JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Na początek zabezpiecz poczwarkę muszki owocowej grzbietem lub tyłem do góry. Usuń wieczko lub przedni koniec poczwarki, aby odsłonić głowę zwierzęcia. Kontynuuj otwieranie poczwarki, odcinając i odrywając osłonkę. Po uwolnieniu przykryj rozciętą poczwarkę PBS, aby uniknąć wysuszenia. Wykonaj czyste cięcie w przekroju poprzecznym przez klatkę piersiową i usuń tylną część tuszy.
Aby odsłonić kompleks oko-mózg, który obejmuje dwie siatkówki przyczepione do płatów wzrokowych, zacznij odrywać nabłonek od rozciętej krawędzi klatki piersiowej i kontynuuj stopniowe otwieranie torebki głowy. Następnie ostrożnie poprowadź kompleks oko-mózg z dala od resztek torebki głowy.
W przykładowym protokole zobaczymy demonstrację rozwarstwienia oka i mózgu poczwarki używanej do izolowania tkanki do różnych dalszych analiz.
- Po umieszczeniu poczwarek Drosophila na czarnym naczyniu preparacyjnym, połóż świeży kawałek taśmy dwustronnej na naczyniu preparacyjnym z dala od poczwarek i użyj kleszczy, aby ostrożnie umieścić poczwarkę grzbietową stroną do góry na taśmie.
Umieść naczynie pod mikroskopem stereoskopowym i użyj kleszczy, aby usunąć wieczko z każdej poczwarki. Użyj nożyczek do mikrodysekcji, aby przeciąć każdy przypadek poczwarki, umożliwiając jego rozwarcie, aby odsłonić głowę, klatkę piersiową i przedni segment brzucha, a także przymocuj krawędzie etui poczwarki do dwustronnej taśmy.
Przebij brzuch każdej poczwarki ostrymi kleszczami i wyjmij poczwarkę z etui poczwarki. Umieść poczwarkę na naczyniu preparacyjnym z dala od taśmy i przykryj poczwarkę 400 mikrolitrami lodowatego PBS. Użyj kleszczy, aby chwycić każdy z nich za brzuch i użyj nożyczek do mikrodysekcji, aby wykonać jedno czyste nacięcie w przekroju poprzecznym przez klatkę piersiową, przecinając poczwarki na pół.
Za pomocą dwóch par cienkich kleszczy chwyć przecięte krawędzie każdego nabłonka klatki piersiowej i stopniowo rozerwij torebkę klatki piersiowej i głowy, odsłaniając kompleks oko-mózg w otaczającej tkance tłuszczowej. Następnie, nie chwytając tkanki, użyj kleszczy, aby skierować każdy półprzezroczysty, białawy kompleks oko-mózg w kształcie hantli z dala od resztek torebki głowy.