Test wspinaczki muchowej: metoda testowania ogólnej lokomocji u Drosophila melanogaster

-Najpierw uzyskaj określoną liczbę dorosłych Drosophila. Komora testowa do testu wspinaczkowego składa się z dwóch fiolek sklejonych ze sobą. Jedna z tych fiolek powinna być oznaczona kreską.

Bez znieczulenia dwutlenkiem węgla, które może upośledzać zachowanie podczas wspinaczki, przenieś określoną liczbę much do komory testowej. Pozwól muchom zregenerować się przez określony czas. Zaznaczoną stroną komory do dołu mocno postukaj komorą w podkładkę pod mysz umieszczoną na twardej powierzchni. To zmusi muchy do zejścia na dno komory. Test wspinaczkowy wykorzystuje naturalną tendencję Drosophila do wspinania się w górę wbrew grawitacji, zachowanie zwane geotaksją ujemną.

Podczas badania muchy nie powinny być wystawione na bezpośrednie działanie promieni słonecznych, ponieważ muchy mogą wykazywać zachowanie fototaksji lub ruch w odpowiedzi na bodziec świetlny. Zapisz liczbę much, które docierają do linii lub ją przekraczają. Następnie uzyskaj procentowy wskaźnik zdawalności, dzieląc tę liczbę przez całkowitą liczbę przetestowanych much. Pozwól muchom zregenerować się przed powtórzeniem próby. W tym przykładzie zaobserwujemy test wspinaczkowy używany do oceny funkcji motorycznych Drosophila po mutagenezie chemicznej.

-Na początek zbierz homozygotyczne muchy z linii należących do zmutagenizowanej kolekcji ENU mutantów Drosophila zmapowanych do drugiego chromosomu. Wrzuć muchy w wieku od 10 do 12 dni do komory testowej bez znieczulenia, po jednej linii na raz i pozwól im dojść do siebie przez pięć minut.

Z pięciocentymetrową linią zaznaczoną stroną do dołu, mocno postukaj w komorę trzy razy w podkładkę pod mysz umieszczoną na twardej powierzchni, tak aby wszystkie muchy rozpoczęły test od dołu. Obserwuj lokomocję much przez okres 10 sekund. Zapisz liczbę much, które w tym czasie osiągną lub przekroczą linię pięciu centymetrów, a także całkowitą liczbę badanych much. Odczekaj minutę przed rozpoczęciem drugiej próby. Powtórzyć co najmniej trzy powtórzenia próbne na linię.