Rozwarstwienie kompleksu oko-mózg z poczwarek much: metoda izolacji tkanki siatkówki

- Na początek zabezpiecz poczwarkę muszki owocowej grzbietem lub tyłem do góry. Usuń wieczko lub przedni koniec poczwarki, aby odsłonić głowę zwierzęcia. Kontynuuj otwieranie poczwarki, odcinając i odrywając osłonkę. Po uwolnieniu przykryj rozciętą poczwarkę PBS, aby uniknąć wysuszenia. Wykonaj czyste cięcie w przekroju poprzecznym przez klatkę piersiową i usuń tylną część tuszy.

Aby odsłonić kompleks oko-mózg, który obejmuje dwie siatkówki przyczepione do płatów wzrokowych, zacznij odrywać nabłonek od rozciętej krawędzi klatki piersiowej i kontynuuj stopniowe otwieranie torebki głowy. Następnie ostrożnie poprowadź kompleks oko-mózg z dala od resztek torebki głowy.

W przykładowym protokole zobaczymy demonstrację rozwarstwienia oka i mózgu poczwarki używanej do izolowania tkanki do różnych dalszych analiz.

- Po umieszczeniu poczwarek Drosophila na czarnym naczyniu preparacyjnym, połóż świeży kawałek taśmy dwustronnej na naczyniu preparacyjnym z dala od poczwarek i użyj kleszczy, aby ostrożnie umieścić poczwarkę grzbietową stroną do góry na taśmie.

Umieść naczynie pod mikroskopem stereoskopowym i użyj kleszczy, aby usunąć wieczko z każdej poczwarki. Użyj nożyczek do mikrodysekcji, ab