Drosophila Warunkowanie zalotów: metoda testowania uczenia się i pamięci u much

-Najpierw wyizoluj pojedyncze, naiwne lub niesparowane samce Drosophila melanogastor. Następnie, aby warunkować samce, dodaj samicę, która już się pokryła i dlatego nie jest podatna na zaloty. Samiec wykazuje typowe zachowania zalotowe, takie jak orientowanie się w jej kierunku, podążanie za nią, stukanie ją przednią nogą oraz wysuwanie i wibrowanie skrzydła, aby wydobyć pieśń zalotów. Może również próbować lizać i kryć. Bez względu na wysiłki, samica pozostaje nieotwarta, a samiec doświadcza odrzucenia. W ten sposób uczy się, aby nie zalecać się do wcześniej pokrytej samicy.

Aby przetestować pamięć samca, pozwól mu odpocząć, a następnie wystaw go na kontakt z inną pokrytą samicą. Wytresowany samiec nie będzie próbował zabiegać o względy tej muchy, ponieważ zachowuje pamięć o odrzuceniu w przeszłości. W przykładowym protokole zobaczymy, jak radzi sobie się z muchami podczas faz treningu i testowania testu warunkowania zalotów do oceny pamięci krótko- i długotrwałej.

- Zacznij od znieczulenia wszystkich dorosłych osobników z czterodniowych plików godowych. Oddziel płcie i przenieś pojedyncze wstępnie sparowane samice do każdej z 12 studzienek w jednym rzędzie bloku mieszkalnego. Następnie, używając aspiratora i bez znieczulenia, usuń naiwne samce z ich domowych studzienek i przenieś je do studzienek, w których znajdują się wstępnie pokryte samice. Powtórz ten proces w drugim rzędzie, aby ustawić 12 kolejnych par.

Aby przetestować uczenie się lub pamięć krótkotrwałą, wykonaj tę konfigurację o świcie i pozwól, aby okres treningu trwał godzinę. Aby przetestować pamięć długotrwałą, ustaw pary na cztery godziny przed subiektywnym świtem i pozwól treningowi trwać przez osiem godzin.

- Aby utrwalić się uczenie się i pamięć, ważne jest, aby samce nie kopulowały, dlatego okresowo sprawdzaj pary w okresie treningu, aby upewnić się, że samce są odrzucane.

Po zakończeniu okresu szkolenia delikatnie wyjmij samce ze studzienek za pomocą aspiratora, a nie znieczulenia dwutlenkiem węgla. Załaduj samce do nowego bloku mieszkalnego. W eksperymencie edukacyjnym natychmiast przetestuj samce po treningu, bez okresu odpoczynku. W eksperymencie z pamięcią krótkotrwałą pozwól samcom na godzinę odpoczynku przed rozpoczęciem etapu testu. W eksperymencie z pamięcią długotrwałą samce odpoczywają do następnego subiektywnego świtu.

Aby przygotować się do etapu testowania eksperymentu, znieczul wstępnie pokryte samice i przenieś je do nowego normalnego pokarmu. Odczekaj co najmniej godzinę, aby muchy wyzdrowiały ze znieczulenia. Następnie przygotuj konfigurację testowania. Upewnij się, że masz gotowe magnetowidy do nagrywania aktywności na arenach zalotów.

Aby rozpocząć test, użyj delikatnego aspiracji, aby przenieść testowego samca z bloku mieszkalnego na arenę zalotów z zamkniętymi przegrodami. Przesuwaj otwory wejściowe między arenami, aż wszystkie 18 aren zostanie załadowanych pojedynczymi mężczyznami. Następnie, stosując tę samą technikę, przenieś poszczególne samice na każdą z 18 aren, ale na przeciwną stronę przegród. Teraz ostrożnie odwróć arenę zalotów i umieść ją pod kamerą wideo tak, aby otwory studni skierowały się w dół w kierunku białej powierzchni ławki. Następnie usuń przegrody i rozpocznij nagrywanie wideo. Zapisz co najmniej 10 minut aktywności. Po zakończeniu eksperymentu usuń muchy z aren za pomocą odkurzacza i przewietrz komory godowe przez co najmniej 10 minut, zanim zostaną ponownie użyte.