Ocena przyczepiania się pneumokoków do pierwotnych komórek śródbłonka człowieka przy stałym przepływie pożywki

Umieść pokryty żelatyną szkiełko kanałowe, podłączony do pompy mikroprzepływowej, na stoliku mikroskopu.

Szkiełko zawiera pierwotne ludzkie komórki śródbłonka hodowane w przepływającym pożywce, z nitkami czynnika von Willebranda lub VWF, glikoproteiny, na powierzchni komórki.

Struny te są generowane przez stymulację komórek histaminą.

Kontrolowany przepływ mediów, podawany przez pompę mikroprzepływową, wspomaga wydzielanie i rozwijanie VWF. Spowoduje to uwidocznienie określonych domen powiązań w ciągach VWF.

Zatrzymaj przepływ pożywki, dodaj zielone przeciwciało swoiste swoiste dla fluoroforu i wznów przepływ, aby oznaczyć struny przeciwciałem.

Wstrzymaj przepływ pożywki i wprowadź bakterie pneumokokowe wykazujące ekspresję białka czerwonej fluorescencji.

Uruchom ponownie przepływ, aby rozprowadzić bakterie, umożliwiając przyczepienie się do odsłoniętych domen poprzez przyleganie do powierzchni.

Korzystając z mikroskopii fluorescencyjnej, wizualizuj wiązanie bakterii ze strunami w czasie rzeczywistym.

Zatrzymaj przepływ pożywki i uzyskaj obrazy stosu Z, aby określić ilościowo przyczepienie bakterii do komórek śródbłonka.

W celu wizualizacji mikroskopowej umieść jednostkę fluidyczną w komorz