Ukierunkowane dostarczanie wirusa do neuronów korowo-rdzeniowych u nowonarodzonego szczura w celu zbadania urazu rdzenia kręgowego

Zacznij od znieczulonego noworodka szczura z chirurgicznie odsłoniętym szyjnym rdzeniem kręgowym.

Szczurowi temu wstrzyknięto wirusa następcy kodującego receptor projektanta i białko fluorescencyjne, wirus atakuje neurony dróg korowo-rdzeniowych (CST) w korze somatoruchowej mózgu.

Zidentyfikuj linię środkową rdzenia kręgowego za pomocą tętnicy rdzeniowej.

Umieść szklaną igłę zawierającą wstecznego wirusa, który koduje enzym rekombinazy, za docelową blaszką rdzeniową, w której znajdują się zakończenia aksonów CST.

Opuść igłę do rdzenia kręgowego i wstrzyknij wirusa.

Pozwól wirusowi dyfundować, a następnie powoli wycofaj igłę i zszyj nacięcie.

Wirus dostaje się do końca aksonu CST i przemieszcza się wstecznie do ciała komórki, gdzie ulega ekspresji enzymu rekombinazy.

Enzym ten aktywuje transgen dostarczony przez wirusa następcy, umożliwiając ekspresję receptora projektanta i białka fluorescencyjnego tylko w podwójnie zakażonych neuronach. Metoda ta pozwala na ukierunkowaną analizę neuronów CST w urazie rdzenia kręgowego.

W przypadku bezpośrednich wstrzyknięć do rdzenia kręgowego należy użyć końcówki szklanej igły do wstrzykiwań, aby przybliżyć linię środkową rdzenia kręgowego poprzez identy