JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:30 min. • September 26th, 2025
Aby przeprowadzić badania przesiewowe pod kątem odporności bakteryjnej w różnych odmianach pomidorów, zacznij od 10-dniowych sadzonek pomidorów uprawianych w sterylnych warunkach.
Siewki te mają wyłaniające się prawdziwe liście i ugruntowane korzenie.
Zalej oba szczepy bakteriami chorobotwórczymi zmieszanymi ze środkiem powierzchniowo czynnym, aby ułatwić równomierne rozprzestrzenianie się inokulum na powierzchni rośliny. Przechyl i potrząśnij płytką, aby zmaksymalizować kontakt sadzonki z inokulum.
Usuń nadmiar inokulum, ponownie zamknij płytki i inkubuj je w komorze wzrostowej.
Bakterie dostają się przez aparaty szparkowe i kolonizują apoplast, przestrzeń zewnątrzkomórkową między komórkami liści.
Bakterie wstrzykują białka efektorowe do komórek roślinnych, aby stłumić odpowiedź immunologiczną roślin.
Wrażliwe szczepy nie wykrywają tych efektorów, co pozwala na namnażanie się bakterii i uszkodzenie tkanek roślinnych wywołane toksynami bakteryjnymi.
Oporne szczepy rozpoznają efektory i wytwarzają reaktywne formy tlenu, aby zabić bakterie.
Po inkubacji szczepy oporne wykazują trwały wzrost, podczas gdy szczepy podatne wykazują zatrzymany rozwój.
Przenieś płytki z dziesięciodniowymi sadzonkami z komory wzrostowej do szafki bezpieczeństwa biologicznego i usuń taśmę chirurgiczną. Następnie przenieś sześć mililitrów inokulum na każdą płytkę.
Delikatnie wepchnij sadzonki do inokulum za pomocą końcówki pipety i uruchom minutnik na trzy minuty. Trzymaj po jednej płytce w każdej ręce i przechyl przód talerza w dół, aby zanurzyć liścienie i liście sadzonek. Przetrząśnij inokulum na boki pięć do siedmiu razy, a następnie przechyl płytki z powrotem, aby przykryć korzenie inokulum.
Ponownie przechyl płytki w dół i powtórz cykl w sumie przez trzy minuty. Wylej inokulum z płytek, połóż je na płaskiej powierzchni i odlej resztki inokulum po raz drugi. Ponownie zawiń płytki i umieść je z powrotem w komorze wzrostowej.