanie dojrzałych komórek dendrytycznych obciążonych antygenem nowotworowym do immunoterapii

17.9K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/50085

⸱

1 sierpnia 2013

 ,  ,  ,  ,  , 
1Cancer Institute, NYU Langone Medical Center, 2Infectious Diseases, NYU Langone Medical Center

W tym artykule

Podsumowanie

Opisano najczęściej używaną metodę generowania dużej liczby autologicznych komórek dendrytycznych (DC) do wykorzystania w immunoterapii nowotworów. Metoda wykorzystuje IL-4 i GM-CSF do różnicowania DC od monocytów. Niedojrzałe DC są stymulowane do dojrzewania, a następnie ładowane antygenami przed wstrzyknięciem z powrotem pacjentowi.

Streszczenie

Chociaż badania kliniczne wykazały, że szczepionki DC z ładunkiem antygenu są bezpieczną i obiecującą terapią nowotworów 1, ich skuteczność kliniczna nie została jeszcze ustalona. Opisana poniżej metoda, przygotowana zgodnie z wytycznymi Dobrego Procesu Wytwarzania (GMP), jest optymalizacją najpowszechniejszej metody przygotowania ex vivo do generowania dużej liczby DC do badań klinicznych 2.

Nasza metoda wykorzystuje syntetyczny agonista TLR 3 Polyinozyno-Polycytidylowo-Kwas-poli-L-lizyna Karboksymetyloceluloza (Poli-ICLC) do stymulacji DCs. Nasze poprzednie badanie wykazało, że Poly-ICLC jest najsilniejszym indywidualnym bodźcem dojrzewania dla ludzkich DC, co oceniano na podstawie regulacji w górę CD83 i CD86, indukcji interleukiny-12 (IL-12), czynnika martwicy nowotworu (TNF), białka 10 indukowanego interferonem gamma (IP-10), interleukminy 1 (IL-1) i interferonów typu I (IFN) oraz minimalnej produkcji interleukiny 10 (IL-10).

DC różnią się od zamrożonych komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC) uzyskanych w wyniku leukaferezy. PBMC są izolowane przez wirowanie w gradiacji Ficoll i zamrażane w podwielokrotnościach. W dniu 1 PBMC rozmraża się i posiewa na kolbach do hodowli tkankowych w celu wyselekcjonowania monocytów, które przylegają do powierzchni tworzywa sztucznego po 1-2 godzinach inkubacji w temperaturze 37 °C w inkubatorze do hodowli tkankowych. Po inkubacji limfocyty są zmywane, a przylegające monocyty są hodowane przez 5 dni w obecności interleukiny-4 (IL-4) i czynnika stymulującego tworzenie kolonii makrofagów granulocytów (GM-CSF) w celu różnicowania się do niedojrzałych DC. W dniu 6 niedojrzałe DC są pulsowane białkiem hemocyjaniny przez dziurkę od klucza (KLH), które służy jako kontrola jakości szczepionki i może zwiększyć immunogenność szczepionki 3. DC są stymulowane do dojrzewania, ładowane antygenami peptydowymi i inkubowane przez noc. W dniu 7 komórki są myte i zamrażane w 1 ml podwielokrotnościach zawierających 4-20 x 106 komórek przy użyciu zamrażarki o kontrolowanej szybkości. Przeprowadza się testy uwalniania partii dla partii DC, które muszą spełniać minimalne specyfikacje przed wstrzyknięciem ich pacjentom.

Protokół

1. Izolacja i kriokonserwacja PBMC 4

  1. Aseptyczne nakłucie jednego z portów dostępowych w worku do leukaferezy za pomocą zestawu do transferu osocza. Za pomocą strzykawki o pojemności 60 ml przenieść otrzymaną od pacjentów leukaferezę do sterylnej butelki o pojemności 500 ml.
  2. Dostosuj objętość leukaferezy do 2x jej pierwotnej objętości za pomocą RPMI w temperaturze pokojowej. Dokładnie wymieszaj.
  3. Delikatnie wymieszaj butelkę Ficoll-Paque PLUS. Dodać 12 ml Ficoll-Paque PLUS do sterylnej probówki stożkowej o pojemności 50 ml.
  4. Delikatnie nałożyć 30 ml rozcieńczonego produktu do leukaferezy na każdą sterylną probówkę stożkową o pojemności 50 ml zawierającą Ficoll. Należy uważać, aby nie zakłócić interfejsu między Ficollem a zawiesiną komórkową.
  5. Powtarzaj kroki 1.3 i 1.4, aż cała leukafereza zostanie nałożona warstwami.
  6. Odwirować stożkowe probówki o pojemności 50 ml o masie 1 000 × g przez 20 minut w temperaturze pokojowej bez hamowania.
  7. Ostrożnie zebrać mętną warstwę PBMC z każdej probówki i przenieść do nowych sterylnych probówek o pojemności 50 ml.
  8. Dodaj RPMI do każdej probówki do końcowej objętości 50 ml. Delikatnie wymieszaj przez odwrócenie.
  9. Odwirować komórki w temperaturze 500 × g przez 10 minut w temperaturze 4 °C z pełnym hamowaniem.
  10. Usunąć supernatanty z każdej probówki. Ponownie zawiesić granulki komórek z każdej probówki i dodać RPMI do końcowej objętości 50 ml. Delikatnie wymieszaj przez odwrócenie.
  11. Odwirować komórki w temperaturze 500 × g przez 6 minut w temperaturze 4 °C.
  12. Usunąć supernatanty z każdej probówki. Zawiesić i połączyć zawiesiny komórek w jednej stożkowej probówce o pojemności 50 ml.
  13. Zwiększ objętość połączonych PBMC do 50 ml przy większej prędkości obrotowej. Delikatnie wymieszaj przez odwrócenie.
  14. Odwirować komórki w temperaturze 300 × g przez 6 minut w temperaturze 4 °C.
  15. Usunąć supernatant. Zawiesić osad komórkowy w 50 ml RPMI. Delikatnie wymieszaj, aby uzyskać równomierną zawiesinę komórek.
  16. Policz liczbę komórek i określ ich żywotność. Oblicz całkowitą liczbę żywotnych komórek.
  17. Odwirować komórki w temperaturze 300 × g przez 6 minut w temperaturze 4 °C. Przygotować pożywkę do zamrażania. Pożywka do zamrażania składa się z 10% sulfotlenku dimetylu (DMSO; Miltenyi Biotec) w ludzkiej surowicy AB (Valley Biomedical).
  18. Usunąć supernatant. Zawiesić komórki w końcowym stężeniu 2 x 108 komórek/ml w zimnym roztworze do zamrażania.
  19. Przygotować 1 ml porcji w 1,8 ml kriowialiach.
  20. Przenieś kriowiale do zamrażarki o kontrolowanej szybkości i rozpocznij proces zamrażania, Program 1. Pod koniec cyklu należy natychmiast przenieść zamrożone kriowiale do fazy gazowej zamrażarki z ciekłym azotem.

2. Dzień 0: Różnicowanie komórek dendrytycznych od monocytów

  1. Dodać 30 ml RPMI/1% osocza autologicznego do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 50 ml.
  2. Rozmrozić podwielokrotności zamrożonych PBMC przez delikatne mieszanie w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C. Po całkowitym rozmrożeniu przenieść zawartość fiolek do sterylnej probówki stożkowej o pojemności 50 ml. Dokładnie wymieszaj.
  3. Odwirowywać komórki przez 6 minut w temperaturze 500 × g w temperaturze pokojowej. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić granulowane komórki w małej objętości plazmy autologicznej RPMI/1%. Następnie dodać więcej RPMI/1% osocza autologicznego do końcowej objętości 50 ml. Dokładnie wymieszaj.
  4. Ponownie odwirować komórki przez 6 minut w temperaturze 500 × g w temperaturze pokojowej. Odessać supernatant i ponownie zawiesić osad w 50 ml RPMI/1% osocza autologicznego. Dokładnie wymieszaj.
  5. Policz liczbę komórek i określ ich żywotność. Oblicz całkowitą liczbę żywotnych komórek.
  6. Płytka 1,40 x 108 komórek w 40 ml RPMI/1% osocza autologicznego na 225 cm2 EasyFlask. Powtarzaj, aż wszystkie komórki zostaną pokryte.
  7. Inkubować kolby EasyFlask płasko na boku przez 1-2 godziny w temperaturze 37 °C w inkubatorze do hodowli tkankowych zawierających 5% CO2 , aby monocyty mogły przylegać do kolby.
  8. Po zakończeniu inkubacji wyjąć kolbę EasyFlask z inkubatora i umyć ją dwukrotnie, aby usunąć nieprzylegające komórki, używając 30 ml wstępnie podgrzanego RPMI.
  9. Po drugim przemyciu dodać 40 ml RPMI/1% osocza autologicznego z 400-1 000 IU/ml IL-4 i 100-1 000 IU/ml GM-CSF 5-8. W tym protokole używamy 400 j.m./ml IL-4 i 100 j.m./ml GM-CSF.
  10. Inkubować kolby EasyFlask przez 2 dni w temperaturze 37 °C w inkubatorze do hodowli tkankowych zawierających 5% CO2 .

