Analiza długości życia: pomiar długowieczności C. elegans

- Aby zmierzyć średnią długość życia populacji nicieni, zacznij od zsynchronizowanych rozwojowo larw L1 w buforze M9. Określ gęstość larw, a następnie dodaj 50 do każdej płytki. Przygotuj co najmniej trzy tabliczki replik dla każdego warunku, a także płyty zapasowe.

Pozwól tym robakom rozwijać się normalnie, aż osiągną stadium L4. Teraz możesz dodać FUdR do płytek, co zapobiegnie wytwarzaniu potomstwa przez robaki. Alternatywnie, będziesz musiał przenosić robaki na nowe płytki każdego dnia po policzeniu, aby upewnić się, że mierzysz żywotność tylko jednego pokolenia.

Następnie usuń wszystkie samce. Spowoduje to usunięcie zmiennych płci i krycia z eksperymentu. Następnego dnia policz liczbę żywych robaków na talerzu, szukając spontanicznego ruchu lub reakcji na delikatny dotyk. Usuń wszelkie martwe robaki i zapisz liczby. Licz ocalałe robaki codziennie, aż żaden z nich nie pozostanie. W przykładowym protokole zobaczymy demonstrację testu żywotności.

- Załaduj przygotowane talerze z nasionami bakterii po 50 zwierząt L1 każdy. Umieść płytki w inkubatorze o temperaturze 20 stopni Celsjusza, aż zarodki rozwiną się do etapu L4. Normalny rozwój od L1 do L4 trwa około 40 godzin.

Następnie, aby zapobiec produkcji potomstwa, dodaj 160 mikrolitrów 50x FUdR do każdej płytki. Następnie usuń samce, ponieważ długość życia jest zwykle mierzona tylko za pomocą hermafrodytów. Po zakończeniu przepakuj płytki do inkubatora o temperaturze 20 stopni Celsjusza.

Dopóki wszystkie robaki nie umrą, codziennie oceniaj ich żywotność. W tym celu delikatnie dotknij każdego nieruchomego nicienia na głowie platynowym drutem lub rzęsą. Zwierzęta niereagujące są martwe i muszą zostać usunięte z płytki. Zwróć uwagę na wszelkie anomalie podczas tej rutyny.