Wycięcie kanalików Malpighiego od dorosłej muchy: izolowanie narządu osmoregulacyjnego i wydalniczego

- Zacznij od znieczulonej dorosłej muchy w naczyniu preparacyjnym. Przytrzymaj muchę za klatkę piersiową kleszczami i otwórz tylny koniec brzucha za pomocą drugiej pary kleszczy. Ponieważ dorosłe muchy mają dwie pary kanalików malpighiego lub MT, które zbiegają się do jelita przez wspólne moczowody, wyciągnij tylne jelito z muchy, aby uwolnić MT. Tylna para MT zostanie uwolniona jako pierwsza, gdy okrążą za jelitami. Kontynuuj szarpanie jelita, aby uwolnić przednie MT, a następnie ściśnij je w moczowodze, aby oddzielić je od muchy.

Aby zamontować kanaliki, wsuń szklany pręt pod moczowód i przenieś MT na szkiełko pokryte poli-L-lizyną. Przymocuj wypreparowane narządy, naciskając moczowód w dół, a następnie ostrożnie przeciągnij pręt po MT. Poli-L-lizyna na szkiełku będzie promować przyłączanie poprzez zwiększenie liczby dodatnio naładowanych miejsc dostępnych do wiązania się ujemnie naładowanych komórek kanalików. W poniższym protokole przeanalizujemy MT od dorosłej samicy muchy i zamontujemy je w celu obrazowania na żywo ex vivo w systemie perfuzyjnym.

- Aby rozpocząć tę procedurę, umieść dwa zestawy zacisków pomocnych dłoni do na stoliku mikroskopu obrazowego z jednym zaciskiem z