Pomiary obszaru mięśniowego C. elegans: ustandaryzowana metoda ilościowego określania morfologii mięśni prążkowanych

- C. elegans mają dwa rodzaje mięśni. Pojedyncze mięśnie sarkomerowe lub nieprążkowane obejmują mięśnie gardła i sromu. Liczne mięśnie sarkomerowe lub ukośnie prążkowane to mięśnie ściany ciała w kształcie romboidalnym, nazwane tak od regularnego prążkowanego wzoru włókien miozyny.

Są one ułożone w naprzemienne pary jako cztery wiązki zorientowane wzdłużnie w czterech kwadrantach ciała robaka oglądanych w przekroju poprzecznym. Każda komórka ma wiele równomiernie rozmieszczonych punktów przyczepienia do tkanki podskórnej i naskórka. Taki układ pomaga przekształcić fale skurczów mięśni w płynną lokomocję.

Aby uwidocznić te mięśnie, należy zobrazować unieruchomione robaki z transgenicznie znakowaną GFP miozyną za pomocą fluorescencyjnej mikroskopii konfokalnej. Użyj oprogramowania analitycznego, aby zmierzyć obszar komórki mięśnia prążkowanego i wszelkie luki we wzorze włókien tej komórki. Luki w organizacji włókien mięśniowych mogą wskazywać na zakłócenia spowodowane degradacją włókien lub nagromadzeniem resztek komórkowych. Oblicz stosunek powierzchni przerwy do powierzchni całkowitej, aby określić wielkość zakłóceń. W przykładowym protokole ocenimy ilościowo morfologię mięśni ściany ciała na przykładzie Fidżi.

- Aby zmierzyć obszar komórek mięśniowych, otwórz obraz w oprogramowaniu Fiji i użyj opcji Zaznaczanie wielokątów, aby dokładnie prześledzić wokół pojedynczej ukośnej komórki mięśniowej. Dostosuj linię wielokąta na końcu, przeciągając kropkę zakotwiczenia, aby poprawić obrysowywanie. Przejdź do karty Analizuj w górnej części oprogramowania i kliknij przycisk Zmierz, aby obliczyć wybrany obszar.

W przypadku komórek mięśniowych ze zdegenerowanym lub brakującym regionem prześledź brakujący obszar za pomocą narzędzia do zaznaczania wielokątów i ponownie kliknij przycisk Zmierz. Jeśli jest wiele przerw, prześledź każdą z nich osobno. Oblicz stosunek obszaru przerwy do obszaru całej komórki. Wysoki współczynnik wskazuje na większy stopień zwyrodnienia mięśni, a jeśli nie ma brakujących regionów, stosunek jest obliczany jako zero.