Pobieranie szpiku kostnego z tylnej kończyny myszy
JoVE Encyclopedia of Experiments
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:38 min • February 9th, 2026
Loading...
Przegląd
Niniejszy artykuł przedstawia szczegółowy protokół izolacji świeżego, całkowitego szpiku kostnego z kończyn tylnych myszy, przeznaczony konkretnie do późniejszej analizy cytometrii masowej komórek linii neutrofilowej. Metoda ta została opracowana w celu ułatwienia badania defektów szpiku kostnego istotnych dla schorzeń krwi, takich jak białaczka.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Hematologia
- Immunologia
- Biologia komórki
Wprowadzenie
- Szpik kostny jest kluczową tkanką zawierającą hematopoetyczne komórki macierzyste odpowiedzialne za produkcję komórek krwi.
- Izolacja szpiku kostnego z dużych kości, takich jak kość udowa i piszczelowa, pozwala na uzyskanie wysokiej liczby komórek.
- Analiza szpiku kostnego jest niezbędna do badania populacji komórek odpornościowych oraz schorzeń krwi.
- Cytometria masowa umożliwia wysokowymiarową analizę populacji komórek, w tym komórek linii neutrofilowej.
Cel badania
- Dostarczenie powtarzalnego protokołu pozyskiwania całego szpiku kostnego z kończyn tylnych myszy.
- Umożliwienie analizy cytometrii masowej komórek linii neutrofilowej ze świeżo wyizolowanego szpiku kostnego.
- Wsparcie badań nad wadami szpiku kostnego związanymi z zaburzeniami krwi.
Zastosowane metody
- Eutanazja myszy C57 black-6 w wieku 6–10 tygodni.
- Sterylizacja pola operacyjnego 70% etanolem.
- Disekcja w celu odsłonięcia i wyizolowania kości piszczelowej oraz udowej z kończyn tylnych.
- Usunięcie tkanki mięśniowej w celu uzyskania dostępu do kości.
- Umieszczenie kości w zimnym PBS w celu zachowania żywotności komórek.
- Przygotowanie dwuwarstwowego systemu probówek do mikrocentryfugi z otworem wykonanym w wewnętrznej probówce.
- Wirowanie w celu ekstrakcji szpiku kostnego do probówki zbiorczej.
Główne wyniki
- Efektywna izolacja całego szpiku kostnego z kości udowej i piszczelowej myszy.
- Pozyskany szpik kostny nadaje się do dalszych zastosowań, takich jak cytometria masowa.
- Protokół zapewnia utrzymanie warunków fizjologicznych w celu zachowania integralności komórek.
- Umożliwia uzyskanie wystarczającej liczby komórek do analizy linii neutrofilowej oraz innych komórek krwiotwórczych.
Wnioski
- Niniejszy protokół opisuje niezawodną metodę izolacji całego szpiku kostnego z kończyn tylnych myszy.
- Zastosowane podejście umożliwia wysokiej jakości przygotowanie próbek do cytometrii masowej oraz analiz pokrewnych.
- Metoda ta znajduje zastosowanie w badaniach nad populacjami komórek krwiotwórczych i odpornościowych w stanach zdrowia i choroby.
Najczęściej zadawane pytania
Jaki szczep i wiek myszy są zalecane dla tego protokołu?
W protokole wykorzystano myszy C57 black-6 w wieku 6–10 tygodni, które są powszechnie stosowane w badaniach immunologicznych i hematologicznych.
Dlaczego do izolacji szpiku kostnego wybrano kość udową i piszczelową?
Te duże kości zapewniają wysoką wydajność komórek szpiku kostnego, co czyni je idealnymi do dalszych analiz, takich jak cytometria masowa.
W jaki sposób utrzymywana jest sterylność podczas procedury?
Pole operacyjne oraz mysz są sterylizowane 70% etanolem, a zabieg jest przeprowadzany na sterylnym podkładzie chirurgicznym przy użyciu sterylnych narzędzi.
