JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:28 min • March 4th, 2025
Zbierz nieruchome skrawki mózgu od myszy zakażonych wirusem wścieklizny śródmózgowej w określonych odstępach czasu po sekcji zwłok.
Wirus infekuje neurony piramidowe w korze mózgowej, a ekspresja białek wirusowych lokalizuje się w wewnątrzcytoplazmatycznych strukturach ziarnistych znanych jako ciała inkluzyjne.
Potraktuj skrawki chlorkiem amonu, aby zneutralizować grupy reaktywne wywołane wiązaniem i zminimalizować barwienie tła.
Zanurz skrawki w nadtlenku wodoru, aby dezaktywować endogenną peroksydazę i zredukować niespecyficzne sygnały.
Zastosuj roztwór blokujący zawierający detergent, aby przeniknąć błony komórkowe i zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami specyficznymi dla białek wirusa.
Przemyć i inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z biotyną, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Umyj ponownie i wprowadź awidynę sprzężoną z peroksydazą, która wiąże się z biotyną, a następnie substrat chromogenny, który enzym przekształca w kolorowy produkt.
Wizualizacja immunoreaktywnych ciał inkluzyjnych zawierających białka wirusowe za pomocą mikroskopu.
Wraz ze wzrostem czasu pośmiertnego widoczna staje się degradacja neuronów i zanik ciał inkluzyjnych.