Oznaczanie ilościowe alginianu bakteryjnego przy użyciu testu karbazolu z kwasem uronowym

Weź kulturę bakterii Pseudomonas aeruginosa w bulionie.

Umieść kulturę na agarze izolacyjnym i inkubuj, aby pobudzić wzrost bakterii i produkcję alginianu, egzopolisacharydu złożonego z kwasów uronowych.

Dodaj izotoniczną sól fizjologiczną do trawnika bakteryjnego i zeskrob, aby zebrać komórki bakteryjne wraz z alginianem.

Przenieś zawiesinę do probówki, zwiruj, aby rozproszyć zawartość, i umieść ją na lodzie, aby zapobiec degradacji enzymatycznej.

Zmierz gęstość optyczną lub OD, aby określić gęstość bakterii.

Dodaj zawiesinę bakteryjną do roztworu kwasowo-boranowego i wymieszaj, aby zhydrolizować alginian do monomerów kwasu uronowego.

Dodaj karbazol, odczynnik chromogenny i inkubuj. W kwaśnych warunkach odczynnik reaguje z kwasami uromonowymi, tworząc kolorowe kompleksy.

Zmierzyć absorbancję, aby określić ilościowo poziomy kwasu uronowego, które odzwierciedlają stężenie alginianów.

Korzystając z krzywej standardowej, określ stężenie alginianów, a następnie podziel je przez zmierzoną gęstość komórek bakteryjnych, aby obliczyć produkcję alginianów na jednostkę biomasy.

Aby rozpocząć test karbazolu z kwasem uronowym zidentyfikuj pojedynczą kolonię z czystej kultury pożądanego szczepu, który m