JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:14 min. • September 26th, 2025
Weź monowarstwę komórek śródbłonka płuc szczura.
Umyj komórki buforem. Dodać zawiesinę Pseudomonas aeruginosa i inkubować.
Podczas inkubacji bakterie kontaktują się z komórkami i wstrzykują białka efektorowe do cytoplazmy.
Te białka efektorowe indukują rozpad mikrotubul i rozerwanie cytoszkieletu.
Zaburzenie cytoszkieletu aktywuje komórkowe reakcje na stres, prowadząc do powstania nieprawidłowo sfałdowanych, cytotoksycznych agregatów białkowych - oligomerów amyloidowych.
Białka efektorowe tworzą również pory w błonie komórkowej, umożliwiając uwalnianie oligomerów amyloidowych do przestrzeni zewnątrzkomórkowej.
Ponadto zaburzenie cytoszkieletu zmienia morfologię komórkową, tworząc luki międzykomórkowe w monowarstwie śródbłonka.
Następnie obserwuj monowarstwę pod mikroskopem świetlnym. Gdy luki międzykomórkowe staną się widoczne, zakończ inkubację.
Następnie zebrać supernatant zawierający cytotoksyczne amyloidy i odwirować w celu osadzenia szczątków.
Zebrać supernatant i przefiltrować go, aby usunąć wszelkie pozostałe bakterie.
Pobrany supernatant zawierający cytotoksyczne amyloidy jest gotowy do dalszej analizy.
Aby wytworzyć cytotoksyczny supernatant, umyj 150-centymetrowe naczynie komórek śr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych