Ocena interakcji między bakteriami a komórkami gospodarza za pomocą kulek biomimetycznych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:06 min. • August 29th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową zawierającą hodowlę komórek nabłonka ssaków.
W studzienkach testowych dodaj patogen bakteryjny wraz z kulkami polimerowymi sprzężonymi z białkami powierzchniowymi bakterii.
W studzienkach kontrolnych dodaj patogen i kulki pozbawione bakteryjnych białek powierzchniowych. Inkubować.
W studzienkach testowych kulki naśladują powierzchnię bakterii i konkurują z patogenem o wiązanie się z kwasem fosfatydowym błony komórkowej nabłonka, zmniejszając przyczepianie się bakterii.
W studzienkach kontrolnych koraliki nie wpływają na przyczepianie się bakterii.
Wyjmij nośnik i umyj go buforem, aby usunąć niezwiązane składniki.
Inkubuj z niejonowym detergentem, aby zlizować komórki, uwalniając bakterie i kulki przyczepione do błony.
Odpipetować lizat w celu uzyskania jednorodnej zawiesiny i seryjnie rozcieńczyć homogenat za pomocą buforu.
Przenieś rozcieńczenia na płytki agarowe, inkubuj, aby umożliwić utworzenie kolonii i policz kolonie.
Płytka testowa wykazuje mniej kolonii niż kontrole, co wskazuje na zmniejszone interakcje bakteria-gospodarz.
Przygotuj pożywkę infekcyjną, rozcieńczając kultury bakteryjne do bezbarwnego DMEM bez dodatków.
Podgrzany do 37 stopni Celsj
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych