Transdukcja wirusa w macicy u myszy

Weź mieszaninę wirusa zawierającą pożądany gen transdukcji i barwnik śledzący w buforze.

Odessać mieszaninę wirusa i barwnika do kapilary z cienką końcówką.

Weź znieczuloną ciężarną mysz z ogoloną okolicą brzucha.

Zdezynfekuj skórę etanolem, a następnie roztworem betadyny.

Wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić jamę brzuszną i umieść na niej film parafinowy.

Odsłoń rogi macicy i zalej je buforem, aby zapobiec wysuszeniu.

Zwróć uwagę na kolejność i położenie zarodków. Dostosuj położenie zarodka w worku macicy, aby uzyskać dostęp do miejsc wstrzyknięcia.

Wstrzyknąć mieszaninę wirusa i barwnika do rdzenia kręgowego i komór mózgu.

Zapewnij dokładne wstrzyknięcie, wizualizując rozkład barwnika.

Umieść rogi macicy z powrotem w jamie brzusznej i wlej trochę buforu.

Zszyj jamę brzuszną, a następnie skórę.

Wstrzyknięty wirus dostaje się do komórki gospodarza, uwalniając gen docelowy i umożliwiając jego ekspresję.

Zacznij od załadowania niestandardowej końcówki kapilarnej zawierającej cztery razy od 10 do 11 cząstek wirusa typu 1 związanego z adenowirusem dla pożądanego celu i oznaczonej barwnikiem Fast Green na probówkę aspiratora. Dodaj 15 mikrolitrów znakowanych cząstek wirusa związanego z adenowirusem do kapilary.

Następnie potwierdź brak reakcji na uszczypnięcie palca u znieczulonej embrionalnej myszy w ciąży w 14,5 dniu i zdezynfekuj skórę. Użyj zakrzywionych ząbkowanych kleszczyków tęczówki i prostych nożyczek z węglika wolframu, aby wykonać nacięcie skóry wzdłuż linii środkowej. Używając prostej pęsety Dumont, aby chwycić ścianę otrzewnej, kontynuuj wzdłuż linea alba prostymi nożyczkami Vannas i umieść kawałek fenestrowanej folii parafinowej na otworze brzusznym i użyj urządzenia przypominającego łyżkę, aby odsłonić rogi macicy bez uszkadzania zarodków wewnątrz rogów.

Po nałożeniu kilku kropli PBS o temperaturze 37 stopni Celsjusza na rogi macicy, sprawdź zarodki pod kątem uszkodzeń lub wad rozwojowych wewnątrz worka macicy. Ostrożnie obracać zarodki wewnątrz ich woreczków, aż do uzyskania pożądanej pozycji dla każdego wstrzyknięcia. Gdy zarodki są już na miejscu, wstrzyknij od jednego do dwóch mikrolitrów roztworu cząsteczek wirusa znakowanego Fast Green do każdego zarodka.

Po wstrzyknięciu wszystkich zarodków umieść rogi macicy z powrotem w jamie brzusznej i dodaj kilka kropli PBS o temperaturze 37 stopni Celsjusza do jamy brzusznej. Następnie użyj szwów poliamidowych w rozmiarze 6-0, aby zamknąć ścianę otrzewnej i szwów poliamidowych w rozmiarze 3-0 oraz kleszczyków hemostatycznych Halsted's Mosquito, aby zamknąć skórę.