Immunohistochemia na skrawkach parafiny naskórka mysiego z użyciem przeciwciał fluorescencyjnych

Podsumowanie

Opisujemy niezawodną metodę immunolokalizacji w obrębie naskórka, zmodyfikowaną zarówno dla przekrojów mrożonych, jak i parafiniowych, którą rutynowo stosujemy w naszym laboratorium.

Streszczenie

W naskórku immunohistochemia jest skutecznym sposobem lokalizacji specyficznych białek w ich odpowiednich przedziałach ekspresji, a mianowicie w warstwie podstawnej, nadpodstawnej oraz warstwie rogiej. Precyzyjna lokalizacja konkretnego białka w obrębie naskórka dostarcza wskazówek dotyczących jego roli funkcjonalnej w tym obszarze. W niniejszym rozdziale opisujemy niezawodną metodę immunolokalizacji w naskórku, zmodyfikowaną zarówno dla skrawków mrożonych, jak i zatopionych w parafinie, którą rutynowo stosujemy w naszym laboratorium. Skrawki parafiny zazwyczaj zapewniają znacznie lepszą morfologię, a tym samym lepsze wyniki i zdjęcia; jednak nie wszystkie przeciwciała działają przy agresywnej fiksacji i obróbce stosowanej podczas ich przygotowania. Dlatego do protokołu włączono również metodę mrożenia sekcji. W ramach sekcjonowania w parafinie opisano dwa protokoły fiksacji (metodą Bouina oraz paraformaldehydem); wybór utrwalacza będzie bezpośrednio powiązany ze specyfikacją przeciwciał i może wymagać zastosowania innej metody fiksacji.

Protokół

Pełny protokół tekstowy dla tego podejścia eksperymentalnego jest dostępny w Springer Protocols.