JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:26 min. • April 30th, 2023
- Pozwól Drosophila złożyć jaja przez noc na naczyniu zawierającym agar uzupełniony sokiem winogronowym, aby uwidocznić jaja i pokryty drożdżami, aby zachęcić muchy do łączenia się w pary i składania jaj. Aby usunąć jajka, dodaj do naczynia wodę destylowaną i delikatnie przetrzyj powierzchnię pędzlem. Następnie przelej mieszaninę przez nylonową siatkę umieszczoną w plastikowej tulei, aby zebrać jaja. Namocz jaja w dwóch rundach 7% wybielacza, aby usunąć kosmówkę lub ochronną warstwę zewnętrzną z zarodka. Ten proces nazywa się dechorionacją.
Jaja są teraz przyklejone do boku tulei. Umyj je trzy razy wodą, aby usunąć wybielacz. Na koniec użyj pędzla, aby przenieść jaja z tulei do fiolek, aby kontynuować rozwój lub do natychmiastowego użycia w eksperymencie. W przykładowym protokole będziemy zbierać i dechorionować jaja Drosophila w sterylnych warunkach, aby hodować muchy o określonej mikrobiocie.
- Umieść nylonową siatkę w plastikowej tulei, aby przygotować sito do zbierania jaj. Jeśli te same muchy zostaną użyte następnego dnia, natychmiast przenieś je do nowej klatki zawierającej świeżo drożdżowe talerze agarowe z sokiem winogronowym. Talerz soku winogronowego w poprzedniej klatce zawiera jaja muszek owocowych. Usuń martwe muchy czystym pędzlem i uważaj, aby nie rozbić agaru. Opłucz płytkę agarową wodą destylowaną i delikatnie zetrzyj jajka z powierzchni agaru, a następnie wylej gnojowicę na siatkę, aby zebrać jajka.
Wysterylizuj szafkę bezpieczeństwa biologicznego 70% etanolem, a następnie włącz światło UV. Spryskaj wszystkie niebiologiczne materiały 70% etanolem i natychmiast umieść je w szafie bezpieczeństwa biologicznego, a następnie wysterylizuj światłem UV.
- Bardzo ważne jest, aby upewnić się, że dobra technika aseptyczna jest praktykowana podczas pracy w komorze bezpieczeństwa biologicznego lub podczas dodawania lub usuwania nowych materiałów do komory bezpieczeństwa biologicznego.
- Przenieś tuleję z jajami do 120-mililitrowego kubka na próbkę i powoli wlej 90 mililitrów 0,6% roztworu podchlorynu sodu lub 7% wybielacza do tulei, tuż pod krawędzią. Za pomocą kleszczy okresowo przesuwaj tuleję w górę iw dół w roztworze, aby ponownie zawiesić jaja. Przenieś tuleję bezpośrednio do drugiego kubka na próbkę wstępnie napełnionego 90 mililitrami wybielacza.
Pod koniec drugiego wybielacza jaja powinny zacząć przylegać do boków tulei. Wyrzuć wybielacz i całkowicie spłucz tuleję sterylną wodą. Ponownie użyj kleszczy, aby ponownie zawiesić jajko kilka razy podczas każdego mycia. Pod koniec trzeciego prania większość jaj należy przymocować do boku tulei.
Za pomocą sterylnego pędzla przenieś jaja z boku tulei na sterylną dietę. Pozostaw nakrętki luźne, aby tlen mógł dostać się do rurki. Przeniesione jaja będą widoczne na powierzchni diety.