Transmisyjna mikroskopia elektronowa granulek lipofuscyny w neuronach

Zacznij od tkanki korowej z prefiksem, w której neurony zawierają granulki lipofuscyny. Te bogate w lipidy granulki gromadzą się wraz z wiekiem i są związane ze stanami neuropatologicznymi.

Potraktuj tkankę tetratlenkiem osmu, aby ustabilizować struktury komórkowe, w tym lipofuscynę.

Traktuj tkankę rosnącym stężeniem etanolu, aby ją odwodnić. Następnie zanurz go w żywicy i wytnij ultracienkie odcinki, aby odsłonić struktury neuronalne.

Zamontuj sekcję na niepowlekanej siatce miedzianej.

Zabarwić sekcję octanem uranylu, plamą z metalu ciężkiego.

Jony uranylowe oddziałują z biomolekułami komórkowymi, w tym lipidami, białkami i DNA.

Następnie zabarwić tkankę cytrynianem ołowiu, który słabo oddziałuje z wstępnie związanymi jonami uranylu, zwiększając kontrast na tle.

Umieść zabarwiony plasterek pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym, aby wystawić go na działanie skupionej wiązki elektronów.

Barwione biomolekuły wzbogacone barwnikami metali ciężkich silnie rozpraszają elektrony w porównaniu z tłem.

Granulki lipofuscyny pojawiają się jako nieregularne, gęste skupiska na jaśniejszym tle cytoplazmatycznym, co potwierdza ich obecność w neuronach.