April 29th, 2007
Ten film demonstruje przygotowanie ultracienkiej warstwy matrycy/analitu do analizy peptydów i białek za pomocą spektrometrii mas z desorpcją laserową wspomaganą desorpcją i desorpcją laserową (MALDI-MS).
Witamy w samouczku CHI Lab na temat metody ultracienkiej warstwy, która jest szczególnie przydatna do dokładnego oznaczania masy białek. Ze względu na wrażliwy charakter spektrometrii mas do czyszczenia płytki używamy wyłącznie odczynników klasy HPLC oraz bezpudrowych rękawic lateksowych lub nitrylowych. Płukać na przemian wodą z metanolem, a na końcu ponownie metanolem.
Pomiędzy każdym płukaniem delikatnie zetrzyj nadmiar rozpuszczalnika za pomocą chusteczki do soczewek. Możesz powtórzyć te kroki mycia tyle razy, ile to konieczne, aby uzyskać czystą płytę. A po oczyszczeniu i wyschnięciu płytkę należy natychmiast zużyć.
Nałóż i rozprowadź od 20 do 30 mikrolitrów cienkowarstwowego roztworu podłoża na czystej płytce MALDI. Tutaj używamy końcówki do pipety P two 50, aby równomiernie rozprowadzić roztwór, unikając zarysowania płytki. Gdy cienka warstwa wyschnie, usuń wszelkie pozostałe kropelki wody, jeśli są obecne, delikatnie osuszając je chusteczką kim chusteczką.
Następnie delikatnie przetrzyj płytkę jednym płynnym ruchem chusteczką Kim, aby prawidłowo uformować cienką warstwę. Na koniec oczyść krawędzie płytki, aby uniknąć zanieczyszczenia spektrometru masowego. Bardzo ważne jest, aby przetestować cienką warstwę przed nałożeniem próbki.
Jeśli miejsce testowe schnie zbyt długo, w miejscu, w którym kryształy nie są jednorodne, problem może leżeć w samej cienkiej warstwie lub roztworze matrycy, wyczyść płytkę, ponownie nałóż cienką warstwę i przetestuj ponownie. Podczas nakrapiania na cienką warstwę nie chcesz, aby plamy wyparowały do suchości. Raczej, gdy krystalizacja zwolni i zatrzyma się, usuń nadmiar rozpuszczalnika.
Używając aspiratora próżniowego, obecność zanieczyszczeń, takich jak sole i detergenty, a także wysokie stężenie analitu może zakłócać krystalizację. Dalsze rozcieńczanie próbki może poprawić krystalizację Znajdź mrówki w bliskiej odległości od próbki. Pozwoli to na pseudo kalibrację wewnętrzną, w której płytka jest przesuwana z miejsca próbki do miejsca kalibracji.
Podczas pobierania próbki, dodając do widma kilka strzałów laserowych CAS, takie podejście gwarantuje wyższą dokładność kalibracji masy niż sama kalibracja zewnętrzna. Bardzo ważne jest, aby zmyć wszelkie zanieczyszczenia, takie jak sól lub detergent, które mogą zakłócać działanie analitu. Jonizacja. Aby to zrobić, upuść lodowaty kwas octowy o stężeniu 0,1% Tri Fluor Acetic w HPLC, klasyfikując wodę bezpośrednio na miejsca.
Usuń roztwór myjący za pomocą aspiratora próżniowego, jak pokazano tutaj. Ta metoda daje doskonałe widma zarówno dla białek błonowych, jak i rozpuszczalnych.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
To wideo pokazuje przygotowanie ultra-cienkiej warstwy matryca/anality dla analizy peptydów i białek za pomocą spektrometrii mas z jonizacją laserową w asyście matrycy (MALDI-MS). Metoda ta jest niezbędna do dokładnego określania mas białek.
Accurate mass determination of proteins is critical for target validation and lead identification in early discovery. The ultra-thin layer MALDI sample preparation method enhances data quality by improving tolerance to impurities and spatial uniformity, supporting reliable compound evaluation. This method enables predictive confidence in protein characterization, reducing mechanistic ambiguity in preclinical model selection.
The ultra-thin layer method fits within the discovery continuum from early target validation through lead identification to preclinical profiling, enabling reliable protein analysis at each stage.