Wirowanie w gradiencie gęstości: metoda izolowania komórek PBL z krwi obwodowej

- U pacjentów z przewlekłą białaczką limfocytową lub PBL, limfocyty komórek B znacznie zwiększają się w szpiku kostnym i krwi. Aby wyizolować te komórki PBL z próbki krwi, najpierw potraktuj próbkę ludzkim koktajlem wzbogacającym komórki B, który oddziela komórki B za pomocą selekcji negatywnej. Przeciwciała w koktajlu specyficznie rozpoznają i sieciują antygeny wyrażane przez limfocyty inne niż B i erytrocyty, tworząc gęste kompleksy.

Następnie ułóż próbkę na podłożu o gradiencie gęstości o gęstości optymalnej do izolacji limfocytów. Po kolejnym odwirowaniu różne składniki krwi rozdzielają się na podstawie zmian ich gęstości w stosunku do podłoża gradientowego. Kompleksy RBC-non-B-cell o większej gęstości osiadają w pożywce, tworząc osad. Najmniejsza frakcja osocza tworzy najwyższą warstwę. Mniej gęste komórki CLL tworzą białą warstwę na granicy faz ośrodka o dużej gęstości osocza.

Ostrożnie przenieś białą warstwę do świeżej tuby. Ponownie odwirować, aby uzyskać osad zawierający oczyszczone komórki CLL. W poniższym protokole pokazujemy izolację komórek przewlekłej białaczki limfocytowej z próbek krwi pacjenta.

- Pobranie próbek krwi obwodowej od pacjentów z przewlekłą białaczką li