JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:25 min. • April 30th, 2023
- Eksperymenty mające na celu ilościowe określenie wysokości składania jaj ujawniły składniki neurologiczne i sygnały środowiskowe, które wpływają na to zachowanie. Zmiany w zachowaniu związanym ze składaniem jaj mogą wskazywać na toksyczne działanie na układ nerwowo-mięśniowy lub rozrodczy.
Aby przetestować toksyczność, hoduj zsynchronizowane rozwojowo jaja na płytkach pożywki wzrostowej nicieni z i bez związku będącego przedmiotem zainteresowania. Eksperymenty te wykorzystują zabity termicznie pokarm dla robaków bakteryjnych, aby zapobiec metabolizowaniu związku przez bakterie. Pozwól temu pokoleniu rosnąć, aż stanie się młodymi dorosłymi.
Następnie przenieś robaki na nowe płytki w odpowiednich warunkach kontrolnych lub doświadczalnych i pozostaw je do złożenia jaj na 24 godziny. Każdego dnia przełóż dorosłe osoby na nowy talerz i policz jajka na poprzednim talerzu. Kontynuuj, aż dorosłe osobniki przestaną nieść, około pięciu dni w przypadku robaków typu dzikiego. Oblicz liczbę jaj składanych każdego dnia na dorosłego robaka i zsumuj je na koniec eksperymentu.
W przykładowym protokole użyjemy testu składania jaj C. elegans do przetestowania etopozydu - leku chemioterapeutycznego - pod kątem toksyczności reprodukcyjnej.
- Inkubować jaja zsynchronizowane z wiekiem na płytce NGM zawierającej DMSO lub etopozyd w temperaturze 20 stopni Celsjusza przez 64 godziny, aż do stadium młodego dorosłego osobnika. Przenieś pięć dorosłych robaków na nowe płytki NGM bez chemikaliów lub nowe płytki NGM zawierające tę samą chemiczną obróbkę wstępną i inkubuj je przez 24 godziny.
Przenieś dorosłe osobniki na nowe płytki NGM, jak właśnie pokazano, i policz liczbę jaj każdego dnia. Ponadto policz robaki, które się wypełzły, umarły lub wykluły się wewnętrznie. Wykonaj obliczenia zgodnie z protokołem tekstowym.