Drosophila Test labiryntu Y: metoda oceny reakcji węchowych u much

- Labirynt w kształcie litery Y składa się ze złącza w kształcie litery Y z trzema fiolkami na muchy połączonymi z nim prostymi lub stożkowymi rurkami. Muchy poruszają się przez labirynt w kierunku boku z preferowanym przez siebie bodźcem. Aby rozpocząć eksperyment, umieść bibułkę z roztworem zawierającym lotne substancje chemiczne w każdej fiolce. Następnie podłącz je do stożkowych rurek. Zwężające się rurki ograniczają zdolność much do powrotu do środka labiryntu i spowalniają dyfuzję lotnych substancji chemicznych.

Następnie wyluzuj wygłodniałe muchy, aby je spowolnić. Nie należy stosować znieczulenia chemicznego, ponieważ może to wpłynąć na wynik testu. Szybko połącz fiolkę ze schłodzonymi muchami z ostatnią stroną labiryntu. Zostaw muchy, aby zbadać labirynt. Aby zmniejszyć preferencje spowodowane jasnym światłem, wykonaj ten krok w dalekim czerwonym świetle, którego muchy nie widzą. Na koniec policz muchy po obu stronach labiryntu. Ich położenie w labiryncie wskazuje na ich preferencje w kierunku tego lotnego zapachu chemicznego.

W przykładowym protokole zobaczymy konfigurację testu labiryntu Y z dzikim typem Drosophila.

- Przed przeprowadzeniem testu następnego ranka, pod koniec dnia, przenieś kohorty od 10 do 20 linii doświadczalnych do szklanych fiolek z wilgocią dostarczaną z mokrego ręcznika. Muchy muszą być testowane w ciągu 16 do 18 godzin, w przeciwnym razie mogą umrzeć z powodu wysuszenia lub głodu. Następnego dnia złóż labirynt Y. Zacznij od połączenia łącznika w kształcie litery Y z dwiema szklanymi fiolkami za pomocą piankowych łączników z przyciętymi końcówkami pipet, które tworzą przewody. Ich zwężający się kształt sprawia, że są to przejścia jednokierunkowe.

Trzecia gałąź litery "Y" jest przymocowana do rurki wprowadzającej, wykonanej z dużej części końcówki pipety, i umożliwia przejście z fiolki ładującej do wybranego punktu labiryntu. Za każdym zwężającym się tunelem znajduje się szklana fiolka, z których jedna musi być wypełniona środkiem zapachowym. Załaduj je jako bolusy o pojemności 40 mikrolitrów nasączone 28-milimetrowymi kwadratami bibuły. Który z nich zawiera środek zapachowy, powinien zmieniać się losowo.

Aby przeprowadzić test, najpierw krótko schłodzić muchy na lodzie, aby muchy zostały spowolnione. Powinno to odbywać się w dalekim czerwonym świetle żarówek LED i w temperaturze 25 stopni Celsjusza. Delikatnie wrzuć kohortę much do fiolki ładującej i załaduj labirynt Y muchami testowymi. Nie należy stosować znieczulenia gazowego.

- Bardzo ważne jest, aby przenieść muchy do fiolki ładującej zarówno szybko, jak i delikatnie. W rzeczywistości jest to najtrudniejszy etap tego eksperymentu, ponieważ muchy muszą się szybko obudzić, zanim zapachy rozprzestrzenią się w labiryncie Y.

- Muchy powinny mieć możliwość eksploracji labiryntu przez 24 godziny, aby jak największa liczba much przeniosła się do jednej lub drugiej szklanej fiolki. Liczba much obecnych w różnych rurkach służy do obliczenia indeksu węchowego. Do tej wartości należy zastosować standardowe metody statystyczne, zebrane z zachowania do 10 much.

Jeśli kohorty 10-muchowe nie dają spójnych wyników, badania można przeprowadzić z kohortami 20-muchowymi. Aby posprzątać elementy labiryntu, namocz je, zdemontowane, w RBS 35 MD na noc. Następnie spłucz je w wodzie z kranu i spłucz na koniec w wodzie DI przed suszeniem na powietrzu.