Jaki jest cel stosowania zimnego PBS podczas izolacji kości?
Zimny PBS pomaga utrzymać warunki fizjologiczne i zachować żywotność komórek podczas procesu izolacji.
W jaki sposób szpik kostny jest pobierany z kości?
Kości umieszcza się w probówce do mikrocentryfugi z otworem w dnie, która jest włożona w większą probówkę, a następnie poddaje się wirowaniu, aby wymusić wypłynięcie szpiku w celu jego zebrania.
Do jakich zastosowań analitycznych nadaje się wyizolowany szpik kostny?
Pobrany szpik kostny nadaje się do cytometrii masowej oraz innych analiz populacji komórek odpornościowych i hematopoetycznych.
Czy ten protokół można dostosować do innych szczepów lub grup wiekowych myszy?
Choć protokół został zoptymalizowany dla myszy C57 black-6 w wieku 6–10 tygodni, można go dostosować do innych szczepów lub grup wiekowych po wprowadzeniu odpowiednich korekt.
Znaczenie przemysłowe
Efektywna izolacja całego szpiku kostnego z kończyn tylnych myszy umożliwia wysokowydajne pozyskiwanie populacji komórek krwiotwórczych i odpornościowych na etapie badań odkrywczych. Niniejszy protokół wspiera rzetelną walidację celów oraz ograniczanie ryzyka mechanistycznego w procesach badawczych z zakresu hematologii i immunologii, w szczególności w modelach schorzeń krwi. Niezawodne przygotowanie próbek stanowi podstawę pewności prognostycznej w późniejszych badaniach z zakresu cytometrii masowej oraz studiów translacyjnych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia badanie szlaków krwiotwórczych i specyfikacji linii komórek odpornościowych.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów w systemach szpiku kostnego istotnych dla przebiegu chorób.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego w portfolio badań nad zaburzeniami krwi.
Przesiewanie i opracowywanie testów
- Zapewnia zestandaryzowane, wysokowydajne preparaty komórek do ilościowych analiz cytometrii masowej.
- Gwarantuje powtarzalność i skalowalność w badaniach przesiewowych populacji komórek odpornościowych.
- Umożliwia wiarygodną ocenę wpływu związków na komórki krwiotwórcze.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodne z modelami istotnymi dla danej choroby w badaniach przedklinicznych zaburzeń krwi.
- Zapewnia ciągłość od etapu odkrycia po translacyjną analizę biomarkerów.
- Wspiera optymalizację ryzyka w rozwoju projektów z zakresu hematologii i immunologii.
Integracja potoku i przepływu pracy
Niniejszy protokół pobierania szpiku kostnego integruje etap wczesnego odkrywania z badaniami przedklinicznymi, dostarczając materiału podstawowego do identyfikacji związków wiodących oraz badań translacyjnych.
- Biologia odkrywcza: Dostarcza pierwotnych komórek do testowania hipotez i analizy szlaków w badaniach nad hematopoezą.
- Screening: Zapewnia powtarzalne, ilościowe wejścia komórkowe dla wielowymiarowych analiz cytometrycznych.
- Analityka: Umożliwia wiarygodny pomiar populacji komórek odpornościowych i analizę porównawczą warunków.
- Badania translacyjne: Łączy wyniki odkryć z preklinicznymi modelami chorób i badaniami nad biomarkerami.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Ustanawia zestandaryzowany protokół możliwy do adaptacji w programach hematologicznych i immunologicznych.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i zmniejsza niejednoznaczność mechanistyczną w badaniach nad komórkami odpornościowymi.
- Wartość operacyjna: Wspiera standaryzację, powtarzalność i skalowalność w przygotowaniu próbek.
- Wartość strategiczna: Poprawia jakość decyzji o kontynuacji lub przerwaniu badań (go/no-go) oraz efektywność kapitałową w portfelach na wczesnym etapie rozwoju.