3. Dzień 2: Karmienie komórek dendrytycznych IL-4 i GM-CSF

  1. Dodać 4 ml RPMI/1% osocza autologicznego z 400-1 000 j.m./ml IL-4 i 100-1 000 j.m./ml GM-CSF do każdej kolby EasyFlask. Mieszaj, wirując i kołysząc na boku.
  2. Inkubować kolby EasyFlask jeszcze przez 3 dni (do dnia 5) w temperaturze 37 °C w inkubatorze do hodowli tkankowych zawierających 5% CO2 .

4. Dzień 5: Pobieranie niedojrzałych komórek dendrytycznych

  1. Zebrać kultury, energicznie obracając kolbami i pipetując w górę i w dół, aby ponownie zawiesić nieprzylegające i luźno przylegające komórki. Pobrane komórki przenieść do nowych stożkowych probówek o pojemności 50 ml.
  2. Odwirować probówki o masie 500 × g przez 6 minut w temperaturze pokojowej. Usunąć supernatanty i ponownie zawiesić osad komórkowy w 50 ml RPMI/1% osocza autologicznego. Dokładnie wymieszaj.
  3. Policz liczbę komórek i określ ich żywotność. Oblicz całkowitą liczbę żywotnych komórek.
  4. Odwirować probówki o masie 500 × g przez 6 minut w temperaturze pokojowej. Płytka 1-2 x 106 komórek na basenik w 3 ml RPMI/1% osocza autologicznego z 400 j.m./ml IL-4 i 100 j.m./ml GM-CSF na 6-dołkowych płytkach do hodowli tkankowych.
  5. Inkubować płytki w temperaturze 37 °C w inkubatorze do hodowli tkankowych zawierających 5% CO2 przez noc.

5. Dzień 6: Dojrzewanie i ładowanie antygenem komórek dendrytycznych

  1. Dodać 10 μg/ml KLH do 1/3 studzienek w 6-dołkowych płytkach hodowlanych. Zakręć talerzami, aby wymieszać. KLH dodaje się tylko do 1/3 studzienek, ponieważ KLH jest używany tylko do pierwszej szczepionki DC. Kolejne szczepionki DC zawierają tylko peptydy antygenu nowotworowego.
  2. DC mogą być stymulowane do dojrzewania za pomocą różnych bodźców. Najczęstszym bodźcem dojrzewania, który był stosowany w badaniach klinicznych, był koktajl cytokin (IL-1 β, TNFα i IL-6) oraz prostaglandyny E2 (PGE2) 9,10. Ostatnio popularność zyskało stosowanie agonistów receptora Toll-podobnego (TLR) 11,12. W tym protokole dodaj 2 mg / ml kwasu poliinozyno-policytydylowego-poli-L-lizyny karboksymetylocelulozy (Poly-ICLC) do studzienek i dobrze wymieszaj. Poly-ICLC to kliniczny preparat Poly-IC, który jest stabilizowany poli-L-*-lizyną i karboksymetylocelulozą (wytwarzaną przez Oncovir, Inc.).
  3. Dodać 100 μg/ml długich antygenów peptydowych (NY-ESO-1 i/lub Melan-A/MART-1) do wyznaczonych dołków, przy czym każdy studzienka otrzymuje tylko jeden peptyd, aby uniknąć konkurencji krzyżowej 13.
  4. Inkubować płytki w temperaturze 37 °C w inkubatorze do hodowli tkankowych zawierających 5% CO2 O/N.

