Przygotowanie bioluminescencyjnej enterokrwotocznej inokulacji Escherichia coli

Zacznij od zamrożonego bulionu enterokwotocznej Escherichia coli lub EHEC, patogennej bakterii jelitowej.

Bakterie te przenoszą plazmid, który eksprymuje lucyferazy do obrazowania bioluminescencyjnego w czasie rzeczywistym oraz gen oporności na antybiotyki do selekcji.

Umieść bakterie na płytce agarowej zawierającej odpowiedni antybiotyk i inkubuj w celu wyizolowania pojedynczych kolonii zawierających plazmid.

Wybierz pojedynczą kolonię i posadź ją w bulionie uzupełnionym antybiotykami. Inkubuj w celu rozmnażania genetycznie jednolitej, stabilnej plazmidowo populacji.

Rozwiń kulturę w napowietrzanych warunkach, aby zsynchronizować komórki we wzroście logarytmicznym.

Monitoruj rozwój bakterii, aż do osiągnięcia pożądanej gęstości optycznej.

Następnie odwiruj kulturę, aby osadzać bakterie.

Usunąć supernatant i przemyć osad sterylnym roztworem soli fizjologicznej.

Ponownie odwirować. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w mniejszej objętości soli fizjologicznej.

To skoncentrowane zawiesino EHEC jest teraz gotowe do śledzenia opartego na bioluminescencji.

Na początek nałóż ujemny zapas bakterii E.coli O157 H7 EDL933 o ujemnej temperaturze 80 stopni Celsjusza zawierających plazmid lucyfe