Przezskórne wstrzyknięcie do mięśnia sercowego pod kontrolą echokardiografii stanowi efektywną, niezawodną i celowaną metodę dostarczania czynników transferu genów lub komórek do mysiego serca. Postępując zgodnie z krokami opisanymi w tym protokole, operator może szybko stać się kompetentny w tej wszechstronnej, minimalnie inwazyjnej technice.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Iniekcja przezklatkowa domięśniowa pod kontrolą USG u myszy
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Mysie modele chorób sercowo-naczyniowych są ważne dla badania mechanizmów patofizjologicznych i badania potencjalnych terapii regeneracyjnych. Eksperymenty polegające na wstrzyknięciu mięśnia sercowego są obecnie wykonywane przez bezpośredni dostęp chirurgiczny poprzez torakotomię. Chociaż jest to wygodne, gdy jest wykonywane w czasie innej eksperymentalnej manipulacji, takiej jak podwiązanie tętnic wieńcowych, potrzeba inwazyjnej procedury dostarczania do mięśnia sercowego ogranicza potencjalne projekty eksperymentalne. Dzięki coraz lepszej rozdzielczości ultrasonograficznej i zaawansowanym nieinwazyjnym metodom obrazowania, możliwe jest teraz rutynowe wykonywanie przezskórnych wstrzyknięć domięśniowych pod kontrolą USG. Ta metoda skutecznie i niezawodnie dostarcza środki do docelowego regionu mięśnia sercowego. Zalety tej techniki obejmują uniknięcie zachorowalności chirurgicznej, możliwość selektywnego celowania w obszary mięśnia sercowego pod kontrolą ultrasonograficzną oraz możliwość dostarczania zastrzyku do mięśnia sercowego w wielu, z góry określonych odstępach czasu. Dzięki ćwiczonej technice powikłania po wstrzyknięciu do mięśnia sercowego są rzadkie, a myszy szybko wracają do normalnej aktywności po powrocie do zdrowia po znieczuleniu. Postępując zgodnie z krokami opisanymi w tym protokole, operator z podstawowym doświadczeniem w echokardiografii może szybko stać się kompetentny w tej wszechstronnej, minimalnie inwazyjnej technice.
Wprowadzenie
Choroby serca są główną przyczyną zgonów zarówno mężczyzn, jak i kobiet w Stanach Zjednoczonych, odpowiadając za 600 000 zgonów rocznie1. Mysie modele chorób sercowo-naczyniowych są niezwykle ważne dla badania mechanizmów patofizjologicznych i badania potencjalnych terapii. Dostarczanie do mięśnia sercowego wektorów terapii genowej, komórek macierzystych, zmodyfikowanych RNA i innych środków terapeutycznych pozwala na zbadanie ich potencjału terapeutycznego w chorobach serca2-7. Obecnie istnieją ograniczone możliwości dostarczania środków terapeutycznych do mięśnia sercowego w modelach mysich6. Wstrzyknięcie do mięśnia sercowego pod be....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie opisane kroki zostały wykonane zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Szpitalu Dziecięcym w Bostonie.
1. Przygotowanie
- Przed rozpoczęciem protokołu wstrzyknięcia należy przeprowadzić wyjściową ocenę anatomiczną i funkcjonalną serca za pomocą echokardiografii, ponieważ optymalna stała pozycja głowicy do wstrzyknięcia domięśniowego może nie dawać optymalnych standardowych widoków do nakreślenia anatomii i oceny funkcji.
- Układ wtrysku pokazano na rysunkach 1A-1C. Umieścić pustą strzykawkę z osłoniętą igłą, skośnie skierowaną do góry....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Wewnątrzmięśniowe wstrzykiwanie do mięśnia sercowego u myszy z użyciem błękitnego barwnika lub fluorescencyjnych mikrosfer
Wstrzyknięcie barwnika błękitu Evansa jest przydatne do celów szkoleniowych. Wkrótce po wstrzyknięciu należy poddać mysz eutanazji i usunąć serce, aby zwizualizować miejsce podania błękitnego barwnika. Rysunek 5 przedstawia przykład udanego wstrzyknięcia, w którym błękitny barwnik przeniknął do mięśnia sercowego na poziomie środkowym mięśni brodawkowych (
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Leki biologiczne mogą być dostarczane do mięśnia sercowego przez bezpośrednie wstrzyknięcie do mięśnia sercowego, wstrzyknięcie doosierdziowe lub podanie pośrednie przez krwioobieg. Niedawne badania terapii komórkowej w modelach zawału mięśnia sercowego opisały otwarte podejście torakotomii do dostarczania iniekcji12-14. Ważnym czynnikiem decydującym o powodzeniu interwencji terapeutycznej mięśnia sercowego jest wybór drogi porodu. Najwyższą miejscową dawkę leku biologicznego uzyskuje się przy podaniu domięśni.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
TWP zostało ufundowane przez Irish Cardiac Society Brian McGovern Travelling Fellowship. WTP zostało ufundowane przez R01 HL095712 oraz nagrodę AHA Established Investigator Award.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| System obrazowania ultrasonograficznego Vevo 2100 | Visualsonics | ||
| Vevo III | Przetwornik Visualsonics | ||
| Microscan MS400 | Przetwornik Visualsonics | ||
| Microscan MS550D | Igły Visualsonics | ||
| PrecisionGlide | BD | 305128 | 30 G x 1 cal/2,5 cm |
| Strzykawka z końcówką ślizgową | cm3 Exel International | 26048 | lub odpowiednik |
| Gastight 50 μ l szklane strzykawki | Hamilton | 1705 | |
| Trypan blue stain (0,4%) | Gibco | 15250 | lub równoważny |
| Isoflurane | Baxter | AHN3640 | lub równoważny |
| Aquasonic 100 | Parker Laboratories | (01-08) | lub |
| równoważny Mikrosfery polistyrenowe (czerwona fluorescencyjna) | Life Technologies | F-8842 | lub równoważny |
Bibliografia
- Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-117 Forthcoming.
- Strauer, B. E., Steinhoff, G. 10 years of intracoronary and intramyocardial bone marrow stem cell therapy of the heart: fro....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
