Przygotowanie i izolacja zarodników Streptomyces venezuelae z płynnej kultury

Zacznij od kolby zawierającej źródełko i wypełnionej bogatą w składniki odżywcze pożywką, która wspiera pełny cykl życiowy bakterii Streptomyces venezuelae .

Zaszczepij zarodniki bakterii w pożywce i inkubuj z potrząsaniem, aby zapewnić prawidłowe napowietrzenie i dystrybucję składników odżywczych.

Wiosna wspomaga mieszanie, wspierając równomierny i konsekwentny wzrost.

Zarodniki wchłaniają składniki odżywcze i kiełkują, wytwarzając rurki zarodkowe, które rozciągają się na końcach, rozgałęziają się w strzępki i rozwijają się w strukturę grzybni.

Gdy składniki odżywcze stają się ograniczone, organizm wytwarza specjalne strzępki sporogeniczne, które dzielą się i wytwarzają zarodniki, uśpione komórki rozrodcze.

Obserwuj pod mikroskopem z kontrastem fazowym, aby potwierdzić obecność fragmentów grzybni i zarodników.

Odwirować kulturę, aby ogarnąć cięższe resztki grzybni, pozostawiając lżejsze zarodniki w supernatancie.

Przenieś supernatant do mikroprobówki i umieść go na lodzie, aby zapobiec przedwczesnemu kiełkowaniu.

Rozcieńczyć zawiesinę zarodników w świeżej pożywce i przechowywać ją w chłodnych warunkach do czasu dalszego użycia.

Zaszczep 30 mililitrów uzupełnionej pożywki wzrostowej 10 mikrolitrami zarodników ze szczepu S.venezuela , który ma być zobrazowany. W celu zapewnienia stałego wzrostu i zarodnikowania komórek należy użyć kolby z przegrodą lub kolby zawierającej sprężynę, aby umożliwić wystarczające napowietrzenie.

Hoduj komórki przez 35 do 40 godzin w temperaturze 30 stopni Celsjusza i 250 obr./min. Kiedy będziesz gotowy, powinieneś być w stanie zobaczyć fragmenty grzybni i zarodniki za pomocą mikroskopii z kontrastem fazowym montowanym na cieczy. Odwirować jeden mililitr kultury w wirówce stołowej przy 400 razy G przez jedną minutę, aby granulować grzybnię i większe fragmenty komórek.

Następnie przenieść około 300 mikrolitrów supernatantu zawierającego zawiesinę zarodników do nowej probówki o średnicy 1,5 milimetra i umieścić probówkę na lodzie.