Krwotok pajęczynówkowy nadal niesie ze sobą duże obciążenie śmiertelnością i zachorowalnością u człowieka. Aby ułatwić dalsze badania nad schorzeniem i jego patofizjologią, przedstawiono model prechiazmatycznego pojedynczego wstrzyknięcia.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Przedchiazmatyczne, pojedyncze wstrzyknięcie autologicznej krwi w celu wywołania eksperymentalnego krwotoku podpajęczynówkowego w modelu szczurzym
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Pomimo postępów w leczeniu w ostatnich dziesięcioleciach, krwotok podpajęczynówkowy (SAH) nadal niesie ze sobą duże obciążenie chorobowością i śmiertelnością, głównie dotykając dość młodą populację. Opracowano kilka modeli zwierzęcych SAH w celu zbadania patofizjologicznych mechanizmów stojących za SAH i przetestowania interwencji farmakologicznych. Przedstawiony w tym artykule model przedchiazmatycznego pojedynczego wstrzyknięcia u szczura jest eksperymentalnym modelem SAH o z góry określonej objętości krwi. Krótko mówiąc, zwierzę jest znieczulane, intubowane i trzymane pod wentylacją mechaniczną. Regulacja temperatury odbywa się za pomocą poduszki grzewczej. W tętnicy ogonowej umieszcza się cewnik, który umożliwia ciągły pomiar ciśnienia krwi, a także pobieranie krwi. Błona szczytowo-potyliczna jest nacinanana, a cewnik do rejestracji ciśnienia jest umieszczany w cisterna magna, aby umożliwić pomiar ciśnienia śródmózgowego. Cewnik ten może być również używany do dokanałowych interwencji terapeutycznych. Szczura umieszcza się w ramie stereotaktycznej, otwór na zadziory wierci się z przodu do bregmy, a przez otwór żarna wprowadza się cewnik i umieszcza się go tuż przed skrzyżowaniem wzrokowym. Krew autologiczna (0,3 ml) jest pobierana z cewnika ogonowego i wstrzykiwana ręcznie. Powoduje to wzrost ciśnienia śródmózgowego i zmniejszenie przepływu krwi w mózgu. Zwierzę jest trzymane w sedacji przez 30 minut i podaje się mu podskórnie sól fizjologiczną i leki przeciwbólowe. Zwierzę jest ekstubowane i wraca do klatki. Model prechiazmatyczny charakteryzuje się wysokim współczynnikiem odtwarzalności i ograniczoną zmiennością między zwierzętami ze względu na z góry określoną objętość krwi. Naśladuje SAH u ludzi, co czyni go odpowiednim modelem do badań nad SAH.
Wprowadzenie
Nieurazowy krwotok podpajęczynówkowy (SAH) jest formą udaru, stanowiącą około 5% wszystkich przypadków. Najczęstszą przyczyną nieurazowego SAH jest nagłe pęknięcie tętniaka (aSAH), które stanowi 85% SAH. Inne przyczyny to pęknięcie malformacji tętniczo-żylnej, koagulopatie i pęknięcie żył w krwotoku okołomózgowiowym1. Częstość występowania wynosi 9 na 100 000 osobolat, przy czym śmiertelność wynosi około jednej trzeciej, a kolejna jedna trzecia wymaga wsparcia w codziennym życiu, zgodnie z SAH2,3.
Po wstępnym ustabilizowaniu i potwierdzeniu diagnozy, leczenie....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Ta procedura jest wykonywana zgodnie z Dyrektywą Unii Europejskiej 2010/63/UE dotyczącą ochrony zwierząt wykorzystywanych do celów naukowych i zatwierdzoną przez Duński Inspektorat Doświadczeń na Zwierzętach (nr licencji 2016-15-0201-00940). Zabieg chirurgiczny wykonywany jest przy użyciu techniki aseptycznej w jak najszerszym zakresie, w tym sterylnych narzędzi, rękawiczek, cewników i szwów. W badaniu wykorzystano samce i samice szczurów Sprague-Dawley o masie ciała 230-350 g, trzymane w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność, ze stałą temperaturą 22 °C (± 2 °C) i wilgotnością 55% (± 10%). Zwierzęta są zaopatrzone w standardową karmę i wodę ad libitum. Po operacji zwier....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Kobiety są bardziej narażone na aSAH niż mężczyźni. Mimo to w eksperymentach wykorzystuje się głównie samce gryzoni ze względu na możliwe błędy wynikające z heterogeniczności cyklu rujowego u samic. Przedstawione tutaj reprezentatywne wyniki pochodzą z niedawnej publikacji porównującej szczury żeńskie i męskie, potwierdzającej, że model ten daje podobne wyniki u samic w porównaniu do samców21. W badaniu wzięto udział 34 samice szczurów Sprague-Dawley (18 w grupie SAH i 16 w grupie kontrolnej sham).......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Model SAH przed chiazmatycznym pojedynczym wstrzyknięciem naśladuje kilka ważnych elementów ludzkiego SAH, w tym skok ICP, redukcję CBF, przejściowe globalne niedokrwienie, regulację w górę markerów neurozapalnych i CVS 14,15,16,18,19,20. Sonda ICP była również używana jako port do podawania dokanałowego (
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają do zadeklarowania sprzecznych interesów.
Podziękowania
Praca była wspierana przez Fundację Lundbeck i Lundbeck Grant of Excellence (nr R59-A5404). Fundatorzy nie odgrywali żadnej roli w żadnej części manuskryptu.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 16 G Cewnik do żył obwodowych | BD Venflon | 393229 | Igła skrócona, dystalna 1 cm zakrzywiona. Usunięte skrzydła |
| Dzwon anestezjologiczny / komora | Nieznany | ||
| Analizator parametrów krytycznych | Radiometr | ABL80 | |
| Monitor ciśnienia krwi (BP) | Adinstruments | ML117 | Łączy się z Powerlab |
| Kleszcze zakrzywione, 12 cm x 3 | FST | 11001-12 | Do znieczulenia |
| Poduszka cylindryczna, 28 cm x 4 cm | Domowej roboty | Wykonane z ręczniki chirurgiczne | |
| Sprzęt do akwizycji danych | Adinstruments | ML870 Powerlab | |
| Oprogramowanie do gromadzenia danych | Adinstruments | LabChart 6.0 | |
| Wiertarka | KMD | 1189 | |
| Kontroler wiertarki | Silfradent | 300 IN | |
| Elastyczne światło | Schott | KL200 | |
| Poduszka grzewcza | Minco | 1135 | |
| Igła podskórna, 20 G | KD Medical | 301300 | Łączy się z stereotaktycznym |
| ramowym monitorem ICP | Adinstruments | ML117 | Łączy się z Powerlab |
| Waporyzator izofluranowy | Ohmeda | TEC3 | |
| Laptop | Lenovo | T410 | |
| Laserowy monitor dopplerowski | Adinstruments | ML191 | |
| Laserowa sonda dopplerowska | Oxford Optronics | MSF100XP | Łączy się z laserowym monitorem dopplerowskim |
| Uchwyt na igłę, 13 cm | FST | 12001-13 | Do znieczulenia |
| Precyzyjna strzykawka, 0,025 mL | 547407 | ||
| Ramka stereotaktyczna | Kopf Instruments | M900 | |
| Mikroskop chirurgiczny | Carl Zeiss | F170 | |
| Szew igła | Allgaier | 1245 | Do znieczulenia |
| Regulator temperatury | CWE,INC. | Przetwornik TC-1000 | |
| x 2 | Adinstruments | MLT0699 | Łączy się z monitorem ciśnienia krwi i ICP |
| Wentylator | Ugo Basile | 7025 | |
| Maszynka do strzyżenia weterynaryjnego | Aesculap | GT421 | |
| 3-ramienny zwijacz Blair, 13,5 cm | Agnthos | 17022--13 | |
| Blunt Alm zwijacz | FST | 17008-07 | |
| Kleszcze zakrzywione, 12 cm x 2 | FST | 11001-12 | |
| Uchwyt na igłę, 13 cm | FST | 12001-13 | |
| Kleszcze Dumont proste, 11 cm | FST | 11252-00 | |
| Hemostat prosty Halsted-Mosquito x 2 | FST | 13008-12 | |
| Nożyczki do prostej irysówki, 9 cm | FST | 14090-09 | |
| Nożyczki proste Vannas, 10,5 cm | FST | 15018-10 | |
| Waciki absorpcyjne | Kettenbach | 31603 | |
| Nić jedwabna, 4-0, 5 x 15 cm | Vö mel | 14757 | |
| Wosk kostny | Aesculap | 1029754 | |
| Żel pod oczy Carbomer 2 mg/g | Paranova | ||
| Wacik bawełniany | Heinz Herenz | WA-1 | |
| Aplikator z końcówką bawełnianą x 4 | Selefa | 120788 | |
| Igła podskórna, 23 G x2 | KD 900284 | medyczna Łączy się z kranem. Usuń dystalny koniec | |
| Igła podskórna, 23 G x3 | KD | Medical 900284 | Usuń dystalny koniec. 2 łączy się z kranem, 1 ze strzykawką |
| Sonda ICP: | Domowa | Wykonane z następujących elementów: | |
| Rurka polietylenowa, 20 mm | Smiths medical | 800/100/200 | Średnica wewnętrzna (ID): 0,58 mm, Średnica zewnętrzna (OD): 0,96 mm. |
| Rurka silikonowa, 10 mm | Fisher | 15202710 | ID: 0,76 mm, OD: 2,4 mm. |
| Rurka silikonowa, 2 mm | Fisher | 11716513 | ID: 1,0 mm, OD: 3,0 mm. |
| Mikrorurki hematokrytu | Marka | 7493 11 | |
| Ręcznik OP, 45 cm x75 cm | Mö lnlycke | 800430 | |
| Adapter PinPort, 22 G | Instech | PNP3F22 | |
| Wtryskiwacz PinPort | Instech | PNP3M | |
| Rurka polietylenowa, 2 x 20 cm | Smiths medical | 800/100/200 | Łączy się ze strzykawką. Średnica wewnętrzna: 0,58 mm, średnica zewnętrzna: 0,96 mm. |
| Gumka Nieznany | |||
| skalpel, 10 ostrzy | Kiato | 23110 | |
| Igła do kręgosłupa, 25 G x 3,5'' | Braun | 5405905-01 | |
| System kurka, Discofix x 2 | Braun | 16494C | Łączy się z przetwornikiem |
| Szew, 4-0, monofil, niewchłanialny x 3 | Ethicon | EH7145H | |
| Strzykawka, 1 ml | BD Plastipak | 1710023 | |
| Strzykawka, luer-lock, 10 ml x 4 | BD Plastipak | 305959 | Łączy się z przetwornikiem |
| Klej tkankowy | 3M | 1469SB | |
| 0,5% spirytus chlorheksydynowy | Faaborg Pharma | 210918 | |
| Karprofen 50 mg/ml | ScanVet | 43715 | Rozcieńczony 1:10 |
| Isoflurane | Baxter | ||
| Sól fizjologiczna | Amgros | 16404 | |
| Lidokaina-Adrenalina 10 mg/5 &mikro; g/ml | Amgros | 16318 |
Bibliografia
- van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. Lancet. 369 (9558), London, England. 306-318 (2007).
- de Rooij, N. K., Linn, F. H. H., vander Plas, J. A., Algra, A., Rinkel, G. J. E. Incidence of subarachnoid haemorrhage: ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