- Wpływ na portfel: Wspiera priorytetyzację zasobów w dziedzinie hematologii i immunologii z uwzględnieniem poziomu ryzyka.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymagana jest biegłość w sekcji myszy oraz w technikach sterylnych.
- Wymagany jest dostęp do mikrocentryfug oraz infrastruktury do cytometrii masowej.
- Niezbędna jest standaryzacja międzyzespołowa w celu zapewnienia powtarzalnej jakości próbek.
- Metoda jest możliwa do dostosowania do innych szczepów lub grup wiekowych myszy poprzez modyfikację protokołu.
- Żywotność i liczba uzyskanych komórek zależą od precyzyjnej obsługi oraz stosowania schłodzonego PBS.
Najczęściej zadawane pytania dotyczące biofarmacji
Dlaczego testowanie hipotezy zerowej jest kluczowe dla walidacji defektu szpiku kostnego?
Testowanie hipotezy zerowej umożliwia obiektywną ocenę tego, czy zaobserwowane różnice w populacjach komórek szpiku kostnego są istotne statystycznie, co wspiera rygorystyczną walidację celów w badaniach hematologicznych.
W jaki sposób izolacja zmiennej niezależnej podczas pobierania kości myszy wpisuje się w proces odkrywania (discovery pipeline)?
Izolowanie zmiennych, takich jak szczep myszy, wiek i źródło kości, gwarantuje, że analizy końcowe odzwierciedlają rzeczywiste efekty biologiczne, co wzmacnia wgląd w mechanizmy w ramach wczesnych etapów procesów odkrywczych.
Co umożliwiają ilościowe pomiary zmiennych zależnych w cytometry masowej?
Ilościowe odczyty z cytometrii masowej pozwalają na precyzyjną charakterystykę populacji komórek odpornościowych i hematopoetycznych, umożliwiając rzetelne porównania między warunkami eksperymentalnymi i wspierając decyzje oparte na danych.
Dlaczego wymagania dotyczące replikacji w pobieraniu szpiku kostnego są istotne dla zespołów interdyscyplinarnych?
Replikacja zapewnia spójność wydajności komórek i profili populacyjnych, co ułatwia niezawodną wymianę danych oraz współpracę pomiędzy zespołami zajmującymi się odkryciami, przesiewaniem i badaniami translacyjnymi.
Jakie możliwości analizy statystycznej są wymagane przed wdrożeniem wyników cytometrii masowej?
Zespoły potrzebują narzędzi statystycznych do analizy rozkładów populacji komórek, oceny istotności oraz walidacji powtarzalności, aby dane z cytometrii masowej stanowiły podstawę do podejmowania konkretnych decyzji w obszarze badawczo-rozwojowym (B+R).
06:17
Osteoklasty pochodzące ze szpiku kostnego myszy
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
08:01
Sortowanie komórek aktywowane fluorescencją w celu oczyszczenia plazmocytoidalnych komórek dendrytycznych ze szpiku kostnego myszy
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
07:21
Identyfikacja i izolacja oligopotencjalnych i zaangażowanych w linię przodków szpiku szpiku
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
10:29
Indukcja choroby przeszczep przeciw gospodarzowi i monitorowanie limfocytów T in vivo z wykorzystaniem modelu mysiego dopasowanego pod kątem MHC
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
04:00
Izolacja i hodowla komórek zrębu szpiku kostnego z kości piszczelowej myszy
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
05:54
Indukcja choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi w modelach mysich za pomocą allogenicznego przeszczepu szpiku kostnego i komórek śledziony
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
07:10
Aspiracja szpiku kostnego kości udowej u żywych myszy
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
11:25
Busulfanu jako środek mielosupresyjny do generowania stabilnego chimeryzmu szpiku kostnego na wysokim poziomie u myszy
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
07:17
Mysia kończyna tylna Sekcja kości długich i izolacja szpiku kostnego
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
09:05
Generowanie dużej liczby progenitorów szpiku i prekursorów komórek dendrytycznych z mysiego szpiku kostnego przy użyciu nowej strategii sortowania komórek
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026