JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:30 min. • August 29th, 2025
Zacznij od znieczulonego noworodka szczura umieszczonego na poduszce grzewczej z odsłoniętym nerwem kulszowym.
Podnieś dystalne miejsce nerwu i wstrzyknij roztwór plazmidowego DNA zmieszany z barwnikiem. Barwnik pomaga śledzić dostarczanie plazmidu.
Umieść elektrodę typu pęseta wokół nerwu, zachowując niewielką szczelinę między ramionami elektrody.
Wprowadź sól fizjologiczną do tej szczeliny w celu przewodzenia prądu.
Zastosuj impuls elektryczny otaczający włókna nerwowe, który tworzy przejściowe pory błonowe w komórkach Schwanna. Następnie odwróć pozycje elektrod i zastosuj drugi impuls elektryczny. Zwiększa to wnikanie plazmidowego DNA przez pory.
Po elektroporacji błona komórkowa ponownie uszczelnia się i zatrzymuje plazmid.
Oczyść miejsce, uszczelnij nacięcie skóry, zdezynfekuj je i pozwól szczurowi dojść do siebie.
Później plazmidowe DNA przemieszcza się do jądra i integruje się z DNA komórki Schwanna, umożliwiając pomyślny transfer genów.
Delikatnie pociągnij dystalną stronę nerwu za pomocą igły, aby podnieść odsłonięty nerw. Włóż szklaną mikropipetę do dystalnego miejsca na nerwie i wstrzyknij roztwór DNA, wywierając lekki dodatni nacisk, aż nerw stanie się zielony. Następnie umieść
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych