Stereotaktyczne wstrzykiwanie wirusów w celu stabilnej modyfikacji genetycznej w modelu mysim

Zacznij od znieczulonej myszy z odsłoniętą czaszką w stereotaktycznej klatce.

Opuścić uchwyt strzykawki, aż końcówka igły zrówna się z bregmą, punktem odniesienia czaszki.

Korzystając z wcześniej ustalonych współrzędnych stereotaktycznych, zlokalizuj strefę komorowo-podkomorową lub

V-SVZ, niszę neurogenną zawierającą głównie nerwowe komórki macierzyste lub NSC, i oznacz ten obszar.

Wyjąć strzykawkę i ostrożnie wywiercić mały otwór, unikając uszkodzenia mózgu.

Napełnij sterylną strzykawkę wirusami przenoszącymi transgen i umieść igłę nad powierzchnią mózgu.

Zmień położenie strzykawki i opuść ją, aż końcówka dotknie najbardziej wewnętrznej warstwy powierzchni mózgu.

Przeniknij do mózgu, aby dotrzeć do V-SVZ, powoli wstrzyknij wirusa, przytrzymaj krótko, a następnie wyjmij strzykawkę.

W V-SVZ WIRUS DOSTAJE SIĘ DO NSC poprzez fuzję błonową. Jego RNA ulega odwrotnej transkrypcji do DNA.

DNA to następnie integruje się z genomem NSC, umożliwiając stabilną modyfikację genetyczną NSC.

Po znieczuleniu sześcio- lub ośmiotygodniowa mysz goli obszar między uszami. Następnie zdezynfekuj skórę za pomocą jodoforu, takiego jak jod, powidon lub 70% etanol. Następnie ułóż zwierzę w pozycji leżącej na ramie ste