Ocena równowagi i koordynacji ruchowej u myszy za pomocą równoważni

Deficyty w koordynacji ruchowej można ocenić za pomocą testu równoważni. Wydajność na belce jest określana ilościowo na podstawie prędkości, z jaką wiązka jest pokonywana, oraz liczby poślizgnięć myszy na belce.

Ogólnym celem tej procedury jest ocena koordynacji ruchowej i równowagi u myszy. Pierwszym krokiem jest zmontowanie równoważni z położeniem czujnika ruchu, aby rejestrować opóźnienie skrzyżowania wiązki, aby rozpocząć trening maer umieszczony w punkcie startowym równoważni i dopuszczony do przejścia na bezpieczną platformę. Czasami konieczne jest zachęcenie zwierzęcia wzdłuż belki w kierunku punktu końcowego.

Po 10-minutowej przerwie między próbami, maer trenował na węższej belce, aby zapewnić większą czułość. Ostatnim etapem zabiegu jest przetestowanie wyszkolonych zwierząt na belkach o różnych szerokościach. Ostatecznie można uzyskać wyniki, które wskazują na deficyty w koordynacji ruchowej i równowadze.

Cześć, nazywam się Tim Luong i jestem doktorantem na wydziale biologii w Kalifornijskim Instytucie Technologicznym. Nazywam się Holly Carlisle i jestem stażystką podoktorską w Kalifornijskim Instytucie Technologii na wydziale biologii, a dzisiaj pokażemy wam, jak ocenić równowagę i koordynację ruchową u myszy za pomocą testu równoważni. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z innymi metodami, takimi jak pręt wirnika, jest to, że test równoważni jest bardziej czuły nawet na subtelne deficyty w koordynacji ruchowej.

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie behawioralnej, takie jak to, czy nasza koordynacja ruchowa i równowaga są zaburzone w niektórych modelach chorób neurologicznych i czy nasze deficyty motoryczne są łagodzone przez określone leczenie. Celem tego testu jest zmierzenie czasu potrzebnego myszy na przejście przez wiązkę bez zatrzymywania się lub przeciągania oraz bez pytania ze strony badacza. Aby uzyskać czysty przejazd w dniu testu, trenujemy przez dwa dni przed testem.

Wizualna demonstracja tej metody jest pomocna, ponieważ sposób, w jaki myszy są obsługiwane i wspomagane w poprzek wiązki, może być trudny dla osób mniej zaznajomionych z testami behawioralnymi. Więc zacznijmy. Protokół ten opiera się na protokołach Southwell, etal i Carter etal.

Aparat montuje się poprzez oparcie belki o długości jednego metra między dwoma słupami o wysokości 50 centymetrów. Belki mają płaską powierzchnię o szerokości sześciu lub 12 milimetrów. Belki o większych szerokościach mogą być stosowane dla większych myszy i tych, które nie są w stanie przekroczyć węższych rozmiarów.

Na końcu belki umieszcza się czarną skrzynkę, a wewnątrz czarnej skrzynki umieszcza się materiał gniazdowy, aby zachęcić mysz do punktu końcowego, oświetlić punkt początkowy lampą, która posłuży jako bodziec awersyjny. Czujniki ruchu są umieszczone na zero i 80 centymetrach, aby rejestrować opóźnienie skrzyżowania wiązki, rozciągnąć nylonowy hamak poniżej belki i około 7,5 centymetra nad blatem, aby zamortyzować wszelkie upadki. Myszy użyte w tej procedurze są trzymane w 12-godzinnym cyklu jasnego i ciemnego i były aklimatyzowane przez dwa tygodnie przed badaniem.

Wprowadzono zwierzęta do pomieszczenia testowego na około 10 minut przed rozpoczęciem eksperymentu i użyto kohorty co najmniej 10 myszy na warunki testowe, aby uzyskać najlepsze wyniki. Aby rozpocząć trening, umieść mysz w miejscu startowym belki o szerokości 12 milimetrów. Odliczanie czasu rozpoczyna się, gdy nos myszy wejdzie w środek na 80 centymetrów i zatrzymuje się, gdy zwierzę osiągnie koniec 80 centymetrów.

Myszy powinny przekroczyć belkę z minimalnym zatrzymywaniem się lub zatrzymywaniem. Jeśli zwierzę przestanie poruszać się do przodu, zachęć je do kontynuowania, delikatnie szturchając je od tyłu. Gdy zwierzę pomyślnie przejdzie przez belkę, wyjmij ją z sejfu i umieść z powrotem w klatce domowej na 10 minut przed rozpoczęciem następnej sesji treningowej.

Równoważnia i skrzynka są czyszczone i przecierane 70% etanolem przed wprowadzeniem następnej myszy. Każda mysz jest trzykrotnie trenowana na wiązce o szerokości 12 milimetrów, a następnie trenowana na wiązce o szerokości sześciu milimetrów. Dodatkowy trzykrotny trening może zwiększyć występowanie przeciągania, ponieważ zwierzę lepiej zaznajamia się z zadaniem i aparaturą.

Z drugiej strony, jeśli myszy nie zdołają pomyślnie przejść całej wiązki po dwóch dniach treningu, może być wymagane dodatkowe szkolenie. Należy pamiętać o zarejestrowaniu pomiarów wyjściowych przed otrzymaniem jakiegokolwiek leczenia u zwierząt. Po zakończeniu treningu na cały dzień należy umieścić myszy w ich domowych klatkach i umieścić je w pomieszczeniu przetrzymywania.

W dniu badania przyprowadź zwierzęta do pokoju 10 minut przed rozpoczęciem eksperymentu, jak pokazano wcześniej, umieść mysz w miejscu początkowym i zapisz opóźnienie, z jakim zwierzę musi przejść przez środek wiązki na 80 centymetrów. Dane są przedstawiane jako średnia z dwóch udanych prób, w których mysz przeszła bezpośrednio do końca, bez zatrzymywania się i bez szturchania przez badacza. Nagrania wideo mogą być wykorzystane do dokładniejszej analizy poślizgnięć i innych obserwowalnych deficytów motorycznych.

W tym przykładzie od 9 do 11 tygodni czarnych myszy C 57 zostało przetestowanych na belkach o szerokości 12 milimetrów i 6 milimetrów. Średni czas przejścia przez wiązkę o szerokości 12 milimetrów wynosił 4,6 plus minus 0,4 sekundy dla mężczyzn i 3,3 plus minus 0,3 sekundy dla kobiet, czasy na sześciostek wynosiły 6,8 plus minus 0,7 sekundy dla mężczyzn i 5,9 plus minus 0,5 sekundy. Dla kobiet.

Wydajność równoważni może się różnić w zależności od wieku i obciążenia myszy. Myszy C 57 black six użyte w tym przykładzie są zazwyczaj zwierzętami aktywnymi, kilka poślizgnięć, ale nie zaobserwowano żadnych upadków u tych myszy, a zwierzęta zmodyfikowane genetycznie lub farmakologicznie mogą stać się częstsze i można je określić ilościowo. Upośledzone myszy mogą trzymać się boku belki, co wydłuża ich czas przejścia podczas próby tej procedury.

Ważne jest, aby być wytrwałym i konsekwentnym w popychaniu myszy, aby poruszały się do przodu, jeśli utkną lub rozproszą się na belce. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak trenować myszy do przekraczania równoważni oraz oceniać ich równowagę i koordynację. Dziękuję za oglądanie i mam nadzieję, że okazało się to pomocne.