Okulistyczne podawanie leków do nieinwazyjnej neuromodulacji w modelu mysim

Zacznij od genetycznie zmodyfikowanej myszy, której neurony hipokampa wyrażają receptory aktywowane wyłącznie przez lub DREADDs.

Te zmodyfikowane receptory selektywnie reagują na syntetyczne leki testowe, pozostając niewrażliwymi na cząsteczki endogenne.

Regularnie szoruj mysz, aby zminimalizować stres i przyzwyczaić ją do zabiegu.

Następnie zważ mysz, aby obliczyć prawidłową dawkę leku.

Podczas obsługi myszy używaj przyciemnionego czerwonego światła, aby zapobiec zakłóceniom okołodobowym.

Delikatnie potrząśnij myszką, aby ją unieruchomić.

Za pomocą pipety weź roztwór badanego leku i uformuj kroplę na końcówce. Teraz zbliż się do oka

i wypuść kroplę na jego powierzchnię.

Umieść mysz z powrotem w klatce domowej. Powtórz podawanie leku kilka razy.

Lek wchłania się przez oko i dostaje się do mózgu.

Następnie przenika przez barierę krew-mózg i dociera do obszaru hipokampa. Później wiąże się z receptorami DREADD i aktywuje neurony, umożliwiając precyzyjną, nieinwazyjną neuromodulację.

W przypadku powtarzalnego podawania CNO, rozpoczynającego się cztery tygodnie po wstrzyknięciu, należy przyzwyczaić zwierzęta do obchodzenia się z nimi, smagając każdą mysz przez trzy minuty dziennie przez trzy do czterech dni przed podaniem kropli do oczu. Kiedy myszy przyzwyczaiły się do obchodzenia się z myszami, zważ każdą mysz, aby określić odpowiednią ilość CNO, która ma być dostarczona, aby osiągnąć stężenie jednego miligrama CNO na kilogram masy ciała.

Na dwie godziny przed wyłączeniem światła w fazie nieaktywnej załaduj od jednego do trzech mikrolitrów przygotowanego roztworu CNO do mikropipety P10 i unieruchomij mysz za pomocą sfatygowania. Powoli wydalaj roztwór, aż na końcówce pipety utworzy się stabilna kropla i ostrożnie zbliż kroplę do rogówki, aż roztwór zostanie dostarczony bez dotykania końcówki pipety do oka myszy. Następnie umieść mysz z powrotem w klatce domowej przed nałożeniem kropli CNO na oko następnego zwierzęcia.

W przypadkach, gdy CNO musi być dostarczone w fazie aktywnej myszy, upewnij się, że jest słabe czerwone światło, aby zapewnić prawidłowe obchodzenie się ze zwierzętami i dostarczanie CNO.