Tutaj prezentujemy optymalizacje modelu przeszczepu płuc szczurów, które służą poprawie wyników. Zapewniamy przewodnik po rozmiarach mankietów w oparciu o masę ciała, strategię pomiaru w celu ustalenia 4. przestrzeni międzyżebrowej oraz metody zamykania ran i pobierania płynu BAL (płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe) i tkanek.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Model przeszczepu płuc szczura uszkodzenia cieplnego niedokrwienia/reperfuzji: optymalizacje w celu poprawy wyników
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Z naszego doświadczenia z przeszczepem płuc szczurów, znaleźliśmy kilka obszarów wymagających poprawy. Informacje w istniejącej literaturze dotyczące metod doboru odpowiednich rozmiarów mankietów dla żyły płucnej (PV), tętnicy płucnej (PA) lub oskrzeli (Br) są zróżnicowane, co sprawia, że określenie właściwego rozmiaru mankietu podczas przeszczepu płuc szczura jest ćwiczeniem prób i błędów. Standaryzując technikę mankietowania w celu użycia najmniejszego skutecznego mankietu odpowiedniego do wielkości naczynia lub oskrzela, można sprawić, że procedura przeszczepu będzie bezpieczniejsza, szybsza i bardziej skuteczna. Ponieważ średnice PV, PA i Br są związane z masą ciała szczura, przedstawiamy strategię wyboru odpowiedniego rozmiaru za pomocą przewodnika opartego na wadze. Ponieważ objętość płuc jest również związana z masą ciała, zalecamy, aby ta zależność była również brana pod uwagę przy wyborze odpowiedniej objętości powietrza do napompowania płuc dawcy podczas ciepłego niedokrwienia, a także do odpowiedniej objętości PBS, która ma być wkroplona podczas zbierania płynu z płukania oskrzeli i pęcherzyków płucnych (BAL). Opisano również metody rozwarstwienia 4przestrzeni międzyżebrowej, zamykania ran i pobierania próbek zarówno z płatów natywnych, jak i przeszczepionych.
Wprowadzenie
Przez ponad trzy dekady badacze modyfikowali i ulepszali modele przeszczepów płuc szczurów, tak aby generowane dane były bardziej spójne i lepiej odzwierciedlały rzeczywisty stan kliniczny. W czasie, gdy nasze laboratorium wykonuje ten model, określiliśmy cztery obszary poprawy: techniki zakładania zespoleń, identyfikacja 4 przestrzeni międzyżebrowej biorcy, nadmuchiwanie płuc i zamykanie rany podczas zabiegu biorcy oraz pobieranie próbek do analizy.
Modyfikacje techniki zakładania kajdanek dla zespoleń mogą usprawnić całą procedurę przeszczepu poprzez skrócenie czasu obsługi płuca dawcy1,
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Samce szczurów Sprague-Dawley (180-270 g masy ciała) zostały zakupione komercyjnie (np. Envigo) i trzymane w warunkach wolnych od patogenów w Ośrodku dla Zwierząt Uniwersytetu Stanowego Ohio. Wszystkie procedury zostały przeprowadzone w sposób humanitarny zgodnie z NIH i Przewodnikiem Narodowej Rady ds. Badań Naukowych dotyczącym humanitarnej opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych oraz za zgodą Komitetu ds. Instytucjonalnej Opieki i Wykorzystania Zwierząt Uniwersytetu Stanowego Ohio (Protokół IACUC # 2012A00000135-R2).
1. Wstępna konfiguracja
- Konfiguracja urządzeń chirurgicznych.
UWAGA: Jest to operacja niezapewn....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
W celu pomiaru obrzęku płuc obliczono stosunek masy mokrej do masy suchej. Płat natywny dawcy, płat przeszczepiony oraz płat natywny biorcy pobrano zgodnie z opisem w protokole i zważono natychmiast w celu ustalenia masy mokrej, a następnie suszono w temperaturze 60 °C przez 48 h i zważono ponownie w celu ustalenia masy suchej. Zwiększony stosunek masy mokrej do suchej świadczyłby o wystąpieniu obrzęku płuc. Nasze wyniki wskazują, że w płacie przeszczepionym odnotowano istotny wzrost stosunku.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W niniejszym raporcie interweniowaliśmy na kilku krytycznych etapach protokołu przeszczepu płuc szczurów, aby zoptymalizować procedurę. Podczas gdy opisano różne techniki zakładania kajdanek do przeszczepu płuc szczurów 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
BAW, YGL i JLK są wspierane przez granty National Institutes of Health (NIH) R01HL143000. BAW jest wspierany przez Departament Obrony (DOD) w ramach grantu W81XWH1810787. SMB jest wspierany przez R01DK123475 grantów NIH. JM jest wspierany przez granty NIH AR061385, AR070752, DK106394 i AG056919, a także przez grant DOD W81XWH-18-1-0787.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Cewnik naczynio-cewnik o rozmiarze 12 | BD | 382277 | |
| 14 Cewnik naczynio-cewnik | . Braun | 4251717-02 | |
| 16 Cewnik naczynio-cewnik | B. Braun | 4252586-02 | |
| 18 Cewnik naczynio-cewnik | B. Braun | 4251679-02 | |
| Cewnik naczynio-kątowy o rozmiarze 20 | B. Braun | 4252527-02 | |
| Szew | jedwabny 4-0Specjalizacje chirurgiczne Corp. | SP116 | |
| 6-0 szew nylonowy | AD Chirurgiczny | nylonowy S-N618R13 | |
| 7-0 | AD Chirurgiczny | S-N718SP13 | |
| 8-0 | AD Chirurgiczny | XXS-N807T6 | |
| Betadine w sprayu | Avrio Health L.P | UPC | |
| Maszynki do strzyżenia | VWR | MSPP-023326 | |
| Castroviejo micro nożyczki sprężynowe do preparowania | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5668 | |
| Dumont #5 - Drobne kleszcze | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Elektrokoagulacja | Macan | MV-7A | |
| Zestaw do intubacji dotchawiczej | Kent Scientific | ETI-MSE | |
| Kleszcze Fine Science Tools | 11027-12 | ||
| Hemostat komara Halsted | Roboz Surgical Instrument Co | RS-7112 | |
| Heparyna | Fresnius Opieka medyczna | C504701 | |
| Strzykawka insulinowa | Life Technologies | B328446 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Waciki z alkoholem izopropylowym | BD | 326895 | |
| Ketamina | Hikma Pharmaceuticals PLC | NDC 0413-9505-10 | |
| Dieffenbach Bulldog Clamp | World Precision Instruments | WPI14117 | |
| Uchwyt igły/kleszcze, zakrzywione | Micrins | MI1542 | |
| Uchwyt na igłę/kleszcze, proste | Micrins | MI1540 | |
| Perfadex Plus (roztwór do konserwacji narządów) | XVIVO Perfusion AB | REF# 19950 | |
| PhysioSuite | Kent Scientific | PS-MSTAT-RT | Służy do sprawdzania SpO2 i |
| retraktora | Roboz Surgical Instrument Co | RS-6560 | |
| Saline | PP Pharmaceuticals LLC | NDC 63323-186-10 | |
| Nożyczki | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| System anestezjologiczny dla małych zwierząt SomnoSuite | Kent Scientific | SS-MVG-Module | |
| Sterylny Bawełniana gaziczka | Fisherbrand | 22-415-469 | |
| Mikroskop chirurgiczny | Leica | M500-N ze | |
| 5 ml | BD | 309646 | |
| Vannas-Tubingen Nożyczki sprężynowe | Narzędzia do nauki o nauce | 15008-08 | |
| Xylazine | Korn Pharmaceuticals Corp | NDC 59399-110-20 | |
| Zacisk Yasargil | Aesculap, Inc | FT351T | Służy do zaciskania oskrzeli |
| Yasargil Clamp | Aesculap, Inc | FT261T | Służy do zaciskania hilum |
| Yasargil Clamp Applicator | Aesculap, Inc | FT484T |
Bibliografia
- Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. Simplified rat lung transplantation using a cuff technique. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 97 (4), 578-581 (1989).
- Zhai, W., et al. Simplified rat lung tr....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