6. Dzień 7: Kriokonserwacja komórek dendrytycznych

  1. Przygotuj roztwór do zamrażania DC przy użyciu autologicznego osocza i 10% DMSO. Odwirować roztwór do zamrażania prądu stałego o stężeniu 2 000 × g przez 20 minut w temperaturze 4 °C w celu usunięcia wszelkich cząstek stałych. Przenieść supernatant do nowej, oznakowanej probówki stożkowej o pojemności 15 ml. Przechowywać w temperaturze 4 °C do czasu użycia.
  2. Po zakończeniu inkubacji przez noc zbierz i połącz wszystkie studzienki zawierające DC pulsujące z peptydami w stożkowych probówkach o pojemności 50 ml.
  3. Odwirować probówki o stężeniu 500 × g przez 6 minut. Usunąć supernatanty. Zawiesić osad komórkowy w 5 ml RPMI/1% osocza autologicznego. Zwiększ całkowitą objętość do 50 ml za pomocą RPMI/1% osocza autologicznego. Dokładnie wymieszaj.
  4. Policz liczbę komórek i określ ich żywotność. Oblicz całkowitą liczbę żywotnych komórek.
  5. Odwirować probówki o masie 500 × g przez 6 minut w temperaturze pokojowej. Usunąć supernatanty i ponownie zawiesić każdą osadkę w 5 ml sterylnego 0,9% NaCl, USP i przenieść do nowych stożkowych probówek o pojemności 15 ml. Doprowadzić zawiesinę każdej komórki do 14 ml z bardziej sterylnym 0,9% NaCl, USP. Zakryj i wymieszaj przez odwrócenie.
  6. Powtórz poprzedni krok dwa razy. Po ostatnim odwirowaniu usunąć supernatanty, zbliżając się jak najbliżej granulek komórkowych bez naruszania osadów.
  7. Zawiesić granulki komórek w roztworze do zamrażania prądu stałego przy 4 - 20 x 106 komórek/ml i podać 1 ml na każdą fiolkę CryoTube o pojemności 1,8 ml.
  8. Użyj zamrażarki o kontrolowanej szybkości, Program 1, aby zamrozić porcje szczepionek DC i natychmiast przenieść do fazy gazowej zamrażarki z ciekłym azotem w celu długotrwałego przechowywania.

7. Testowanie wydania partii

  1. Każda partia szczepionki DC musi zostać oceniona i spełnić określone kryteria zwolnienia serii (Tabela 1) przed dopuszczeniem do obrotu w celu wstrzyknięcia pacjentom biorącym udział w badaniu, zwykle 5 do 6 tygodni po przygotowaniu szczepionki.
  2. Żywotność: Oceń żywotność szczepionki DC za pomocą automatycznego licznika komórek. Minimalna akceptowalna specyfikacja żywotności wynosi >70%.
  3. Tożsamość: Oceń tożsamość dojrzałych DC (CD11c+CD14-CD83+) za pomocą cytometrii przepływowej. Odsetek komórek CD11c+ powinien wynosić >50%. Procent komórek CD11c+ i CD14+ powinien wynosić <30%, a procent komórek CD11c+, CD14- i CD83+ powinien wynosić >50%.
  4. Sterylność: Przetestuj szczepionkę DC na obecność bakterii i grzybów beztlenowych i tlenowych poprzez bezpośrednią hodowlę i barwienie metodą Grama. Oceń obecność mykoplazmy za pomocą systemu hodowli bezpośredniej i testu barwienia fluorochromu DNA ze wskaźnikową linią komórkową. W przypadku tych testów minimalny zestaw specyfikacji jest taki, że nie obserwuje się wzrostu we wszystkich kulturach.
  5. Endotoksyna: Ocenić zawartość endotoksyn za pomocą kinetycznego chromogennego testu LAL Kinetic-QCL i musi ona wynosić < 50 EU/ml, aby spełnić minimalne kryteria.
  6. Funkcja: Oceń funkcję DC w mieszanej reakcji limfocytów przez inkubację z allogenicznymi limfocytami T. Stwierdzono obecność proliferacji w porównaniu z niestymulowanymi DC (ryc. 3).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Pod koniec okresu hodowli od 10 do 20% wyjściowych PBMC różnicuje się w komórki dendrytyczne (DC). Dojrzałe komórki DC są CD11c+, CD14-, CD83+, CD40+ oraz CCR7+ (Rysunek 1). Wykazują one wysoką ekspresję cząsteczek MHC klasy I i II oraz cząsteczek kostymulujących CD80 i CD86. Poly-ICLC indukuje również niższe poziomy PDL-1 w porównaniu do innych agonistów TLR 14. Ponadto te dojrzałe pod wpływem Poly-IC komórki DC wydzielają duże ilości IL-12 (Rysunek 2 oraz 15,16) i...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Badania kliniczne fazy I i II nad DC pochodzącymi z monocytów wykazały, że indukują one odpowiedź immunologiczną u pacjentów, jednak sukces kliniczny był ograniczony 1. Może to częściowo wynikać z braku konsensusu co do sposobu generowania optymalnych DC do stosowania w immunoterapii nowotworów. Chociaż istnieje wiele sposobów generowania DC stopnia klinicznego, metody te różnią się pod względem wykorzystania cytokin używanych do różnicowania monocytów, bodźców wykorzystywanych do indukowania dojrzewania oraz ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy otrzymali wsparcie finansowe od: NIH (AI061684, AI071078, AI044628 i K08 AI084578 (Miller)), Fundacji Billa i Melindy Gatesów, Fundacji Charytatywnej Doris Duke, Instytutu Badań nad Rakiem, Alliance for Lupus Research oraz Emerald Foundation. Nina Bhardwaj jest współtwórczynią patentów związanych z przygotowaniem i wykorzystaniem komórek dendrytycznych do manipulowania odpornością. Autorzy nie mają żadnych innych istotnych powiązań ani powiązań finansowych z żadną organizacją lub podmiotem mającym interes finansowy lub konflikt finansowy z tematyką lub materiałami omawianymi w manuskrypcie, poza tymi, które zostały ujawnione.

Podziękowania

Autorzy chcieliby podziękować Andresowi Salazarowi (Oncovir, Inc.) za dar Poly-ICLC.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
RPMI-1640 pożywka z L-glutaminąBioWhittaker12-702F
1M HEPES buforowana sól fizjologicznaBioWhittaker17-737E
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)BioWhittaker17-516F
Albumina ludzka, 25% roztwór USPAventis Behring
Ficoll-Hypaque PREMIUMGE Healthcare17-5442-03
Ludzka surowica ABValley BiomedicalHP1022
Sterylna sól fizjologiczna USPHospira
CryoMACS DMSO Miltenyi Biotec170-076-303
Leukine GM-CSF, 0,5 mg/mlBerlexA02266
MACS GMP IL-4Miltenyi Biotec170-076-101
Hiltonol, Poly-ICLC, 2 mg/mlOncovirNA
VACMUNE KLHBiosyn
225 cm kwadratowych EasyFlaskNalgene Nunc159934
Falcon 6-dołkowe płytki do hodowli tkankowychBecton Dickinson353046
1,8 ml Fiolki CryoTubeNalgene Nunc377267
ThermoCryoMed

