JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:28 min • March 4th, 2025
Zacznij od płynu mózgowo-rdzeniowego lub płynu mózgowo-rdzeniowego pobranego od osób w różnym wieku.
Odwirować próbkę w celu osadzenia szczątków komórkowych i zebrania supernatantu.
Supernatant zawiera białka biorące udział w wytwarzaniu neuronów lub neurogenezie.
Weź płytkę wielodołkową pokrytą streptawidyną. Dodaj agenta blokującego, aby zapobiec niespecyficznemu powiązaniu.
Dodaj przeciwciała wychwytujące znakowane biotyną selektywnie do określonych białek związanych z neurogenezą.
Inkubować z mieszaniem w celu związania przeciwciał ze streptawidyną, a następnie umyć płytkę.
Dodaj próbkę płynu mózgowo-rdzeniowego wraz z przeciwciałami wykrywającymi znakowanymi rutenem do studzienek, a następnie inkubuj z mieszaniem.
Specyficzne białka związane z neurogenezą wiążą się, aby wychwycić przeciwciała i jednocześnie oddziaływać z przeciwciałami wykrywającymi.
Dokładnie umyj płytkę i dodaj bufor wykrywający.
Umieść płytkę w systemie obrazowania.
Bufor detekcyjny wyzwala emisję światła z rutenu.
Spadek natężenia światła w próbkach wskazuje na związane z wiekiem zmniejszenie poziomu białka związanego z neurogenezą, potwierdzając spadek neurogenezy.