Ocena transcytozy E. coli w monowarstwach nabłonka jelitowego

Zacznij od hodowli E. coli wyizolowanej od noworodków z infekcjami krwi.

Odwirować w celu osadzenia bakterii, wyrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w pożywce wolnej od antybiotyków.

Weź płytkę z wkładką transwell zawierającą monowarstwę komórek nabłonka jelitowego.

Zmierz opór elektryczny na całej warstwie ogniwa za pomocą sondy, aby potwierdzić integralność monowarstwy.

Dodać zawiesinę bakteryjną do wkładu i inkubować.

Bakterie przylegają do komórek nabłonka, są internalizowane w pęcherzykach i są transportowane przez komórki do dolnej studzienki w procesie zwanym transcytozą.

Ponownie zmierz opór elektryczny; Stabilna wartość potwierdza nienaruszoną monowarstwę podczas transcytozy.

Przenieś wkładkę do świeżej studzienki i zbierz podłoże z poprzedniej dolnej studzienki.

Umieść zebrane podłoże na płytce agarowej i inkubuj, aby rozwinąć kolonie bakterii.

Policz kolonie, aby określić zakres transcytozy E. coli przez barierę nabłonkową jelit.

Co 30 minut po inokulacji napełniaj nowe studzienki 500 mikrolitrami TCM bez antybiotyków i przenoś wkładki do tych nowych studzienek. Zebrać pożywkę z używanej studzienki zbiorczej dla każdej wkładki do osobnej oznakowanej probówki i umieścić prob