Negatywna selekcja immunomagnetyczna: metoda oczyszczania limfocytów B z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej

Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej lub PBMC obejmują limfocyty B, limfocyty T, komórki NK lub komórki NK oraz monocyty. Limfocyty B wytwarzają cząsteczki immunoglobuliny w celu zwalczania infekcji. W białaczce komórki te namnażają się i dają przerzuty do różnych narządów.

Aby wyizolować limfocyty B, zacznij od zawiesiny wyizolowanych PBMC. Dodaj pierwotną mieszaninę przeciwciał skierowaną przeciwko określonym cząsteczkom na powierzchni komórki, zwaną klastrem różnicowania lub CD. Specyficzne przeciwciała wiążą się z cząsteczką CD-3 na limfocytach T, cząsteczką CD-14 na monocytach i cząsteczką CD-16 na komórkach NK, pozostawiając limfocyty B nieznakowane.

Następnie umyj próbkę, aby usunąć niezwiązane przeciwciała. Dodaj do próbki wtórne mikrokulki magnetyczne sprzężone z przeciwciałami. Przeciwciała drugorzędowe wiążą się z regionem FC przeciwciał pierwszorzędowych przyłączonych do określonych komórek. Umieść probówkę zawierającą oznakowaną zawiesinę komórek pod wpływem pola magnetycznego. W polu magnetycznie znakowane komórki migrują i wiążą się ze ścianą rurki, co prowadzi do negatywnej selekcji niechcianych komórek. Zebrać supernatant zawierający wzbogacone limfocyty B do świe