Bibliografia

  1. Lesterhuis, W. J., et al. Dendritic cell vaccines in melanoma: from promise to proof. Crit. Rev. Oncol. Hematol. 66, 118-134 (2008).
  2. Sabado, R. L., Bhardwaj, N. Directing dendritic cell immunotherapy towards successful cancer treatment. Immunotherapy. 2, 37-56 (2010).
  3. Schumacher, K. Keyhole limpet hemocyanin (KLH) conjugate vaccines as novel therapeutic tools in malignant disorders. J. Cancer. Res. Clin. Oncol. 127, Suppl 2. 1-2 (2001).
  4. Jaatinen, T., Laine, J. Isolation of mononuclear cells from human cord blood by Ficoll-Paque density gradient. Curr. Protoc. Stem Cell Biol. Chapter 2, Unit 2A 1(2007).
  5. Eichler, H., et al. Multicenter study on in vitro characterization of dendritic cells. Cytotherapy. 10, 21-29 (2008).
  6. Feuerstein, B., et al. A method for the production of cryopreserved aliquots of antigen-preloaded, mature dendritic cells ready for clinical use. J. Immunol. Methods. 245, 15-29 (2000).
  7. O'Neill, D., Bhardwaj, N. Generation of autologous peptide- and protein-pulsed dendritic cells for patient-specific immunotherapy. Methods Mol. Med. 109, 97-112 (2005).
  8. de Vries, I. J., et al. Phenotypical and functional characterization of clinical grade dendritic cells. J. Immunother. 25, 429-438 (2002).
  9. Jonuleit, H., et al. Pro-inflammatory cytokines and prostaglandins induce maturation of potent immunostimulatory dendritic cells under fetal calf serum-free conditions. Eur. J. Immunol. 27, 3135-3142 (1997).
  10. Lee, A. W., et al. A clinical grade cocktail of cytokines and PGE2 results in uniform maturation of human monocyte-derived dendritic cells: implications for immunotherapy. Vaccine. 20, Suppl 4. A8-A22 (2002).
  11. Bhardwaj, N. Harnessing the immune system to treat cancer. J. Clin. Invest. 117, 1130-1136 (2007).
  12. Gnjatic, S., Sawhney, N. B., Bhardwaj, N. Toll-like receptor agonists: are they good adjuvants? Cancer J. 16, 382-391 (2010).
  13. Kedl, R. M., Kappler, J. W., Marrack, P. Epitope dominance, competition and T cell affinity maturation. Curr. Opin. Immunol. 15, 120-127 (2003).
  14. Bogunovic, D., et al. TLR4 engagement during TLR3-induced proinflammatory signaling in dendritic cells promotes IL-10-mediated suppression of antitumor immunity. Cancer Research. 71, 5467-5476 (2011).
  15. Verdijk, R. M., et al. Polyriboinosinic polyribocytidylic acid (poly(I:C)) induces stable maturation of functionally active human dendritic cells. J. Immunol. 163, 57-61 (1999).
  16. Rouas, R., et al. Poly(I:C) used for human dendritic cell maturation preserves their ability to secondarily secrete bioactive IL-12. Int. Immunol. 16, 767-773 (2004).
  17. Jongmans, W., Tiemessen, D. M., van Vlodrop, I. J., Mulders, P. F., Oosterwijk, E. Th1-polarizing capacity of clinical-grade dendritic cells is triggered by Ribomunyl but is compromised by PGE2: the importance of maturation cocktails. J. Immunother. 28, 480-487 (2005).
  18. Krause, P., et al. Prostaglandin E2 is a key factor for monocyte-derived dendritic cell maturation: enhanced T cell stimulatory capacity despite IDO. J. Leukoc. Biol. 82, 1106-1114 (2007).
  19. Morelli, A. E., Thomson, A. W. Dendritic cells under the spell of prostaglandins. Trends Immunol. 24, 108-111 (2003).
  20. Adams, M., et al. Dendritic cell (DC) based therapy for cervical cancer: use of DC pulsed with tumour lysate and matured with a novel synthetic clinically non-toxic double stranded RNA analogue poly [I]:poly [C(12)U] (Ampligen R). Vaccine. 21 (12), 787-790 (2003).
  21. Colombo, M. P., Trinchieri, G. Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy. Cytokine Growth Factor Rev. 13, 155-168 (2002).
  22. Mayordomo, J. I., et al. Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity. Nat Med. 1, 1297-1302 (1995).
  23. Dhodapkar, M. V., et al. Rapid generation of broad T-cell immunity in humans after a single injection of mature dendritic cells. J. Clin. Invest. 104, 173-180 (1999).
  24. Schuler-Thurner, B., et al. Rapid induction of tumor-specific type 1 T helper cells in metastatic melanoma patients by vaccination with mature, cryopreserved, peptide-loaded monocyte-derived dendritic cells. J. Exp. Med. 195, 1279-1288 (2002).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Przygotowanie kom rek dendrytycznychmononuklearne kom rki krwi obwodowejr nicowanie monocyt wstymulacja Poly ICLCadowanie antygenu peptydowegozamra anie z kontrolowan szybko cidojrzewanie kom rek dendrytycznychprodukcja szczepionek immunoterapeutycznychprzetwarzanie leukaferezyanaliza sekrecji cytokin
Przygotowanie dojrzałych komórek dendrytycznych obciążonych antygenem nowotworowym do immunoterapii
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.