JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:46 min • September 26th, 2025
Zacznij od płynnej kultury Sporosarcina pasteurii w pożywce bogatej w składniki odżywcze.
Pobrać roztwór podstawowy do wzbogacania zawierający mocznik, chlorek wapnia, chlorek amonu i wodorowęglan sodu.
Dodać część pożywki wzbogacającej do probówki do hodowli bakteryjnej.
Wiruj probówki, aby równomiernie wymieszać komórki bakteryjne i składniki odżywcze.
Inkubować wzbogacone kultury w inkubatorze bez wstrząsów.
Sporosarcina pasteurii, Gram-dodatnia bakteria glebowa, wytwarza enzym ureazę w obecności mocznika.
Ureaza rozkłada mocznik na jony amonowe i węglanowe.
Chlorek amonu i wodorowęglan sodu pomagają utrzymać zasadowe pH, które wspomaga wytrącanie się minerałów.
Jony węglanowe reagują z jonami wapnia z chlorku wapnia, tworząc nierozpuszczalny węglan wapnia.
Osad ten zaczyna tworzyć się wokół komórek bakteryjnych i krystalizuje w kalcyt, stabilną postać krystaliczną.
Kryształy te osadzają się jako białe osady na dnie probówki, wykazując mikrobiologicznie indukowane wytrącanie kalcytu lub MICP.
Przenieś dziewięć mililitrów przygotowanej płynnej kultury do kilku wysterylizowanych dziesięciomililitrowych probówek wirówkowych. Przygotować 100 mililitrów roztworu podstawowego do wzbogacania zewnętrznego, używając wagi analitycznej, aby dokładnie odmierzyć dwa gramy na litr mocznika, jeden gram na litr chlorku amonu, 212 miligramów na litr wodorowęglanu sodu i 280 miligramów na litr chlorku wapnia.
W zlewce ze świeżą pożywką połączyć wszystkie składniki z wyjątkiem mocznika i umieścić w autoklawie. Po autoklawowaniu wymieszać mocznik z jednym mililitrem świeżej pożywki i przepuścić roztwór przez strzykawkę wyposażoną w filtr 0,2 mikrometra przed dodaniem do pożywki wzbogacającej. Dodać jeden mililitr pożywki wzbogacającej z dodatkami do wysterylizowanych probówek wirówkowych zawierających dziewięć mililitrów przygotowanej kultury.
Wirować każdą probówkę i inkubować w niewstrząsającym inkubatorze w temperaturze 30 stopni Celsjusza. Regularnie monitoruj wszystkie jednostki pod kątem rozpoczęcia opadów.