Test wyspowy: wysokoprzepustowa metoda oceny zachowania lokomotorycznego Drosophila

- Test wyspowy składa się z podniesionej białej platformy na tacy z wodą z mydłem, przykrytej przezroczystym pudełkiem z jedną otwartą stroną. Kamera umieszczona na górze skrzyni rejestruje obrazy platformy z góry, a światła są umieszczone tak, aby zapewnić równomierne oświetlenie obszaru.

Aby załadować muchy na arenę, postukaj fiolką o płaską powierzchnię, aby wszystkie muchy opadły na dno. W krótkich odstępach czasu wyjmij zatyczkę fiolki, odwróć fiolkę na drugą stronę i postukaj otwartym końcem fiolki o platformę, aby wybić wszystkie muchy w tym samym czasie. Lądowanie na platformie uruchamia reakcję ucieczki. Muchy o typowej mobilności mogą oczyścić platformę w ciągu kilku sekund, w przeciwieństwie do tych z wadami narządu ruchu.

Badani są zamknięci w pudełku, a ci, którzy wylądują na wodzie z mydłem, szybko się zanurzają, ponieważ mydło zmniejsza napięcie powierzchniowe wody. Aby ocenić zachowanie lokomotoryczne w różnych warunkach, policz pozostałe muchy na platformie po określonym czasie.

W tym przykładowym protokole zobaczymy konfigurację testu wyspowego kompatybilnego z półautomatyczną analizą obrazu.

- Po pierwsze, należy przygotować co najmniej trzy fiolki na warunki doświadczalne jako kontrpróby biologiczne. Każda fiolka powinna zawierać około 15 much tej samej płci i w podobnym wieku. Co ważne, muchy muszą mieć nienaruszone skrzydła.

Utwórz foldery do przechowywania eksperymentów. Wygeneruj je w strukturze katalogów zdefiniowanej przez warunki i replikacje. Jeśli, na przykład, eksperyment ma dwa genotypy, z których każdy ma pięć powtórzeń, utwórz główny folder z datą eksperymentu, a wewnątrz tego folderu utwórz jeden podfolder dla każdego genotypu. Następnie w folderach genotypów utwórz podfoldery dla każdej replikacji.

Następnie skonfiguruj aparaturę testową. Do brodzika wlej zimną wodę z niewielką ilością mydła i ustaw platformę na środku wanny, jeśli nie jest już zamocowana w wannie. Przykryj tacę i platformę przezroczystym pudełkiem.

Aby oświetlić platformę, umieść nad nią chłodną lampę, taką jak zwykłe diody LED 12 V. Umieść również kamerę internetową podłączoną do komputera bezpośrednio nad platformą.

Na komputerze otwórz oprogramowanie do nagrywania obrazu. W systemie Menu wybierz odpowiednią kamerę internetową jako urządzenie przechwytujące. Umieść martwą muchę na wyspie, aby dostosować ustawienia wideo. Dostosuj jasność, kontrast i kolor w oprogramowaniu, aby martwa mucha wyglądała na czarną na białym tle.

Następnie dostosuj ustawienia filmu poklatkowego, aby zapisać filmy jako pliki AVI. Następnie przejdź do katalogu, w którym mają zostać zapisane dane, i zdefiniuj nazwę filmu. Zapisz te zmiany.

Aby skompresować dane obrazu, wybierz kod Intel IYUV. Ustaw szybkość nagrywania na jedną klatkę co 0,1 sekundy i dostosuj odpowiednią szybkość odtwarzania do 10 obrazów na sekundę.

Na koniec przejdź do ustawień Zaawansowane i wybierz Utwórz obraz BNP dla każdej przechwyconej klatki. Następnie przejdź do tego samego katalogu, w którym wybrałeś pliki AVI i naciśnij OK.

Przed rozpoczęciem upewnij się, że wyspa jest pusta i czysta. Następnie rozpocznij nagrywanie w interfejsie obrazu poklatkowego w oprogramowaniu do nagrywania obrazu.

Weź fiolkę zawierającą muchy i postukaj w nią dwa lub trzy razy, aby strącić wszystkie muchy na dno. Następnie szybko wyjmij zatyczkę z fiolki i energicznie postukaj muchami o platformę. Wszystkie powinny trafić na platformę mniej więcej w tym samym czasie.

Daj muchom do 30 sekund na opuszczenie platformy. Następnie zatrzymaj nagrywanie. W razie potrzeby ręcznie usuń wszelkie pozostałe muchy z platformy.

Przed przystąpieniem do następnego eksperymentu należy ponownie zdefiniować katalog, w którym ma być przechowywany następny zestaw danych.